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新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌PBP1的相互作用研究
1
作者
徐铭琦
史祥睿
+6 位作者
刘威
段浩
魏静
邓炎
江悦
高英英
李海波
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第9期912-921,共10页
目的 探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法 以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质...
目的 探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法 以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质粒转入大肠杆菌中进行表达并通过亲和层析纯化获得PBP1-39-608蛋白;利用肽聚糖侧链主干肽的硫酯类似物S2d作为底物,测定HL-J6对PBP1-39-608转肽酶活性的抑制作用;用微量热泳动技术(microscale thermophoresis,MST)检测HL-J6与PBP1-39-608的亲和力,并通过细胞热转移实验(cell thermal shift assay,CETSA)确证结合作用;分别利用AutoDock Vina和Desmond软件进行分子对接和动力学模拟,明确HL-J6与PBP1-39-608蛋白的结合模式和关键氨基酸残基。结果 成功构建pET30a-pbp1-39-608重组质粒,诱导表达后,经纯化获得相对分子质量约为65×103的PBP1-39-608蛋白;HL-J6可呈时间依赖性抑制PBP1-39-608的转肽酶活性(P<0.001);HL-J6与PBP1-39-608的结合解离常数Kd约为64.92μmol/L;分子对接结果显示HL-J6通过与ILE-348、ASN-370、THR-516、PHE-423等主要氨基酸残基相互作用结合在PBP1-39-608的活性口袋,结合评分为-8.38 kcal/mol(<-5.00 kcal/mol);动力学模拟结果显示二者结合后50 ns趋于稳定。结论 HL-J6可显著抑制金黄色葡萄球菌PBP1的转肽酶活性,并与其存在稳定的相互作用。
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关键词
金黄色葡萄球菌
青霉素结合蛋白
HL-J6
重组蛋白:相互作用
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职称材料
流感病毒感染人扁桃体类器官的免疫效应
被引量：
3
2
作者
李思琪
徐赟
+3 位作者
李红
费蕾
黄小勇
陈永文
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期978-987,共10页
目的 建立人扁桃体免疫类器官模型并探讨流感病毒感染后产生的免疫学效应。方法 经扁桃体腺样体肥大手术摘除后的人扁桃体组织在经过单个核细胞梯度离心后,利用2.5D-Transwell进行体外培养并添加IL-2及Baff等成细胞因子促扁桃体类器官(t...
目的 建立人扁桃体免疫类器官模型并探讨流感病毒感染后产生的免疫学效应。方法 经扁桃体腺样体肥大手术摘除后的人扁桃体组织在经过单个核细胞梯度离心后,利用2.5D-Transwell进行体外培养并添加IL-2及Baff等成细胞因子促扁桃体类器官(tonsil organoids, TO)的形成。通过单细胞转录组测序(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)技术,分析流感病毒细胞受体在类器官各细胞亚群的分布;体外感染流感病毒,使用免疫荧光法(IF)和流式细胞术(FCM)检测扁桃体类器官感染病毒后的免疫学效应。结果 于体外成功诱导扁桃体类器官;scRNA-seq分析结果显示流感病毒细胞受体广泛表达于所有的细胞类型中。流感病毒感染48 h后,刺激扁桃体类器官产生大量可分泌特异性IgG抗体的浆细胞和记忆性B细胞。病毒直接感染还促进CD8^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α与IL-2及CD4^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2。结论 人扁桃体类器官在体外可以被成功诱导且在培养第6天左右达到成熟;流感病毒受体广泛分布于人扁桃体类器官的各细胞亚型;流感病毒可通过受体直接感染T细胞,刺激T细胞活化并分泌细胞因子;同时流感病毒直接感染也可促B细胞分化为浆细胞分泌IgG抗体,并在后期诱导记忆性B细胞的形成。
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关键词
扁桃体类器官
流感病毒
免疫记忆
炎症因子
浆细胞
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职称材料
题名
新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌PBP1的相互作用研究
1
作者
徐铭琦
史祥睿
刘威
段浩
魏静
邓炎
江悦
高英英
李海波
机构
佳木斯
大学
临床医
学
院
陆军
军医大学
(
第三军医大学
)药
学
与检验医
学
系微生物与生化药
学
教研室
重庆
大学
药
学
院
陆军
军医大学
(
第三军医大学
)
全军
免疫
学
研究所
重庆医科
大学
附属巴南医院检验科
出处
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第9期912-921,共10页
