增强疏水膜半干式蛋白电泳印迹作用的实验 被引量：1

1

作者 李闻捷 Joseph-Fu SC 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期F002-F002,共1页

关键词 半干式电转移 印迹法 蛋白质 增强疏水膜

在线阅读 下载PDF 职称材料

pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响 被引量：4

2

作者 杨晓群 葛慧娟 +4 位作者 汪佳祺 余宏宇 何金 刘惠敏 蔡在龙 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期264-268,共5页

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组... 目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未转染组(164.25±9.50)相比,重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组穿膜细胞数(221.75±12.07)增多,差异具有统计学意义(P<0.05).结论人Annexin A1基因表达上调能提高结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 ANNEXIN A基因 真核表达载体 划痕修复 Transwell侵袭实验 结直肠癌 转染细胞 侵袭能力 细胞迁移 实时荧光定量

在线阅读 下载PDF 职称材料

βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立 被引量：7

3

作者 张军 黄才国 +2 位作者 李闻捷 Wei Weng 汪佳祺 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1246-1248,共3页

目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小... 目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型。方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型。采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定。结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达。结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型。 展开更多

关键词 β晶体蛋白 小鼠 基因敲除

在线阅读 下载PDF 职称材料

二硫苏糖醇对大鼠硒性白内障的抑制作用 被引量：3

4

作者 彭亚军 耿宇 +3 位作者 张军 谢伯林 李静 李闻捷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1320-1323,共4页

目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障... 目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障大鼠左眼设为对照组,右眼作药物干预组,滴眼4次/d(分别滴入生理盐水及25mmol/L的DTT),每次1滴,持续用药3周;定时对大鼠双眼散瞳作裂隙灯检查,以游标尺测量大鼠眼晶状体核性斑块最大直径变化。另取硒性白内障乳鼠分别设为DTT(n=89)、吡诺克辛(PDE,n=22)及吡诺克辛钠(PSED,n=24)干预组及生理盐水对照组(n=45),分别使用25mmol/LDTT、日本产吡诺克辛滴眼液、国产吡诺克辛钠滴眼液。滴眼4次/d(同组乳鼠左、右眼滴相同的药物或生理盐水),每次每只眼1滴(约40μl),持续用药3周。定时散瞳后,用裂隙灯检查大鼠双眼皮质病变、混浊程度。结果:(1)DTT滴眼液可以明显抑制白内障大鼠晶状体核性混浊斑块的发展;(2)DTT滴眼液可以有效降低白内障大鼠晶状体伴发皮质混浊的发生率;(3)DTT滴眼液抗硒性白内障晶状体混浊的效果优于其他临床常用的抗老年性白内障药物PDE和PSED。结论:DTT滴眼液对SD大鼠硒性白内障具有良好的抑制作用。 展开更多

关键词 二硫苏糖醇 白内障 硒 老年入

在线阅读 下载PDF 职称材料

慢性哮喘肺组织组蛋白去乙酰化酶活性降低对气道平滑肌细胞表型转变的影响 被引量：3

5

作者 胥武剑 宁允叶 +3 位作者 洪伟峻 邵艳 蔡在龙 李强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期937-941,共5页

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及... 目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及人原代支气管平滑肌细胞,采用蛋白质印迹、MTT、Transwell及三维凝胶收缩等方法检测抑制HDAC活性对气道平滑肌细胞表型转变的影响及其相应的细胞增殖、迁移、收缩能力的变化。结果慢性哮喘组小鼠肺组织HDAC活性为(0.371±0.054)μmol/(L·μg),较正常对照组的(0.603±0.034)μmol/(L·μg)显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。TSA(0.5μmol/L)作用后12～24h,体外培养的大鼠气管平滑肌环及人支气管平滑肌细胞的α-sm-actin、SM22-α表达明显增加,作用后24h及48h支气管平滑肌细胞数目分别为(1.719±0.044)×104及(1.808±0.009)×104个,明显低于空白对照组的(1.911±0.048)×104及(2.537±0.01)×104个(P<0.05)。血小板源性生长因子(PDGF)诱导的支气管平滑肌细胞迁移数也在TSA作用后显著降低(88±7.632vs52±7.5,P<0.05)。此外,TSA作用24h后的三维凝胶收缩率[(9.885±7.084)%]较空白对照组[(44.844±3.808)%]及PDGF组[(41.315±7.943)%]明显降低(P<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺部HDAC的活性下降,可能与气道平滑肌细胞向"收缩型"转变有关,但HDAC活性下降并不增加细胞的收缩能力。 展开更多

