水貂出血性肺炎病原分离与生物学特性分析

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作者 张国军 杨延梅 +7 位作者 张嘉桐 杨举 吴金 高玉龙 王殿永 王婷婷 赵传芳 张媛媛 《特产研究》 2022年第6期1-7,共7页

水貂出血性肺炎是严重危害水貂健康的一类传染病,其中最主要的病原为铜绿假单胞菌。本研究对近些年流行于河北、山东及辽宁等地的水貂出血性肺炎的疑似铜绿假单胞菌感染病料进行了病原分离、鉴定,以便充分了解该类疫病病原的流行情况,... 水貂出血性肺炎是严重危害水貂健康的一类传染病,其中最主要的病原为铜绿假单胞菌。本研究对近些年流行于河北、山东及辽宁等地的水貂出血性肺炎的疑似铜绿假单胞菌感染病料进行了病原分离、鉴定,以便充分了解该类疫病病原的流行情况,为防控提供可靠科学依据。通过常规细菌分离鉴定方法分离病原,以玻片凝集反应鉴定其血清型,对分离菌株分别进行动物回归试验、毒力试验、免疫原性试验及攻毒保护试验。结果获得15株铜绿假单胞菌,分别命名为PA1~PA15,其中14株为血清G型,占93.3%,1株为血清B型,占6.7%。通过毒力试验确定致病菌株,然后分别进行了本动物回归试验、免疫原性试验及攻毒保护试验。致病力最强的1株为血清G型(PA4株,暂命名为DL1007株),肌肉注射致死率可达100%(5/5),经灭活后采用一定剂量免疫水貂后并攻毒,可对致死剂量菌株产生全部保护(5/5存活)。此次疑似水貂出血性肺炎病料分离的病原为铜绿假单胞菌,毒力最强株(DL1007)的自制疫苗对水貂具有较强的免疫保护作用。该毒株可作为后续水貂铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌与巴氏杆菌三联灭活疫苗研制的候选株。 展开更多

关键词 水貂 出血性肺炎 免疫原性 疫苗株

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头孢菌素类抗生素在骆驼体内的药动学研究进展

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作者 散仁 董鹏 +4 位作者 朝博 崔永强 赵健 红英 刘楠 《山东畜牧兽医》 2024年第9期99-103,共5页

本文为有效防治骆驼感染性疾病和临床合理用药提供科学依据,在大量查阅头孢菌素类药物头孢噻呋、头孢曲松、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟和头孢喹肟在骆驼体内的药动学研究文献资料的基础上,对其进行了认真分析和汇总。主要从头孢菌素... 本文为有效防治骆驼感染性疾病和临床合理用药提供科学依据,在大量查阅头孢菌素类药物头孢噻呋、头孢曲松、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟和头孢喹肟在骆驼体内的药动学研究文献资料的基础上,对其进行了认真分析和汇总。主要从头孢菌素类药物头孢噻呋、头孢曲松、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟和头孢喹肟的理化特性、作用机理以及它们在骆驼体内的药代动力学特征等方面加以综述,并为骆驼临床合理用药、提高抗菌药物疗效以及骆驼专用新剂型的研发等方面提出了见解。 展开更多

关键词 骆驼 药动学 头孢菌素类抗生素

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谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用 被引量：3

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作者 徐亚维 闫岗林 +4 位作者 龚平生 牟颖 罗贵民 杨佳 吕绍武 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期329-332,共4页

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表... 考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤. 展开更多

关键词 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) 模拟物 6-CySeCD 过氧化氢 成纤维细胞

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埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 曹增国 王化磊 +11 位作者 盖微微 郑学星 金宏丽 李岭 王丽娜 冯娜 赵永坤 王铁成 高玉伟 毕玉海 杨松涛 夏咸柱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期615-619,共5页

为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结... 为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相比较,进一步评价EBOV抗体ELISA检测方法在EBOV免疫血清抗体水平检测中的应用。优化后的间接ELISA方法可特异性检测EBOV抗体,与西尼罗病毒等的阳性血清均不发生反应,检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相平行。批内、批间试验变异系数均小于8%。本研究成功建立了EBOV抗体间接ELISA检测方法,为EBOV免疫血清抗体水平检测提供了一种简便、快速的检测方法。 展开更多

关键词 埃博拉病毒 糖蛋白(GP) 间接ELISA 抗体检测

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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究 被引量：2

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作者 李健明 杨宇航 +5 位作者 王慧慧 曾范利 时坤 张妍 刘菲 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期146-149,共4页

为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。... 为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E2基因 重组卡介苗

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水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究 被引量：3

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作者 罗国良 王振军 +7 位作者 冯二凯 易立 郭利 程悦宁 程世鹏 王守富 王宏正 张洪亮 《特产研究》 2019年第1期22-25,共4页

