利用重组抗原检测抗SSB自身抗体及其临床意义 被引量：1

1

作者 邓安梅 仲人前 +2 位作者 陈孙孝 施笑梅 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期301-304,共4页

目的：利用重组抗原检测自身免疫疾病患者血清中抗ＳＳＢ自身抗体并探讨其临床意义。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建ＳＳＢ基因工程菌，并表达 ＳＳＢ融合蛋白、经 ＧＳＴ柱层析法纯化后，分别经蛋白质印迹（ＷＢＴ）法和酶联免疫吸附（... 目的：利用重组抗原检测自身免疫疾病患者血清中抗ＳＳＢ自身抗体并探讨其临床意义。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建ＳＳＢ基因工程菌，并表达 ＳＳＢ融合蛋白、经 ＧＳＴ柱层析法纯化后，分别经蛋白质印迹（ＷＢＴ）法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测２０份干燥综合征患者、６０份系统性红斑狼疮患者和３０份正常人血清。结果：经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（＋）的２４份患者血清，利用重组抗原检测均阳性；经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（－）的５６份患者血清，利用重组抗原检测有１１份阳性（ＷＢＴ法４份，ＥＬＩＳＡ法７份）。结论：利用重组抗原检测抗ＳＳＢ自身抗体敏感性较高。利用重组抗原对自身抗体进行定性、定量分析有助于对自身免疫疾病的诊断。 展开更多

关键词 自身抗原 SSB 自身免疫疾病 WBT ELISA

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三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究 被引量：9

2

作者 邵建伟 吴宗贵 +3 位作者 李莉 张玲珍 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期330-333,共4页

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ_２Ｏ_３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察 Ａｓ_２Ｏ_３诱... 目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ_２Ｏ_３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察 Ａｓ_２Ｏ_３诱导 ＶＳＭＣｓ凋亡的作用。结果：经Ａｓ_２Ｏ_３作用后ＶＳＭＣｓ出现典型的凋亡变化，透射电镜下可见细胞核仁消失，染色质浓缩聚集于核膜下。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形电泳条带。流式细胞术检测出现典型的凋亡峰，并随ＡＳ_２Ｏ_３浓度的增加和作用时间的延长而增高。对照组均不见上述变化。结论： Ａｓ_２Ｏ_３可有效诱导 ＶＳＭＣｓ凋亡。 展开更多

关键词 三氧化二砷 血管平滑肌细胞 细胞凋亡 大鼠

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苦参碱抑制血小板衍生生长因子诱导的小鼠皮肤成纤维细胞增殖 被引量：40

3

作者 伍严安 高春芳 +2 位作者 王皓 黄超 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期724-726,共3页

目的 :探讨苦参碱对血小板衍生生长因子 - BB(PDGF- BB)诱导的小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法 :取新生 ICR小鼠皮肤细胞培养成纤维细胞。用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法和细胞计数法分析细胞增殖情况。结果 :5 0～ 2 5 0 μg/ ml的苦参碱能... 目的 :探讨苦参碱对血小板衍生生长因子 - BB(PDGF- BB)诱导的小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法 :取新生 ICR小鼠皮肤细胞培养成纤维细胞。用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法和细胞计数法分析细胞增殖情况。结果 :5 0～ 2 5 0 μg/ ml的苦参碱能剂量依赖地降低血清刺激的细胞增殖 ,撤除苦参碱后抑制作用能完全逆转。苦参碱 (10 0～ 5 0 0 μg/ ml)亦能剂量依赖地抑制PDGF- BB诱导的细胞增殖。结论 :苦参碱显示了很强的抗小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用 ,可能通过抑制 PDGF- BB诱导增殖作用来介导的。提示苦参碱可能对皮肤纤维化疾病有潜在的预防和治疗作用。 展开更多

关键词 苦参碱 皮肤 成纤维细胞 细胞增殖 PDGF-BB

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雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响 被引量：14

4

作者 鲍一笑 张璐定 +2 位作者 李莉 韩连书 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期833-835,共3页

