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SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
1
作者
赵仁双
朱羿龙
+10 位作者
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭...
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
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关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
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职称材料
新补骨脂异黄酮通过caspase-3/GSDME通路诱导肝细胞癌Huh-7细胞焦亡
被引量：
1
2
作者
李雅茹
杨霞
+6 位作者
赵仁双
修志儒
朱羿龙
韩继成
李善智
李一权
金宁一
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期318-323,共6页
目的:探讨新补骨脂异黄酮(NBIF)对肝细胞癌(HCC)Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶(LDH...
目的:探讨新补骨脂异黄酮(NBIF)对肝细胞癌(HCC)Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞的LDH释放量,WB实验检测细胞中GSDME、caspase-3的蛋白水平变化。采用si RNA干扰Huh-7细胞中caspase-3、GSDME表达后,CCK-8法检测NBIF处理对细胞存活率的影响,WB实验检测GSDME蛋白表达水平,观察NBIF处理对细胞形态的影响,并检测细胞LDH释放量。结果:60μmol/L以上的NBIF均能显著抑制Huh-7细胞的增殖(均P<0.01),光学显微镜下观察到NBIF处理后的细胞出现肿胀、吐泡现象,且LDH释放增加(P<0.01);WB实验结果表明,NBIF能够激活caspase-3蛋白并切割GSDME蛋白,增加GSDME-N的表达(均P<0.01)。干扰caspase-3、GSDME表达后,NBIF对细胞的抑制作用减弱(均P<0.01),GSDME-N蛋白表达受到抑制(P<0.01),显微镜下细胞肿胀、吐泡现象几乎消失,LDH释放明显减少(P<0.05)。结论:NBIF能够通过caspase-3/GSDME途径诱导Huh-7细胞发生焦亡,从而抑制HCC细胞的增殖,为HCC的治疗提供一种新思路。
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关键词
新补骨脂异黄酮
肝细胞癌
HUH-7细胞
细胞焦亡
GSDME
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职称材料
题名
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
1
作者
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
机构
延边
大学
农学院预防兽医学实验室
长春中医药大学院士工作站
中国农业科学院
长春
兽医研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
基金
吉林省自然科学基金项目(YDZJ202201ZYTS257)
吉林省教育厅科学技术研究项目(JJKH20220873KJ)。
文摘
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
Keywords
SARS-CoV-2
vaccinia virus Tiantan strain(VVT)
TK gene
homologous recombination
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
S942.5 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
新补骨脂异黄酮通过caspase-3/GSDME通路诱导肝细胞癌Huh-7细胞焦亡
被引量：
1
2
作者
李雅茹
杨霞
赵仁双
修志儒
朱羿龙
韩继成
李善智
李一权
金宁一
机构
延边
大学
医学院、病理学与病理生理学教研室
长春中医药大学院士工作站
中国农业科学院、
长春
兽医研究所
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期318-323,共6页
基金
吉林省教育厅科学技术研究项目(No.JJKH20220873KJ)
“杏林学者工程”青年科学家培养计划项目(No.QNKXJ2-2021ZR13)
吉林省青年科技人才托举工程项目(No.QT202111)。
文摘
目的:探讨新补骨脂异黄酮(NBIF)对肝细胞癌(HCC)Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞的LDH释放量,WB实验检测细胞中GSDME、caspase-3的蛋白水平变化。采用si RNA干扰Huh-7细胞中caspase-3、GSDME表达后,CCK-8法检测NBIF处理对细胞存活率的影响,WB实验检测GSDME蛋白表达水平,观察NBIF处理对细胞形态的影响,并检测细胞LDH释放量。结果:60μmol/L以上的NBIF均能显著抑制Huh-7细胞的增殖(均P<0.01),光学显微镜下观察到NBIF处理后的细胞出现肿胀、吐泡现象,且LDH释放增加(P<0.01);WB实验结果表明,NBIF能够激活caspase-3蛋白并切割GSDME蛋白,增加GSDME-N的表达(均P<0.01)。干扰caspase-3、GSDME表达后,NBIF对细胞的抑制作用减弱(均P<0.01),GSDME-N蛋白表达受到抑制(P<0.01),显微镜下细胞肿胀、吐泡现象几乎消失,LDH释放明显减少(P<0.05)。结论:NBIF能够通过caspase-3/GSDME途径诱导Huh-7细胞发生焦亡,从而抑制HCC细胞的增殖,为HCC的治疗提供一种新思路。
关键词
新补骨脂异黄酮
肝细胞癌
HUH-7细胞
细胞焦亡
GSDME
Keywords
neobavaisoflavone
hepatocellular carcinoma(HCC)
Huh-7 cell
pyroptosis
gasdermin E(GSDME)
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
R730.52 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
新补骨脂异黄酮通过caspase-3/GSDME通路诱导肝细胞癌Huh-7细胞焦亡
李雅茹
杨霞
赵仁双
修志儒
朱羿龙
韩继成
李善智
李一权
金宁一
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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