制备了水貂犬瘟热活疫苗(以下简称犬瘟活疫苗)与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(以下简称肠炎灭活苗)各3批,通过半成品及成品检验结果显示,生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定。通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗,实现2种疫苗联合(简称联合疫... 制备了水貂犬瘟热活疫苗(以下简称犬瘟活疫苗)与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(以下简称肠炎灭活苗)各3批,通过半成品及成品检验结果显示,生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定。通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗,实现2种疫苗联合(简称联合疫苗)后,体外接种Vero细胞,采用专用稀释液稀释的犬瘟活疫苗作对照,在25℃存放条件下,5 h内两者的犬瘟热病毒含量无明显差异,表明该方法对犬瘟热病毒的存活无明显影响。将联合疫苗免疫水貂10只,犬瘟活疫苗、肠炎灭活苗分别免疫10只水貂作为单苗对照组,免疫后21 d采血,测定3组的抗体水平,联合疫苗组的犬瘟热病毒中和抗体和细小病毒HI抗体分别与对应单苗的抗体水平无明显差异,表明联合疫苗具有与单苗相当的免疫效力。该研究为进一步研发水貂犬瘟活疫苗与肠炎灭活苗联苗奠定了基础。 展开更多

关键词 水貂犬瘟热活疫苗 水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗 联合免疫

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弓形虫GRA6-GRA2蛋白表达及检测应用 被引量：1

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作者 张宁 刘伟 +5 位作者 吴铭洁 夏霖亚 王蕾 殷玉和 石晶 吴丛梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期91-98,共8页

为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯... 为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯化后,经Western blot鉴定三种蛋白表达产物都有较好的抗原特异性;通过ELISA方法进行检测比较,确定GRA6-GRA2蛋白敏感性最高;以GRA6-GRA2蛋白作为标记抗原,制备弓形虫抗体检测试纸条,分别对敏感性对照阳性血清、特异性对照血清进行检测,并与弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清进行对比检测。结果表明:检测敏感性对照阳性血清可检测至1∶256,检测临床常见的猫细小病毒阳性血清、猫杯状病毒阳性血清和猫疱疹病毒阳性血清结果均为阴性;在弓形虫抗体检测试纸条和弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清的对比检测中,阳性率分别为2.42%和2.07%,符合率为99.5%。通过以上结果可知,采用GRA6-GRA2蛋白作为诊断抗原制备的胶体金试纸,具有良好的敏感性和特异性,为弓形虫病的快速诊断提供了切实可行的检测手段。 展开更多

关键词 弓形虫 抗原 GRA6-GRA2蛋白

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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E_2基因重组卡介苗的构建

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作者 时坤 王文玉 +3 位作者 王慧慧 曾范利 李健明 杜锐 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期32-35,共4页

本试验将成功克隆的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因与大肠杆菌-分枝杆菌整合表达载体pMV361连接,构建重组整合质粒pMV361-E2。并确定了电转化的最佳条件:2.0 kV/cm、25μF、1 000Ω,成功获得了E2基因重组卡介苗。在45℃... 本试验将成功克隆的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因与大肠杆菌-分枝杆菌整合表达载体pMV361连接,构建重组整合质粒pMV361-E2。并确定了电转化的最佳条件:2.0 kV/cm、25μF、1 000Ω,成功获得了E2基因重组卡介苗。在45℃下热诱导E2基因在重组卡介苗中的表达,通过SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,结果显示,在44 kD处出现目的条带,符合E2基因表达蛋白的大小,表明牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中成功表达。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E2基因 重组卡介苗 构建

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甘草中甘草查尔酮A含量测定方法的建立 被引量：1

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作者 崔玉梅 刘厚如 +4 位作者 刘伟 陈宪平 付玉 张馨月 邓旭明 《中兽医医药杂志》 2020年第1期64-66,共3页

建立HPLC法测定中药甘草中甘草查尔酮A含量的方法。首先确定HPLC法测定甘草查尔酮A的流动相、波长和理论板数,后通过单因素筛选和正交试验确定供试品制备方法。结果表明,HPLC法测定甘草中甘草查尔酮A的流动相为甲醇-水(70∶30),波长379 ... 建立HPLC法测定中药甘草中甘草查尔酮A含量的方法。首先确定HPLC法测定甘草查尔酮A的流动相、波长和理论板数,后通过单因素筛选和正交试验确定供试品制备方法。结果表明,HPLC法测定甘草中甘草查尔酮A的流动相为甲醇-水(70∶30),波长379 nm,理论板数按甘草查尔酮A峰计算应不低于6000。供试品的制备方法为取本品粉末约0.25 g,精密称定,加入甲醇100 m L,密塞,超声处理(功率250 W,频率99 kHz)60 min,冷却,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,即得。结果表明,本研究所建立的方法操作简便、结果准确、重复性好。 展开更多

关键词 甘草 甘草查尔酮A HPLC 供试品溶液制备

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水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联灭活疫苗制备及其质量评价