目的 :探讨雷公藤红素诱导人肥大细胞系 HMC- 1细胞凋亡的基因调节机制。 方法 :雷公藤红素 (0 .5μmol/ L )与HMC- 1细胞共育不同时间 (4、8或 12 h)后 ,用 RT- PCR、免疫组化方法检测 bcl- 2家族、c- m yc、白细胞介素 1β转换酶 (ICE... 目的 :探讨雷公藤红素诱导人肥大细胞系 HMC- 1细胞凋亡的基因调节机制。 方法 :雷公藤红素 (0 .5μmol/ L )与HMC- 1细胞共育不同时间 (4、8或 12 h)后 ,用 RT- PCR、免疫组化方法检测 bcl- 2家族、c- m yc、白细胞介素 1β转换酶 (ICE)基因在 m RNA和蛋白质水平表达的变化 ,并分析它们在细胞凋亡中的作用。 结果 :HMC- 1细胞本已存在 Bcl- 2、Bax、C- myc蛋白表达 ;雷公藤红素作用后 ,Bcl- 2蛋白表达受到抑制 ,Bax、C- m yc蛋白表达增加。 HMC- 1细胞能自发表达 bcl- 2、bax、 bcl- XL 和ICE的 m RNA,在雷公藤红素作用下 ,bcl- 2、bax、bcl- XL 的 m RNA表达水平均下降 (以 bcl- 2下降最为明显 ) ,而 ICE m RNA 3次检测 2次上升 ,1次下降。 结论 :雷公藤红素诱导 HMC- 展开更多

关键词 雷公藤红素 肥大细胞 脱噬作用 基因表达 细胞凋亡 HMC-1

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人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性研究 被引量：18

5

作者 王皓 高春芳 +3 位作者 万伟东 伍严安 赵文静 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期711-714,共4页

目的 :探索器官纤维化形成中调控 型胶原基因高水平转录的启动片段。方法 :从人α1( )胶原基因转录起始点上游 - 2 .5 kb～ + 42 bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成 6个重组体 ,... 目的 :探索器官纤维化形成中调控 型胶原基因高水平转录的启动片段。方法 :从人α1( )胶原基因转录起始点上游 - 2 .5 kb～ + 42 bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成 6个重组体 ,脂质体法转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞 ,CAT- EL ISA测定细胞 CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性。结果 :- 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp序列具有强启动 CAT表达活性 ,而 - 10 5～ + 42 bp片段启动CAT活性最低。结论 :人α1( )胶原基因 - 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp片段有高启动活性 ,是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。 展开更多

关键词 启动子 器官纤维化 α1(Ⅰ)胶原基因 基因转录

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间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析 被引量：14

6

作者 夏晴 仲人前 +3 位作者 范列英 高春芳 薛昌 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期315-317,F003,共4页

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点，探索自身抗体作为肿瘤标志物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ＩＩＦ）检测 ７７份肺癌以及 １４０... 目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点，探索自身抗体作为肿瘤标志物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ＩＩＦ）检测 ７７份肺癌以及 １４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原，采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别，两组人群的自身抗体阳性率皆随年龄增长而增高（Ｐ＜０．０５），在不同年龄段，肺癌组皆显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。肺癌组和对照组在自身抗体荧光图形、靶抗原细胞内定位上均有明显不同。７４份肺癌患者血清中检测到阳性条带（７４／８１，９１．４％），显著高于对照组（３１／５２，６１．５％），其中大多数与自身免疫性疾病中常见的自身抗体不同，并发现８２．７％（６７／８１）的肺癌患者具有针对相对分子质量初步鉴定为６．５万的靶抗原的阳性条带，该条带仅在２２．２％（１２／５２）的正常人中查及。结论：肺癌患者血清的自身抗体谱与正常人生理性自身抗体谱及自身免疫性疾病中的自身抗体谱不同，进一步研究其靶抗原本质及其生物学意义。 展开更多

关键词 肺肿瘤 自身抗体 蛋白质印迹地 间接免疫荧光法

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慢性乙型肝炎患者血清中肝特异性自身抗体的检测 被引量：15