关键词 哮喘 平滑肌细胞 组蛋白脱乙酰基酶类 曲古霉素A

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同化疗耐药性卵巢癌细胞侵袭转移特性的比较 被引量：4

6

作者 王丹 陈超 惠宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期117-122,共6页

目的观察不同化疗耐药性卵巢癌细胞的侵袭转移特性,并探讨其可能机制。方法体外建立卵巢癌不同梯度顺铂(DDP)耐药细胞系模型(OVCAR-3/DDP-1、OVCAR-3/DDP-2、OVCAR-3/DDP-3);MTT法、流式细胞仪、Transwell小室观察亲本细胞和耐药细胞的... 目的观察不同化疗耐药性卵巢癌细胞的侵袭转移特性,并探讨其可能机制。方法体外建立卵巢癌不同梯度顺铂(DDP)耐药细胞系模型(OVCAR-3/DDP-1、OVCAR-3/DDP-2、OVCAR-3/DDP-3);MTT法、流式细胞仪、Transwell小室观察亲本细胞和耐药细胞的增殖、细胞周期分布、细胞侵袭和迁移等生物学特性的变化;ELISA法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的浓度。结果成功建立不同梯度顺铂耐药细胞系模型,OVCAR-3/DDP-1、DDP-2、DDP-3细胞的耐药指数依次为3.87、8.39、13.42。耐药细胞均较亲本细胞增殖缓慢,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞比较差异有统计学意义(P<0.05)。与亲本细胞相比,耐药细胞伴随其耐药性的增加,侵袭转移能力逐渐增强,其中OVCAR-3/DDP-2、DDP-3与亲本细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。细胞上清液中MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1的比值随顺铂耐药性的增加而逐渐上升,耐药细胞与亲本细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对顺铂耐药性的产生和增加可促进卵巢癌细胞的侵袭和转移,可能部分与耐药细胞MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值上调有关。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 顺铂 肿瘤抗药性 肿瘤侵袭 肿瘤转移 基质金属蛋白酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19 mRNA 被引量：2

7

作者 经纬 毕建威 +2 位作者 张军 魏国 李闻捷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期315-317,共3页

目的:应用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法。方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T S imp le载体。纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品。应用L ightCyc le荧光定量PCR仪检测标准品、3... 目的:应用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法。方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T S imp le载体。纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品。应用L ightCyc le荧光定量PCR仪检测标准品、30例正常人外周血和5例肿瘤组织CK19 mRNA。结果:PCR扩增及测序均证实CK19 cDNA片段重组到pMD 18-T载体上,建立了稳定的检测CK19 mRNA的标准,即设定CT值在35个循环之内,检测结果低于100个拷贝数量级为阴性标本。结论:采用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血CK19 mRNA是一种稳定可靠的方法。 展开更多

关键词 CK19 实时荧光定量PCR TAQMAN 胃肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

叔丁醇治疗SD大鼠硒性白内障的疗效观察 被引量：3

8

作者 李静 薛炼 +2 位作者 张军 黄才国 李闻捷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1056-1059,共4页

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴... 目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴眼(1滴/次,3～5次/d);每日进行肉眼观察,并于用药后第5日及第10日用裂隙灯显微镜观察大鼠双眼晶状体核性病变,每日用游标卡尺(最小刻度值0.02mm)测量大鼠双眼晶状体核性斑块最大直径的改变。另选未建模的SD大鼠,用100mmol/L的叔丁醇滴眼液滴眼(1滴/次,3～5次/d),观察药物有无毒性及其他不良反应。结果:硒性白内障大鼠用药眼晶状体核性混浊斑块直径小于对照眼(P<0.01);用药眼核性混浊斑块混浊程度低于对照眼;叔丁醇滴眼液毒性低,刺激性小。结论:叔丁醇滴眼液对SD大鼠硒性白内障有一定的治疗作用。 展开更多

