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埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 曹增国 王化磊 +11 位作者 盖微微 郑学星 金宏丽 李岭 王丽娜 冯娜 赵永坤 王铁成 高玉伟 毕玉海 杨松涛 夏咸柱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期615-619,共5页
为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结... 为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相比较,进一步评价EBOV抗体ELISA检测方法在EBOV免疫血清抗体水平检测中的应用。优化后的间接ELISA方法可特异性检测EBOV抗体,与西尼罗病毒等的阳性血清均不发生反应,检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相平行。批内、批间试验变异系数均小于8%。本研究成功建立了EBOV抗体间接ELISA检测方法,为EBOV免疫血清抗体水平检测提供了一种简便、快速的检测方法。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 糖蛋白(GP) 间接ELISA 抗体检测
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甘草中甘草查尔酮A含量测定方法的建立 被引量:1
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作者 崔玉梅 刘厚如 +4 位作者 刘伟 陈宪平 付玉 张馨月 邓旭明 《中兽医医药杂志》 2020年第1期64-66,共3页
建立HPLC法测定中药甘草中甘草查尔酮A含量的方法。首先确定HPLC法测定甘草查尔酮A的流动相、波长和理论板数,后通过单因素筛选和正交试验确定供试品制备方法。结果表明,HPLC法测定甘草中甘草查尔酮A的流动相为甲醇-水(70∶30),波长379 ... 建立HPLC法测定中药甘草中甘草查尔酮A含量的方法。首先确定HPLC法测定甘草查尔酮A的流动相、波长和理论板数,后通过单因素筛选和正交试验确定供试品制备方法。结果表明,HPLC法测定甘草中甘草查尔酮A的流动相为甲醇-水(70∶30),波长379 nm,理论板数按甘草查尔酮A峰计算应不低于6000。供试品的制备方法为取本品粉末约0.25 g,精密称定,加入甲醇100 m L,密塞,超声处理(功率250 W,频率99 kHz)60 min,冷却,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,即得。结果表明,本研究所建立的方法操作简便、结果准确、重复性好。 展开更多
关键词 甘草 甘草查尔酮A HPLC 供试品溶液制备
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犬细小病毒VP2蛋白特点及病毒样颗粒疫苗制备研究进展 被引量:4
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作者 杨媛茹 焦雪 +3 位作者 宋维林 刘许峰 汪惠庆 李月红 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3286-3293,共8页
犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-... 犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-端结构域和环结构域中含有几个重要的B细胞表位,可在CPV感染过程中诱导产生有效的中和抗体。因此,在开发CPV基因组亚单位疫苗中,VP2蛋白可作为候选抗原的首选。病毒样颗粒(VLPs)与天然病毒相似,但不具备天然病毒的复制功能引起机体发生感染,故近几年来利用不同的表达系统组装VP2蛋白一直是研究者们研究的重点。笔者着重对CPV VP2蛋白的特点及构象进行分析,通过特点分析得知CPV衣壳的主要成分中含有VP2,不但具有血凝活性,还与CPV的宿主范围和抗原性密切相关,因此,有活性的VP2蛋白在CPV基因工程亚单位疫苗的开发中极其重要。通过构象分析得知CPV VP2蛋白环状结构(Flexible loop)具有更大的灵活性,这可能是CPV感染宿主范围不断扩大的分子基础。同时笔者对VLPs疫苗的制备方法及优缺点进行讨论,以期为CPV疫苗的研究制备提供有利的参考和科学依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) 病毒样颗粒(VLPs) 疫苗 VP2蛋白
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一种犬细小病毒基因工程抗体的制备
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作者 李希辰 雷欢 +3 位作者 李雪 石晶 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期3042-3051,共10页
本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体... 本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG 2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10^11 L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2^4和1∶2^6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) 基因工程抗体 共转染 HEK-293F细胞
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新准则下企业研发支出的会计核算与税务处理思考 被引量:3
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作者 王立谨 《山西农经》 2021年第5期130-131,共2页
社会经济水平的提升、科学技术的发展和国家税收政策的变化,使企业面临着更大的压力。与以往相比,企业对项目研发的重视程度更深,实现了企业初期投资向科技成果的转换,提升了企业竞争力。基于此,介绍了新准则下企业研发支出会计核算与... 社会经济水平的提升、科学技术的发展和国家税收政策的变化,使企业面临着更大的压力。与以往相比,企业对项目研发的重视程度更深,实现了企业初期投资向科技成果的转换,提升了企业竞争力。基于此,介绍了新准则下企业研发支出会计核算与税务处理存在的瓶颈,并提出了优化对策,供参考。 展开更多
关键词 新准则 企业研发支出 会计核算 税务处理
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含兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的兔三联灭活疫苗的研究
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作者 韩水仲 陈凌燕 +7 位作者 白晨雨 王同燕 黄玉欣 宋欢欢 张浩浩 石晶 邓均华 田克恭 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期14-18,共5页
为研究兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白形成的病毒样颗粒联合多杀性巴氏杆菌(Pm)、产气荚膜梭菌(Cp)的免疫效果,将3种抗原与铝胶佐剂混合制成三联灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果表明,3批疫苗以4.0 mL/只免... 为研究兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白形成的病毒样颗粒联合多杀性巴氏杆菌(Pm)、产气荚膜梭菌(Cp)的免疫效果,将3种抗原与铝胶佐剂混合制成三联灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果表明,3批疫苗以4.0 mL/只免疫兔未见任何不良反应;对兔的最小免疫剂量为1.0 mL/只,免疫后14日,血清RHDV HI效价为1∶16~1∶64,攻毒后免疫兔均健活(5/5);免疫后21 d,用Pm和Cp分别攻毒,免疫兔80%以上(4/5~5/5)保护;免疫持续期可达210 d。RHDV VP60蛋白形成的病毒样颗粒可与Pm、Cp联合制备疫苗,解决了传统RHDV组织灭活苗生产过程存在的生物安全风险问题,同时实现了一针三防。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60蛋白病毒样颗粒 多杀性巴氏杆菌 产气荚膜梭菌 灭活疫苗
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