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长链非编码RNA MIAT在非小细胞肺癌中的表达及功能研究 被引量：13
1
作者 裴振 霍小蕾 +3 位作者 田向阳 张毅强 贾建桃 韩玲娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期592-598,共7页
目的:研究长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(MIAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞系中的表达情况及其对NSCLC细胞功能的影响。方法:利用Gene Expression Omnibus(GEO)数据库提取GSE19804和GSE30219数据集的生物信息学资料和临床预后资... 目的:研究长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(MIAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞系中的表达情况及其对NSCLC细胞功能的影响。方法:利用Gene Expression Omnibus(GEO)数据库提取GSE19804和GSE30219数据集的生物信息学资料和临床预后资料,分析MIAT在NSCLC组织和正常肺组织中的表达差异,以及MIAT表达水平与NSCLC患者生存期的关系;用q PCR检测25对NSCLC肿瘤组织和其癌旁组织,以及NSCLC细胞系A549、NCI-H266和NCI-H1299及人正常支气管上皮细胞系HBE中MIAT的表达情况;将MIAT si RNA(si-MIAT)和对照序列(si-NC)分别转染NSCLC细胞系A549,采用流式细胞术、CCK-8实验和细胞集落形成实验检测2组细胞的增殖情况,并且用q PCR和Western blot实验检测2组细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)的表达情况。结果:GSE19804数据集分析显示MIAT在NSCLC组织中的表达高于正常肺组织(P<0.05),GSE30219数据集分析显示MIAT高表达患者的生存期显著短于低表达患者(P<0.01)。此外,与癌旁正常组织和HBE细胞相比较,NSCLC组织和细胞系中MIAT的表达水平升高(P<0.05);si-MIAT组A549细胞中MIAT表达水平明显低于si-NC组(P<0.01),且细胞活力和细胞集落数均低于siNC组,差异均有统计学意义(P<0.05);同时,相较于si-NC组,si-MIAT组cyclin D1的表达受到明显抑制(P<0.05),而CDKN1A的表达明显升高(P<0.05)。结论:NSCLC组织及细胞系中MIAT呈高表达,沉默MIAT表达可明显抑制NSCLC恶性增殖的表型。MIAT可作为NSCLC靶向治疗的潜在靶标。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 非小细胞肺癌 细胞增殖 心肌梗死相关转录本
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长链非编码RNA LINC00467促进非小细胞肺癌细胞的增殖 被引量：5
2
作者 裴振 霍小蕾 +3 位作者 田向阳 张毅强 贾建桃 韩玲娜 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期402-408,共7页
目的研究长链非编码RNAs(Long non-coding RNAs,LncRNAs)LINC00467在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达及其对NSCLC细胞系功能的影响。方法利用高通量基因表达[Gene Expression Omnibus(GEO)]数据库... 目的研究长链非编码RNAs(Long non-coding RNAs,LncRNAs)LINC00467在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达及其对NSCLC细胞系功能的影响。方法利用高通量基因表达[Gene Expression Omnibus(GEO)]数据库提取GSE19804和GSE18842数据集的生物信息学资料,分析LINC00467在NSCLC组织和正常肺组织中的表达差异;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测收集的25对NSCLC癌组织及其癌旁组织以及NSCLC细胞系(A549、NCI-H266、NCI-H1299)和人正常支气管上皮细胞系HBE中LINC00467的表达;然后将NSCLC细胞系A549分别转染LINC00467siRNA(si-LINC00467组)和对照序列(si-NC组),分别采用流式细胞技术、CCK8和细胞克隆形成实验检测两组细胞的增殖情况,qRT-PCR和Western blot实验检测两组细胞细胞周期相关分子G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期分子细胞周期素蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达。结果 GEO公共数据库分析显示,LINC00467在NSCLC组织中的表达高于正常肺组织(P<0.05),与癌旁组织和上皮正常细胞相比较,NSCLC癌组织和细胞系中LINC00467的表达水平升高(P<0.05);A549细胞中si-LINC00467组中LINC00467表达水平明显低于si-NC组(P<0.01),且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);相较于si-NC组,si-LINC00467组CyclinD1和CDK6的表达受到明显抑制(P<0.05)。结论NSCLC组织及细胞系中LINC00467呈高表达,沉默LINC00467表达可明显抑制NSCLC恶性增殖的表型,可为NSCLC的靶向治疗提供潜在策略。 展开更多