关键词 叔丁醇 烷基化作用 亚硒酸钠 白内障

在线阅读 下载PDF 职称材料

阿司匹林对人结肠腺癌细胞LS174-T凋亡及caspase-3活性的影响 被引量：2

9

作者 孙波 拓西平 +1 位作者 张军 文军慧 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期463-463,共1页

研究发现,长期服用阿司匹林可明显降低结肠肿瘤的发病率及预防致癌剂诱发结肠癌的发生[1]。本实验观察阿司匹林对人结肠腺癌细胞LS174-T凋亡及caspase-3活性的影响,以进一步探讨其作用机制。

关键词 阿司匹林 结肠腺癌细胞 LSl74—T 细胞凋亡 caspase—3活性 影响

在线阅读 下载PDF 职称材料

有氧及乏氧训练对运动员血清脂质的影响 被引量：2

10

作者 李闻捷 张军 +2 位作者 张建荣 李国强 孙鸿雁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2062-2063,共2页

目的:探讨有氧(aerob ic)及乏氧(anaerob ic)训练对血浆脂质代谢的影响,为健身强体及运动监控提供参考依据。方法:上海市及上海体院田径队中长跑运动员,根据个人运动专长,安排相应专项训练;12名进行有氧训练,14名进行乏氧训练(高强度快... 目的:探讨有氧(aerob ic)及乏氧(anaerob ic)训练对血浆脂质代谢的影响,为健身强体及运动监控提供参考依据。方法:上海市及上海体院田径队中长跑运动员,根据个人运动专长,安排相应专项训练;12名进行有氧训练,14名进行乏氧训练(高强度快速、短距离跑),分别在训练前及运动后即刻抽静脉血,检测乳酸(LD)、葡萄糖(G lu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度胆固醇(HDL-C)、低密度胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)及载脂蛋白B(ApoB)等生化指标。结果:①乏氧及有氧组训练后LD水平均极显著升高(均P<0.01)。②两组训练均可使HDL-C及ApoAI水平升高(均为乏氧组P<0.01,有氧组P<0.05)。③有氧训练后TG水平呈下降趋势(12人中8人明显下降,4人微升高,但P>0.05)。④乏氧训练后TG水平及ApoB水平均升高(分别为P<0.01,P<0.05)。⑤训练后组间比较,乏氧组LD、G lu、TG水平明显高于有氧组(分别为P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:①无论有氧或乏氧训练,适量运动均能增加机体抵抗动脉粥样硬化的能力。②有氧训练对脂质的调节作用优于乏氧训练。 展开更多

关键词 需氧生活 厌氧生活 田径运动 脂类

在线阅读 下载PDF 职称材料

分泌型ICOS-mIg重组融合蛋白定量检测方法的建立和应用 被引量：5

11

作者 王健 沈茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期646-649,共4页

目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小... 目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法.结果: 建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8～500 μg/L,标准曲线的回归方程为: y=-0.7864+1.1635 log(x),R2=0.9911,P<0.0001.应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量.结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法.该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值. 展开更多

关键词 重组融合蛋白 ELISA 可诱导共刺激分子 免疫球蛋白恒定片段

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰高血糖素样肽2(GLP-2)促进肠切除术后大鼠小肠黏膜增殖及其与时间的相关性 被引量：2

12

作者 陈骏 蔡元坤 +3 位作者 周莹 楚晓 李小静 武景波 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期428-430,440,共4页

目的探索胰高血糖素样肽2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)促进肠切除大鼠术后残余小肠黏膜的增殖情况及其与时间的相关性。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为实验组、对照组和空白组(每组10只)。实验组和对照组建立小肠切除术模型,实验... 目的探索胰高血糖素样肽2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)促进肠切除大鼠术后残余小肠黏膜的增殖情况及其与时间的相关性。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为实验组、对照组和空白组(每组10只)。实验组和对照组建立小肠切除术模型,实验组术后每日注射GLP-2、对照组和空白组注射等量生理盐水,分别在注射当天、术后第7天和第14天分批处死大鼠,随机选取残余肠黏膜行HE染色,并计算其肠绒毛高度、厚度及陷窝深度。结果实验组较对照组、对照组较空白组在肠绒毛高度、厚度、陷窝深度的数值均有明显升高(P<0.05),且实验组第14天较第7天时数值亦有明显升高(P<0.05)。结论 GLP-2能有效改善肠切除大鼠术后小肠的黏膜增殖功能,且随着应用时间延长效能增加,并在2周后达到术前水平。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽2 肠切除 肠黏膜 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

