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表达BG4蛋白对人胃癌AGS细胞凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响 被引量:2
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作者 张毅强 师帅帅 +6 位作者 裴晋红 郑军 王星宇 李云飞 于波 张慧鹏 胡文庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2090-2095,共6页
目的:构建G-四链体抗体BG4基因的真核表达载体p EGFP-N1-BG4,探讨转染该真核表达载体致BG4蛋白过表达对人胃癌细胞株AGS凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响。方法:以BG4基因原核表达载体p SANG10-BG4为模板,PCR扩增出含有BG4基因的目的片段... 目的:构建G-四链体抗体BG4基因的真核表达载体p EGFP-N1-BG4,探讨转染该真核表达载体致BG4蛋白过表达对人胃癌细胞株AGS凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响。方法:以BG4基因原核表达载体p SANG10-BG4为模板,PCR扩增出含有BG4基因的目的片段,经TA克隆与p MD18-T载体连接,测序正确后,经Sac I和Pst I双酶切,与真核表达载体p EGFP-N1连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,并进行酶切分析和序列测定,Western blot鉴定BG4蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;DAPI法及HE染色检测各组细胞凋亡;q PCR和Western blot检测空白对照组、p EGFP-N1组和p EGFP-N1-BG4组端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白表达的变化。结果:酶切分析显示,目的基因条带与预期结果相符,DNA测序表明克隆的BG4基因序列正确,Western blot结果表明转染p EGFP-N1-BG4质粒可以成功表达BG4蛋白。转染p EGFP-N1-BG4质粒可抑制细胞进入S期。DAPI法及HE染色显示,p EGFP-N1-BG4组出现明显的新月形核和核固缩的细胞凋亡现象。q PCR和Western blot结果表明,p EGFPN1-BG4组端粒酶逆转录酶表达受到抑制。结论:用p EGFP-N1-BG4真核表达载体转染胃癌细胞株AGS可以抑制该细胞端粒酶逆转录酶表达,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 G-四链体 BG4 端粒酶逆转录酶 细胞凋亡 胃癌
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TNFAIP8与胃癌耐药关系的初步研究 被引量:3
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作者 李莉娜 毕志彬 王金胜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期962-964,969,共4页
目的:探讨TNFAIP8与胃癌耐药性的关系。方法:选取47例进行新辅助化疗患者手术前后的标本,免疫组化检测TNFAIP8蛋白的表达;Western blot检测胃癌细胞株SGC-7901及其顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中TNFAIP8蛋白表达差异,利用RNA干扰技术降低... 目的:探讨TNFAIP8与胃癌耐药性的关系。方法:选取47例进行新辅助化疗患者手术前后的标本,免疫组化检测TNFAIP8蛋白的表达;Western blot检测胃癌细胞株SGC-7901及其顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中TNFAIP8蛋白表达差异,利用RNA干扰技术降低顺铂耐药细胞株中TNFAIP8的蛋白表达后,MTT检测其对顺铂的敏感性有无变化。结果:TNFAIP8在新辅助化疗前后的表达差异不大,在新辅助化疗无效组中的表达较有效组高(P<0.05);SGC7901/DDP细胞中TNFAIP8蛋白的表达高于SGC7901细胞,siRNA-TNFAIP8质粒转染SGC7901/DDP细胞后蛋白表达显著下降,MTT结果显示降低TNFAIP8蛋白表达,细胞对顺铂的IC50较SGC7901/DDP显著下降(P<0.05),敏感性提高。结论:TNFAIP8参与了胃癌的化疗耐药性。 展开更多
关键词 胃癌 TNFAIP8 耐药
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