目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)诱导睾丸间质细胞铁死亡中RNA去甲基化酶脂肪量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)的作用及机制。方法40只3周龄C57BL/6雄性小鼠通过随...目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)诱导睾丸间质细胞铁死亡中RNA去甲基化酶脂肪量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)的作用及机制。方法40只3周龄C57BL/6雄性小鼠通过随机数字表法分为对照组(玉米油)和3组DEHP染毒组(5、250、500 mg/kg体质量),连续灌胃35 d;TM3小鼠睾丸间质细胞以0、100、200、400μmol/L邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl phthalate,MEHP)处理24 h,质粒转染构建Fto过表达TM3细胞。ELISA检测血清睾酮水平,免疫组化检测睾丸组织中蛋白表达,比色法检测睾丸中Fe 2+、丙二醛和脂质过氧化物水平。甲基化RNA免疫共沉淀、RT-PCR和Western blot检测N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平。结果250、500 mg/kg DEHP染毒组小鼠的血清睾酮水平显著降低(P<0.01),睾丸组织Fe 2+、丙二醛、脂质过氧化物水平显著升高(P<0.01),RNA去甲基化酶FTO、铁死亡相关分子铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)和谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白水平显著下调(P<0.05),转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)、膜铁转运蛋白(ferroportin,FPN)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)蛋白水平显著上调(P<0.05)。MEHP处理TM3细胞24 h后,细胞活力下降、胞内活性氧(ROS)含量升高,线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)显著降低(P<0.01),Fto的mRNA和蛋白水平均显著下调(P<0.01),其余铁死亡相关蛋白的变化也与睾丸组织中趋势一致,提示睾丸间质细胞发生了铁死亡。以铁死亡抑制剂Fer-1干预或过表达Fto均能显著抑制MEHP诱导的TM3细胞毒性和铁死亡(P<0.05),同时过表达Fto使Gpx4和Fth1 mRNA的m6A修饰水平降低(P<0.05)。结论FTO表达抑制引起Gpx4、Fth1的m6A修饰异常可能是DEHP诱导睾丸间质细胞铁死亡的机制。展开更多
目的研究跨膜蛋白196(transmembrane protein 196,TMEM196)对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法研究采用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Oncomine数据库分析TMEM196在乳腺癌中的mRNA表达。通过实时定量-聚合酶链反...目的研究跨膜蛋白196(transmembrane protein 196,TMEM196)对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法研究采用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Oncomine数据库分析TMEM196在乳腺癌中的mRNA表达。通过实时定量-聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测TMEM196在乳腺癌细胞中的表达,利用Kaplan-Meier数据库分析TMEM196对乳腺癌患者预后的影响;采用组织芯片分析TMEM196的蛋白水平和预后作用,该队列包含70例癌旁样本和160例浸润性乳腺癌样本,年龄(53.61±13.13)岁,在2001年1月至2004年8月接受手术切除,随访时间2~150个月;通过细胞增殖、划痕愈合和Transwell实验研究TMEM196对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测TMEM196对β-连环蛋白(β-catenin)和基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP7)表达的影响。结果TMEM196的mRNA水平和蛋白水平在乳腺癌中均显著降低(P<0.05),在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231和TNBC组织中最明显(P<0.05),低表达的TMEM196和较差的总体生存率(overall survival,OS)有关(HR=0.524,95%CI:0.293~0.936,P=0.040);过表达TMEM196之后能够显著抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而干扰TMEM196的表达后,能够显著增强细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);Western blot提示TMEM196能够抑制β-catenin/MMP7信号通路从而降低乳腺癌细胞的运动能力(P<0.05),加入β-catenin抑制剂后能够消除干扰TMEM196后所导致的促肿瘤作用(P<0.05)。结论TMEM196通过调节β-catenin/MMP7信号通路抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。展开更多
文摘目的研究跨膜蛋白196(transmembrane protein 196,TMEM196)对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法研究采用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Oncomine数据库分析TMEM196在乳腺癌中的mRNA表达。通过实时定量-聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测TMEM196在乳腺癌细胞中的表达,利用Kaplan-Meier数据库分析TMEM196对乳腺癌患者预后的影响;采用组织芯片分析TMEM196的蛋白水平和预后作用,该队列包含70例癌旁样本和160例浸润性乳腺癌样本,年龄(53.61±13.13)岁,在2001年1月至2004年8月接受手术切除,随访时间2~150个月;通过细胞增殖、划痕愈合和Transwell实验研究TMEM196对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测TMEM196对β-连环蛋白(β-catenin)和基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP7)表达的影响。结果TMEM196的mRNA水平和蛋白水平在乳腺癌中均显著降低(P<0.05),在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231和TNBC组织中最明显(P<0.05),低表达的TMEM196和较差的总体生存率(overall survival,OS)有关(HR=0.524,95%CI:0.293~0.936,P=0.040);过表达TMEM196之后能够显著抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而干扰TMEM196的表达后,能够显著增强细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);Western blot提示TMEM196能够抑制β-catenin/MMP7信号通路从而降低乳腺癌细胞的运动能力(P<0.05),加入β-catenin抑制剂后能够消除干扰TMEM196后所导致的促肿瘤作用(P<0.05)。结论TMEM196通过调节β-catenin/MMP7信号通路抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。