白血病诊断电镜学的建立及其应用 被引量：2

13

作者 颜永碧 郑尊 +1 位作者 夏愿耀 陆月良 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1993年第2期183-186,共4页

诊断电镜学是针对临床某些疑难病例,应用综合电镜技术,列出可靠的常规流程,在超微结构水平上作出诊断的一门新兴应用方法学。我们经过十年来在对600多例次疑难白血病的分类诊断过程中,不断改进并统一方法,使综合电镜技术常规流程化,确... 诊断电镜学是针对临床某些疑难病例,应用综合电镜技术,列出可靠的常规流程,在超微结构水平上作出诊断的一门新兴应用方法学。我们经过十年来在对600多例次疑难白血病的分类诊断过程中,不断改进并统一方法,使综合电镜技术常规流程化,确定了可靠的诊断指标。在近三年来应用此方法学对314例次分类疑难的白血病病例进行诊断,经临床验证其确诊率,可由原来用光镜以FAB分类标准。 展开更多

关键词 白血病诊断 电镜技术 疑难病例 超微结构 流程化 分类诊断 次分类 分类标准 光镜 细胞化学

在线阅读 下载PDF 职称材料

扶正消癌Ⅰ号方对小鼠肠癌肝转移血管内皮生长因子的表达的影响 被引量：4

14

作者 张艳丽 张红卫 +1 位作者 杜鹃 侯安继 《世界中医药》 CAS 2016年第6期1066-1069,共4页

目的:观察自拟扶正消癌Ⅰ号方对balbc小鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用,探讨该方对多种肿瘤的作用机制。方法:采用balbc小鼠,脾下注射法建立鼠大肠癌细胞株肝转移的动物模型,随机分为4组,每组12只:1)阴性对照生理盐水组;2)... 目的:观察自拟扶正消癌Ⅰ号方对balbc小鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用,探讨该方对多种肿瘤的作用机制。方法:采用balbc小鼠,脾下注射法建立鼠大肠癌细胞株肝转移的动物模型,随机分为4组,每组12只:1)阴性对照生理盐水组;2)氟尿嘧啶组;3)扶正消癌I号方中药组;4)扶正消癌I号中药+氟尿嘧啶组。观察生活质量,抑瘤率,免疫组化方法检测VEGF蛋白表达的情况。结果:扶正消癌Ⅰ号方+氟尿嘧啶组、消癌Ⅰ方组小鼠的生活质量较其他2组好,阴性对照组瘤体最大,瘤体中药组其次,联合用药组体积最小,氟尿嘧啶组、中药组及联合用药组均能下调VEGF蛋白的表达。结论:扶正消癌Ⅰ号方对鼠大肠癌细胞株肝转移小鼠抑制新生血管的作用机制可能是通过下调VEGF的表达,抑制肿瘤微血管生成,可能是该方抗肿瘤的机制之一。 展开更多

关键词 中医药 血管生成 血管内皮生长因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导蜂毒素基因转染对HepG2细胞生长及 AFP表达的影响(英文) 被引量：1

15

作者 李绍祥 文军慧 凌昌全 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期143-147,共5页

目的 :将蜂毒素基因置于甲胎蛋白 (AFP)转录调控元件 (r AFP)驱动之下 ,构件重组腺病毒载体 ,观察蜂毒素基因转染对肝癌细胞生长及 AFP表达的影响。 方法 ::将蜂毒素基因置于 r AFP之后 ,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒... 目的 :将蜂毒素基因置于甲胎蛋白 (AFP)转录调控元件 (r AFP)驱动之下 ,构件重组腺病毒载体 ,观察蜂毒素基因转染对肝癌细胞生长及 AFP表达的影响。 方法 ::将蜂毒素基因置于 r AFP之后 ,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中 ,将腺病毒质粒用 Pac 酶切线性化后 ,用脂质体介导转染 2 93细胞进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后 ,RT- PCR实验观察蜂毒素基因是否发生转录 ;MTT法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响 ;EL ISA双抗体夹心法定量检测 AFP。 结果 :RT- PCR实验表明蜂毒素基因转染肝癌细胞后可以被转录 ;蜂毒素基因在 r AFP的控制下 ,可以特异性的抑制 AFP阳性肝癌细胞的增殖 ,并降低其 AFP的生成量。结论 :蜂毒素基因转染对肝癌细胞的生长及 AFP的表达具有抑制作用 。 展开更多