关键词 LncRNAs 非小细胞肺癌 基因表达数据库 细胞周期蛋白-D1 细胞周期素蛋白依赖性激酶6 细胞增殖 治疗
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鼻咽癌组织p-eIF4E和p-4EBP1高表达与预后不良正相关 被引量：4
3
作者 郑军 张春燕 +2 位作者 张毅强 裴晋红 范松青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期531-535,共5页
目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-... 目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达与NPC临床病理特征及预后的相关性。结果 NPC组织中存在p-eIF4E和p-4EBP1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为74.2%(233/314)、72.9%(229/314);p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达在淋巴结转移NPC组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移NPC组织,但与性别、年龄、临床分期和组织类型无关;NPC组织中p-eIF4E与p-4EBP1蛋白表达呈正相关,且p-eIF4E和p-4EBP1蛋白阳性的NPC患者生存时间明显短于p-eIF4E和p-4EBP1阴性患者,是NPC判断预后的独立因素。结论 p-eIF4E和p-4EBP1蛋白过表达可能与NPC的发生、发展及不良预后密切相关,p-eIF4E和p-4EBP1有望成为NPC临床诊治和判断预后的分子标志物。 展开更多
关键词 磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E) 磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1) 鼻咽癌(NPC)
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表达BG4蛋白对人胃癌AGS细胞凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响 被引量：2
4
作者 张毅强 师帅帅 +6 位作者 裴晋红 郑军 王星宇 李云飞 于波 张慧鹏 胡文庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2090-2095,共6页
目的:构建G-四链体抗体BG4基因的真核表达载体p EGFP-N1-BG4,探讨转染该真核表达载体致BG4蛋白过表达对人胃癌细胞株AGS凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响。方法:以BG4基因原核表达载体p SANG10-BG4为模板,PCR扩增出含有BG4基因的目的片段... 目的:构建G-四链体抗体BG4基因的真核表达载体p EGFP-N1-BG4,探讨转染该真核表达载体致BG4蛋白过表达对人胃癌细胞株AGS凋亡和端粒酶逆转录酶表达的影响。方法:以BG4基因原核表达载体p SANG10-BG4为模板,PCR扩增出含有BG4基因的目的片段,经TA克隆与p MD18-T载体连接,测序正确后,经Sac I和Pst I双酶切,与真核表达载体p EGFP-N1连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,并进行酶切分析和序列测定,Western blot鉴定BG4蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;DAPI法及HE染色检测各组细胞凋亡;q PCR和Western blot检测空白对照组、p EGFP-N1组和p EGFP-N1-BG4组端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白表达的变化。结果:酶切分析显示,目的基因条带与预期结果相符,DNA测序表明克隆的BG4基因序列正确,Western blot结果表明转染p EGFP-N1-BG4质粒可以成功表达BG4蛋白。转染p EGFP-N1-BG4质粒可抑制细胞进入S期。DAPI法及HE染色显示,p EGFP-N1-BG4组出现明显的新月形核和核固缩的细胞凋亡现象。q PCR和Western blot结果表明,p EGFPN1-BG4组端粒酶逆转录酶表达受到抑制。结论:用p EGFP-N1-BG4真核表达载体转染胃癌细胞株AGS可以抑制该细胞端粒酶逆转录酶表达,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 G-四链体 BG4 端粒酶逆转录酶 细胞凋亡 胃癌
