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题名抗OX40/EGFR双特异性抗体的制备和活性鉴定
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作者
晋瑞娜
边海波
张晓敏
杨帆
王晚萍
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机构
长治市人民医院中心实验室
长治市人民医院呼吸与危重症学科
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出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第2期296-301,共6页
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基金
山西省自然科学基金面上项目(20210302124004)
山西省卫健委项目(2022024)。
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文摘
目的构建同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和OX40的双特异性抗体,并在体外初步验证其对T细胞的特异性激活作用。方法构建抗OX40/EGFR双特异性抗体的真核表达载体,转染293F细胞进行表达和纯化。构建外源表达OX40和EGFR的HEK293T细胞,利用流式细胞术分析双抗与靶蛋白表达细胞的结合活性。并利用Jurkat-OX40-NF-κB-GFP报告细胞,验证双特异性抗体对报告细胞的激活活性。通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)分泌,进一步验证抗OX40/EGFR双抗对原代T细胞的激活。结果成功构建并且纯化了抗OX40/EGFR双特异性抗体,并且验证了该双抗可以特异性地结合表达EGFR和OX40的HEK293T细胞。在表达EGFR的A549肺癌细胞介导的交联作用下,该双特异性抗体较OX40单抗更强地激活OX40-NF-κB报告细胞,并且促进PBMC分泌IL-2和IFN-γ细胞因子。结论抗OX40/EGFR双特异性抗体构建成功,可同时识别OX40和EGFR受体并激活肿瘤特异性T细胞。
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关键词
OX40
表皮生长因子受体
双特异性抗体
癌症
T细胞激活
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Keywords
OX40
epidermal growth factor receptor(EGFR)
bispecific antibody(BsAb)
cancer
T cell activation
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分类号
R730.51
[医药卫生—肿瘤]
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