关键词 腺病毒介导 蜂毒素 基因转染 HEPG2细胞 AFP 基因表达 甲胎蛋白 肝癌 癌细胞生长

在线阅读 下载PDF 职称材料

可诱导共刺激分子和小鼠免疫球蛋白融合基因的分泌表达及生物学活性 被引量：1

16

作者 王健 张军 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期411-415,共5页

目的：为获得重组可诱导共刺激分子胞外段与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白（ICOS-Ig）并研究其生物学活性，以探讨它作为免疫拮抗剂阻断ICOS／B7RP-1共刺激通路的作用。方法：克隆编码人可诱导共刺激分子（ICOS）胞外片段，与编码小鼠免疫... 目的：为获得重组可诱导共刺激分子胞外段与小鼠免疫球蛋白的融合蛋白（ICOS-Ig）并研究其生物学活性，以探讨它作为免疫拮抗剂阻断ICOS／B7RP-1共刺激通路的作用。方法：克隆编码人可诱导共刺激分子（ICOS）胞外片段，与编码小鼠免疫球蛋白IgG恒定片段（Ig）的基因融合，构建ICOS-Ig融合基因及其分泌型真核表达载体pSecTag2／Hygro A-ICOS-Ig；构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株，用Western blot和ELISA法检测其表达、流式细胞仪（FACS）检测其配体结合活性、混合淋巴细胞反应（MLR）及细胞因子检测测定其生物学活性。结果：核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸与Genebank序列一致：ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达，其含量可达5～25μg／ml；该重组蛋白有配体结合活性，可体外抑制淋巴细胞增殖、减少IL-2、IFN-γ的分泌。结论：重组ICOS-Ig融合基因及其真核表达载体的构建完成并获得高效表达，该重组蛋白具有配体结合活性，可在体外通过抑制ICOS／B7RP-1共刺激通路抑制淋巴细胞增殖及细胞因子分泌。 展开更多

关键词 可诱导共刺激分子 pSecTag2/Hygro A 融合蛋白 真核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

雄激素受体和Wnt信号通路在前列腺癌中的作用 被引量：1

17

作者 盛海波 徐斌 +1 位作者 梁菁菁 刘善荣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1244-1246,共3页

Wnt信号通路的异常激活在大部分肿瘤(如前列腺癌)的发生发展中具有十分重要的作用;前列腺癌的发生发展和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)的转化关键在于雄激素受体(androgen receptor,AR),AR信号通... Wnt信号通路的异常激活在大部分肿瘤(如前列腺癌)的发生发展中具有十分重要的作用;前列腺癌的发生发展和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)的转化关键在于雄激素受体(androgen receptor,AR),AR信号通路是前列腺癌研究的主要目标。AR信号通路受许多信号通路的影响,本文主要对Wnt信号通路、AR及其相互作用在前列腺癌中的作用作一综述。 展开更多

关键词 雄激素受体 WNT信号通路 前列腺肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

晶体蛋白βB_2对眼晶体老化的影响 被引量：14

18

作者 李闻捷 Joseph-FuS.-C. 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1905-1907,共3页

目的 :探讨 βB2 水溶性蛋白含量的改变对眼晶体老化的影响。方法 :常规饲养不同年龄SD大鼠 (出生后 1d、8d、2周、8周、8个月及 1 5年 ) ;提取水溶性晶体蛋白 ,双向电泳 (等电聚焦 /SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,IEF/SDS -PAGE)得到大鼠... 目的 :探讨 βB2 水溶性蛋白含量的改变对眼晶体老化的影响。方法 :常规饲养不同年龄SD大鼠 (出生后 1d、8d、2周、8周、8个月及 1 5年 ) ;提取水溶性晶体蛋白 ,双向电泳 (等电聚焦 /SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,IEF/SDS -PAGE)得到大鼠晶体蛋白电泳图形 ;考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形 ,分别确认 βB2 及晶体内主要伴侣蛋白 (αA2 、αB2 ) ,并测定其相对含量。结果 :(1)随晶体老化 βB2 水溶性成份呈“反常”年龄依赖性升高 (r=0 938,P <0 0 1)。 (2 )伴侣蛋白αA2 及αB2 水溶性成份亦呈渐进性升高 (r =0 890 ,P <0 0 5 ;r=0 930 ,P <0 0 1)。 (3) βB2 含量的变化趋势与伴侣蛋白αA2 及αB2 密切相关 (r=0 94 9,P <0 0 1;r=0 986 ,P <0 0 1)。 (4 )接近中年期 (8周 )后 ,大鼠晶体蛋白明显产生降解或修饰成份 (双向电泳出现多个新斑点 )。结论 :根据结果推论 βB2 展开更多