基金
国家自然科学基金面上项目(32270988)
重庆市自然科学基金面上项目(CSTB2024NSCQ-MSX0981)。
文摘
目的 探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法 以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质粒转入大肠杆菌中进行表达并通过亲和层析纯化获得PBP1-39-608蛋白;利用肽聚糖侧链主干肽的硫酯类似物S2d作为底物,测定HL-J6对PBP1-39-608转肽酶活性的抑制作用;用微量热泳动技术(microscale thermophoresis,MST)检测HL-J6与PBP1-39-608的亲和力,并通过细胞热转移实验(cell thermal shift assay,CETSA)确证结合作用;分别利用AutoDock Vina和Desmond软件进行分子对接和动力学模拟,明确HL-J6与PBP1-39-608蛋白的结合模式和关键氨基酸残基。结果 成功构建pET30a-pbp1-39-608重组质粒,诱导表达后,经纯化获得相对分子质量约为65×103的PBP1-39-608蛋白;HL-J6可呈时间依赖性抑制PBP1-39-608的转肽酶活性(P<0.001);HL-J6与PBP1-39-608的结合解离常数Kd约为64.92μmol/L;分子对接结果显示HL-J6通过与ILE-348、ASN-370、THR-516、PHE-423等主要氨基酸残基相互作用结合在PBP1-39-608的活性口袋,结合评分为-8.38 kcal/mol(<-5.00 kcal/mol);动力学模拟结果显示二者结合后50 ns趋于稳定。结论 HL-J6可显著抑制金黄色葡萄球菌PBP1的转肽酶活性,并与其存在稳定的相互作用。
关键词
金黄色葡萄球菌
青霉素结合蛋白
HL-J6
重组蛋白:相互作用
Keywords
Staphylococcus aureus
penicillin-binding proteins
HL-J6
recombinant protein
interaction
分类号
R378.11 [医药卫生—病原生物学]
R966 [医药卫生—药理学]
R978.19 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
流感病毒感染人扁桃体类器官的免疫效应
被引量：
3
2
作者
李思琪
徐赟
李红
费蕾
黄小勇
陈永文
机构
陆军
军医大学
(
第三军医大学
)
全军
免疫
学
研究所
重庆仁品耳鼻喉医院咽喉科
出处
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期978-987,共10页
基金
国家自然科学基金面上项目(82371735)
国家自然科学基金青年科学基金(82001693)
国家重点研发计划(2023YFC2308604)。
文摘
目的 建立人扁桃体免疫类器官模型并探讨流感病毒感染后产生的免疫学效应。方法 经扁桃体腺样体肥大手术摘除后的人扁桃体组织在经过单个核细胞梯度离心后,利用2.5D-Transwell进行体外培养并添加IL-2及Baff等成细胞因子促扁桃体类器官(tonsil organoids, TO)的形成。通过单细胞转录组测序(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)技术,分析流感病毒细胞受体在类器官各细胞亚群的分布;体外感染流感病毒,使用免疫荧光法(IF)和流式细胞术(FCM)检测扁桃体类器官感染病毒后的免疫学效应。结果 于体外成功诱导扁桃体类器官;scRNA-seq分析结果显示流感病毒细胞受体广泛表达于所有的细胞类型中。流感病毒感染48 h后,刺激扁桃体类器官产生大量可分泌特异性IgG抗体的浆细胞和记忆性B细胞。病毒直接感染还促进CD8^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α与IL-2及CD4^(+)T细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2。结论 人扁桃体类器官在体外可以被成功诱导且在培养第6天左右达到成熟;流感病毒受体广泛分布于人扁桃体类器官的各细胞亚型;流感病毒可通过受体直接感染T细胞,刺激T细胞活化并分泌细胞因子;同时流感病毒直接感染也可促B细胞分化为浆细胞分泌IgG抗体,并在后期诱导记忆性B细胞的形成。
关键词
扁桃体类器官
流感病毒
免疫记忆
炎症因子
浆细胞
Keywords
human tonsil organoid
adaptive immune response
immune memory
inflammatory factors
plasma cells
分类号
R373.13 [医药卫生—病原生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392.32 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌PBP1的相互作用研究
徐铭琦
史祥睿
刘威
段浩
魏静
邓炎
江悦
高英英
李海波
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
流感病毒感染人扁桃体类器官的免疫效应
李思琪
徐赟
李红
费蕾
黄小勇
陈永文
《陆军军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
3
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已选择
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