7

作者 范列英 仲人前 +2 位作者 孔宪涛 薛菖 徐玲玲 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期309-311,共3页

目的：阐明慢性乙型肝炎中是否也存在肝特异性自身抗体及其在病情转归中的作用。方法：以猴肝组织切片和可溶性肝抗原为抗原基质，用间接免疫荧光和蛋白质印迹法检测３３７例慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清中的自身抗体。结果：免疫荧光... 目的：阐明慢性乙型肝炎中是否也存在肝特异性自身抗体及其在病情转归中的作用。方法：以猴肝组织切片和可溶性肝抗原为抗原基质，用间接免疫荧光和蛋白质印迹法检测３３７例慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清中的自身抗体。结果：免疫荧光法显示乙型肝炎后肝硬化自身抗体总的阳性率（２４．０７％）高于慢性乙型肝炎组（１４．２９％），且两组均显著高于正常对照组。蛋白质印迹的阳性率各为４３．４２％和４２．５９％，两者无显著差异。两组病例靶抗原相对分子质量多集中在３．０万～５．５万之间，但肝硬化患者在相对分子质量２．５万和９．０万左右处的阳性条带均多于慢性肝炎患者。结论：慢性肝炎、肝硬化患者血清中存在抗肝组织自身抗体，其相对应的靶抗原有多种。进一步分离、鉴定有意义的靶抗原，并对其进行抗原表位、细胞表面表达等分析，将有助于探讨自身免疫在慢性肝炎发病及转归中的作用。 展开更多

关键词 乙型肝炎 血清诊断 肝特异性自身抗体

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TNF-α拮抗胰岛素样生长因子-1对人α1(Ⅰ)胶原启动子的激活 被引量：9

8

作者 伍严安 李德岩 +3 位作者 高春芳 万伟东 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期715-717,共3页

目的 :探讨 TNF-α对胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)激活人α1( )胶原启动子的作用。 方法 :构建含不同长短α1( )胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体 p COL H1 0 .2 7,p COL H1 2 .5 ;用脂质体法瞬时转染至NIH3T... 目的 :探讨 TNF-α对胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)激活人α1( )胶原启动子的作用。 方法 :构建含不同长短α1( )胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体 p COL H1 0 .2 7,p COL H1 2 .5 ;用脂质体法瞬时转染至NIH3T3细胞和人皮肤成纤维细胞中 ,加入 IGF- 1或 (和 ) TNF-α,测定 CAT活性。 结果 :10 0 ng/ m l IGF- 1可使转染至NIH3T3细胞的 p COL H1 0 .2 7和 p COL H1 2 .5表达的 CAT活性分别增高至对照的 (5 .4± 0 .2 5 )倍与 (5 .8± 0 .3)倍 ,使转染至人皮肤成纤维细胞的这两个重组体表达的活性分别增高至对照的 (4 .5± 0 .2 2 )倍与 (4 .9± 0 .2 )倍。而 TNF-α能抑制 IGF- 1诱导的 p COL H1 2 .5活性。 结论 :TNF- α在转录启动水平抑制 IGF- 1对人 α1( )胶原基因表达的促进作用。 展开更多

关键词 器官纤维化 TNF-Α IGF-1 α1(Ⅰ)胶原启动子

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免疫磁珠法分选胚胎大鼠脑神经干细胞的初步研究 被引量：12

9

作者 高国一 卢亦成 +3 位作者 江基尧 李莉 张玲珍 朱诚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1092-1094,共3页