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DNA的G四链体抗体的制备和鉴定 被引量：1
5
作者 张毅强 兰晓瑜 +7 位作者 王爽 李美宁 刘志荣 申金雁 师帅帅 张悦红 解军 程牛亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期977-981,共5页
目的构建DNA的G四链体抗体的原核表达质粒，利用BL21（DE3）菌表达此抗体，并进行纯化及鉴定。方法化学合成DNA的G四链体抗体的基因BC,4，插入以pET-26b（＋）为骨架构建的载体pSANGl0中，构建DNA的G四链体抗体表达载体pSANGl0-BG4。以... 目的构建DNA的G四链体抗体的原核表达质粒，利用BL21（DE3）菌表达此抗体，并进行纯化及鉴定。方法化学合成DNA的G四链体抗体的基因BC,4，插入以pET-26b（＋）为骨架构建的载体pSANGl0中，构建DNA的G四链体抗体表达载体pSANGl0-BG4。以大肠杆菌B121（DE3）为宿主菌进行该抗体的自诱导表达，渗透压裂解法收集此抗体，并经His亲和层析纯化，用SDS-PAGE及Western blot法鉴定此抗体，并在SW480结肠癌细胞中验证此抗体功能。结果DNA的G四链体抗体表达载体经双酶切及基因测序鉴定构建成功。该抗体相对分子质量（M1）为30000～37000，以可溶性的形式表达于BL21菌细胞间质，表达产物与目的蛋白大小一致。结论成功制备了DNA的G四链体抗体。 展开更多
关键词 G四链体 原核表达载体 组氨酸标签
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人CYP2D6诱导小鼠自身免疫性肝炎动物模型的建立 被引量：1
6
作者 池刚 马沁雅 +1 位作者 裴晋红 冯作化 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期690-694,共5页
目的研究模拟抗原人细胞色素P450家族2亚家族D成员6(CYP2D6)和遗传背景差异的小鼠(C57BL/6和BALB/c)对自身免疫性肝炎(AIH)动物模型建立的影响。方法 C57BL/6和BALB/c小鼠尾静脉注射腺病毒及质粒p CYP2D6,用ELISA检测血清抗CYP2D6抗体... 目的研究模拟抗原人细胞色素P450家族2亚家族D成员6(CYP2D6)和遗传背景差异的小鼠(C57BL/6和BALB/c)对自身免疫性肝炎(AIH)动物模型建立的影响。方法 C57BL/6和BALB/c小鼠尾静脉注射腺病毒及质粒p CYP2D6,用ELISA检测血清抗CYP2D6抗体和抗肝蛋白自身抗体水平; HE染色检测肝脏AIH炎症程度,天狼猩红染色检测肝纤维化的程度;微孔板法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)的水平。结果腺病毒促进人CYP2D6诱导C57BL/6小鼠产生抗肝蛋白自身抗体、并引起AIH和肝纤维化,而在BALB/c小鼠中,仅产生针对人CYP2D6的抗体,而无抗肝蛋白自身抗体、不产生AIH和肝纤维化。结论在腺病毒存在下,模拟抗原人CYP2D6在肝脏中的持续表达可以诱导C57BL/6小鼠产生AIH,但是无法诱导BALB/c小鼠产生AIH,不同品系小鼠的遗传背景可能影响着AIH的发生发展。 展开更多
关键词 分子模拟 遗传背景 自身免疫性肝炎(AIH) 动物模型
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胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表达的临床意义 被引量：5
7
作者 郑军 张春燕 +2 位作者 张毅强 马丽莉 裴晋红 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1078-1081,共4页
目的探讨eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在168例胃癌和52例癌旁胃组织中的表达。结果 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁胃组织(P=... 目的探讨eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在168例胃癌和52例癌旁胃组织中的表达。结果 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁胃组织(P=0.001,P=0.000);有淋巴结转移的胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白阳性率高于无淋巴结转移的胃癌(P=0.025,P=0.001);临床Ⅲ+Ⅳ期胃癌eIF-4E和p-4EBP-1蛋白阳性率高于临床Ⅰ+Ⅱ期胃癌(P=0.001,P=0.049);胃癌组织中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表达呈显著正相关(r=0.432,P<0.01);eIF-4E蛋白阴性胃癌患者生存时间明显高于阳性患者(P=0.012)。结论 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白共阳性可能在胃癌的发生、发展和侵袭转移过程中起重要作用,有望成为胃癌判断预后及诊治的新分子靶标。 展开更多
关键词 胃肿瘤 EIF-4E p-4EBP-1
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