关键词 晶体蛋白类 衰老 晶体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠主要水溶性晶体蛋白在老化进程中的时相变化 被引量：4

19

作者 李闻捷 Joseph-Fu S-C 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-26,共5页

目的 :研究大鼠老化进程中主要晶体蛋白相对含量的时相变化与晶体老化的关系。方法 :常规饲养不同年龄SD大鼠 (出生后 1d、8d、2周、8周、8个月及 1.5年 ) ;提取水溶性晶体蛋白 ,双向电泳 (等电聚焦 /SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,IEF/SDS ... 目的 :研究大鼠老化进程中主要晶体蛋白相对含量的时相变化与晶体老化的关系。方法 :常规饲养不同年龄SD大鼠 (出生后 1d、8d、2周、8周、8个月及 1.5年 ) ;提取水溶性晶体蛋白 ,双向电泳 (等电聚焦 /SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,IEF/SDS -PAGE)得到大鼠晶体蛋白电泳图形 ;考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形 ,分别确认各主要晶体蛋白组分并测定其相对含量百分比组成。结果 :(1)所测各组大鼠 18种主要晶体蛋白组分中 ,7种晶体蛋白相对含量呈渐进性时相改变 ,但总水溶性晶体蛋白水平未见明显变化。 (2 )晶体蛋白相对含量时相改变主要有 4种形式 :升高 (βB4 、αB2 、αA2 、βA1)、降低 (β7、β8、γ2 ,3 、γ5 ,6)、大致保持稳定 (βA3 、βB5 )及无规则性改变。 (3 )晶体蛋白 βB4/αA2比值在大鼠老化进程中呈渐进性升高。结论 展开更多

关键词 大鼠 衰老 老化进程 水溶性晶体蛋白 时相变化 晶体老化 晶状体

在线阅读 下载PDF 职称材料

半乳糖诱导白内障大鼠异常晶状体蛋白X_(36)与白内障形成的关系 被引量：2

20

作者 李闻捷 Joseph-Fu SC 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期446-448,共3页

目的 ：研究半乳糖诱导白内障大鼠异常晶状体蛋白X36的出现及其与白内障形成的关系。方法：半乳糖饲养SD大鼠，诱导白内障；选不同年龄大鼠（出生后1天、2周、8周、8个月及工．5年）作老化进程对照组；提取水溶性晶状体蛋白，双向电泳... 目的 ：研究半乳糖诱导白内障大鼠异常晶状体蛋白X36的出现及其与白内障形成的关系。方法：半乳糖饲养SD大鼠，诱导白内障；选不同年龄大鼠（出生后1天、2周、8周、8个月及工．5年）作老化进程对照组；提取水溶性晶状体蛋白，双向电泳（等电聚焦／SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳，IEF／SDS－PAGE）得到大鼠晶状体蛋白电泳图形，考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形并确认各主要晶状体蛋白组分及异常晶状体蛋白 X36结果：（1）异常晶状体蛋白X36相对分子质量约 27 000、等电点约4．5。（2）X36蛋白在对照组不同年龄大鼠的水溶性晶状体蛋白中均未出现。（3）X36蛋白在亚期及以后各期糖性白内障大鼠的眼晶状体水溶性蛋白中均有出现，且含量逐期增加。结论：半乳糖诱导大鼠白内障形成过程中出现异常晶状体蛋白X36该蛋白含量随白内障程度加重而增加，与大鼠生理性老化无关。 展开更多

关键词 晶体蛋白类 X36蛋白 白内障 半乳糖 病理学

在线阅读 下载PDF 职称材料