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作者 罗国良 钟伟 +10 位作者 易立 王振军 冯二凯 刘志杰 焉石 刘钰伦 刘伟 姜秋杰 董清平 李斌茹 程悦宁 《特产研究》 2022年第5期7-11,共5页

本研究制备了水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联灭活疫苗3批,通过病毒液检验、半成品检验及成品检验,显示所生产的灭活疫苗工艺稳定,批间差异小,成品接种水貂安全无副反应;采用血清抗体测定和免疫攻毒方法对3批灭活二联苗进行免疫效果研究... 本研究制备了水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联灭活疫苗3批,通过病毒液检验、半成品检验及成品检验,显示所生产的灭活疫苗工艺稳定,批间差异小,成品接种水貂安全无副反应;采用血清抗体测定和免疫攻毒方法对3批灭活二联苗进行免疫效果研究,结果显示,免疫接种21 d,水貂犬瘟热中和抗体可达1:51~1:91,水貂细小病毒HI抗体可达1:64~1:256,经免疫攻毒,可抵抗100 ID_(50)的犬瘟热强毒和水貂细小病毒强毒的攻击,具有较好的免疫效果。 展开更多

关键词 水貂犬瘟热灭活疫苗 水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗 质量评价

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二种狂犬病抗体检测方法的应用比较

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作者 金颜辉 夏晓红 +4 位作者 杨佳 吴波平 许先明 林芬 黄雁 《福建畜牧兽医》 2011年第5期23-24,共2页

狂犬病又称＂疯狗病＂,早在公元前四世纪即有记载,狂犬病在我国大部分地区也曾发生和流行过,造成很大的经济损失。狂犬病病毒属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus），

关键词 狂犬病病毒 抗体检测方法 应用 经济损失 弹状病毒 狗病

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犬细小病毒VP2蛋白特点及病毒样颗粒疫苗制备研究进展 被引量：6

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作者 杨媛茹 焦雪 +3 位作者 宋维林 刘许峰 汪惠庆 李月红 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3286-3293,共8页

犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-... 犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-端结构域和环结构域中含有几个重要的B细胞表位,可在CPV感染过程中诱导产生有效的中和抗体。因此,在开发CPV基因组亚单位疫苗中,VP2蛋白可作为候选抗原的首选。病毒样颗粒(VLPs)与天然病毒相似,但不具备天然病毒的复制功能引起机体发生感染,故近几年来利用不同的表达系统组装VP2蛋白一直是研究者们研究的重点。笔者着重对CPV VP2蛋白的特点及构象进行分析,通过特点分析得知CPV衣壳的主要成分中含有VP2,不但具有血凝活性,还与CPV的宿主范围和抗原性密切相关,因此,有活性的VP2蛋白在CPV基因工程亚单位疫苗的开发中极其重要。通过构象分析得知CPV VP2蛋白环状结构(Flexible loop)具有更大的灵活性,这可能是CPV感染宿主范围不断扩大的分子基础。同时笔者对VLPs疫苗的制备方法及优缺点进行讨论,以期为CPV疫苗的研究制备提供有利的参考和科学依据。 展开更多

关键词 犬细小病毒(CPV) 病毒样颗粒(VLPs) 疫苗 VP2蛋白

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一种犬细小病毒基因工程抗体的制备

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作者 李希辰 雷欢 +3 位作者 李雪 石晶 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期3042-3051,共10页

本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体... 本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG 2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10^11 L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2^4和1∶2^6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。 展开更多

关键词 犬细小病毒(CPV) 基因工程抗体 共转染 HEK-293F细胞

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含兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的兔三联灭活疫苗的研究

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作者 韩水仲 陈凌燕 +7 位作者 白晨雨 王同燕 黄玉欣 宋欢欢 张浩浩 石晶 邓均华 田克恭 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期14-18,共5页

为研究兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白形成的病毒样颗粒联合多杀性巴氏杆菌(Pm)、产气荚膜梭菌(Cp)的免疫效果,将3种抗原与铝胶佐剂混合制成三联灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果表明,3批疫苗以4.0 mL/只免... 为研究兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白形成的病毒样颗粒联合多杀性巴氏杆菌(Pm)、产气荚膜梭菌(Cp)的免疫效果,将3种抗原与铝胶佐剂混合制成三联灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果表明,3批疫苗以4.0 mL/只免疫兔未见任何不良反应;对兔的最小免疫剂量为1.0 mL/只,免疫后14日,血清RHDV HI效价为1∶16~1∶64,攻毒后免疫兔均健活(5/5);免疫后21 d,用Pm和Cp分别攻毒,免疫兔80%以上(4/5~5/5)保护;免疫持续期可达210 d。RHDV VP60蛋白形成的病毒样颗粒可与Pm、Cp联合制备疫苗,解决了传统RHDV组织灭活苗生产过程存在的生物安全风险问题,同时实现了一针三防。 展开更多

关键词 兔出血症病毒 VP60蛋白病毒样颗粒 多杀性巴氏杆菌 产气荚膜梭菌 灭活疫苗

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