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结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定
被引量：
2
1
作者
梁晨
姜晓霞
+10 位作者
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
樊超
庄睿
李文娟
张万江
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2013年第6期697-701,共5页
为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(...
为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。
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关键词
结核杆菌
PHOP
PhoR
pMV361
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职称材料
卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究
2
作者
樊超
姜晓霞
+10 位作者
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
梁晨
庄睿
李文娟
张万江
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2014年第2期175-179,共5页
分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸...
分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。
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关键词
原生质体制备
BCG菌株
结核分枝杆菌H37Ra菌株
影响因素
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职称材料
题名
结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定
被引量：
2
1
作者
梁晨
姜晓霞
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
樊超
庄睿
李文娟
张万江
机构
石河子大学医学院病理生理学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室
石河子大学医学院第一附属
医院
功能
科
新疆医
科
大学第五附属
医院
烧伤整形
科
新疆
阿克苏地区第二人民医院检验科
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2013年第6期697-701,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81260261
81160192
+3 种基金
81260241
81160001)
新疆兵团医药卫生专项项目(2012BA022)
石河子大学高层次人才启动项目(RCZX200922)
文摘
为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。
关键词
结核杆菌
PHOP
PhoR
pMV361
Keywords
Mycobacteriurn tuberculosis
PhoP
PhoR
pMV361
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究
2
作者
樊超
姜晓霞
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
梁晨
庄睿
李文娟
张万江
机构
石河子大学医学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室
石河子大学医学院第一附属
医院
功能
科
新疆医
科
大学第五附属
医院
烧伤整形
科
阿克苏地区第二人民医院检验科
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2014年第2期175-179,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81260261
81160192
+2 种基金
81260241
81160001)
新疆兵团医药卫生专项项目(2012BA022)
文摘
分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。
关键词
原生质体制备
BCG菌株
结核分枝杆菌H37Ra菌株
影响因素
Keywords
Formation of Protoplast
BCG strains
Mycobacterium tuberculosis H37Ra strains
Formation conditions
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定
梁晨
姜晓霞
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
樊超
庄睿
李文娟
张万江
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2013
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究
樊超
姜晓霞
张锋
王霞
吴芳
章乐
吴江东
张春军
张辉
梁晨
庄睿
李文娟
张万江
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2014
0
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