目的 :探索应用免疫磁珠间接阳性法分选神经上皮干细胞蛋白 (nestin)阳性的神经干细胞群的实验条件 ,为研究神经干细胞的特性与神经干细胞的培养和移植研究创造有利条件。 方法 :制取胎鼠大脑组织细胞悬液 ,免疫磁珠法分选胎鼠脑神经干... 目的 :探索应用免疫磁珠间接阳性法分选神经上皮干细胞蛋白 (nestin)阳性的神经干细胞群的实验条件 ,为研究神经干细胞的特性与神经干细胞的培养和移植研究创造有利条件。 方法 :制取胎鼠大脑组织细胞悬液 ,免疫磁珠法分选胎鼠脑神经干细胞 ,以流式细胞术检测阳性细胞纯度 ,以锥虫蓝染色法检测细胞活性。 结果 :该法分选的 nestin阳性细胞纯度为93.0 %～ 99.7% ,其中活性细胞为 92 %～ 97%。结论 :免疫磁珠法分离胎鼠脑神经干细胞群落简便、有效 ,可以为神经干细胞细胞培养和移植提供细胞来源 ,也为研究高纯度神经干细胞的特性提供了实验基础。 展开更多

关键词 神经干细胞 神经巢蛋白 免疫磁珠法

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慢性肝病及原发性肝癌患者血清中自身抗体分析 被引量：9

10

作者 范列英 仲人前 +1 位作者 李红梅 夏睛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期313-314,共2页

目的：探讨慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者血清中自身抗体的变化规律。方法：收集３４２例慢性肝病和肝癌血清标本，以 Ｈｅｐ－２细胞和猴肝组织为抗原基质，采用间接免疫荧光法检测自身抗体。结果：慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者抗... 目的：探讨慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者血清中自身抗体的变化规律。方法：收集３４２例慢性肝病和肝癌血清标本，以 Ｈｅｐ－２细胞和猴肝组织为抗原基质，采用间接免疫荧光法检测自身抗体。结果：慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者抗核抗体（ＡＮＡ）的阳性检出率分别为２１．８％（３５／１６０），２７．５％（３０／１０９）和３４．２％（２５／７３），均明显高于对照组的３％（６／２００）。３组ＡＮＡ核型种类较多，但均以颗粒型为主。以蛋白质印迹法检测抗可提取性核抗原（ＥＮＡ）抗体。发现４０例ＡＮＡ颗粒型的患者，有１２例ｎＲＮＰ／Ｓｍ和（或）ＳＳＡ阳性，３例Ｓｃｌ－７０和２例Ｊｏ－１阳性；１５例ＡＮＡ均质型有７例为抗双链ＤＮＡ抗体和１例抗组蛋白抗体。对照组中２例ＡＮＡ颗粒型分别为ｎＲＮＰ／Ｓｍ和ＳＳＡ阳性。３组病例的胞质抗体有多种，以抗线粒体抗体阳性率最高，肝硬化和肝癌组分别达１２．８％和１２．３％；慢性肝炎组为８．９％。结论：慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者血清中不仅存在着自身抗体，而且显著高于正常人。ＡＮＡ的靶抗原中除一部分是目前已鉴定的外，大部分有待于进一步鉴定。 展开更多

关键词 抗体 抗核 核抗原 慢性肝炎 肝肿瘤 自身抗体

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核心蛋白聚糖对肝细胞和肝星形细胞体外增殖的影响 被引量：5

11

作者 王桂琴 郭彩虹 +5 位作者 孔宪涛 仲人前 李莉 张玲珍 刘涛 王红蓓 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期721-723,共3页

目的 :探讨核心蛋白聚糖 (decorin)在肝纤维化形成机制中的作用。方法 :在正常人肝细胞株 L - 0 2及大鼠肝星形细胞株 HSC- T6体外培养体系中 ,分别加入不同质量浓度 (0 .0 1,5 ,10μg/ m l) decorin共培养不同时间后 ,进行细胞计数以及... 目的 :探讨核心蛋白聚糖 (decorin)在肝纤维化形成机制中的作用。方法 :在正常人肝细胞株 L - 0 2及大鼠肝星形细胞株 HSC- T6体外培养体系中 ,分别加入不同质量浓度 (0 .0 1,5 ,10μg/ m l) decorin共培养不同时间后 ,进行细胞计数以及 3H- Td R和 3H- L eu掺入量测定。结果 :实验组经 0 .0 1μg/ m l decorin作用 4d或 6 d后 ,HSC- T6和 L- 0 2细胞增殖数量以及 3H- Td R和 3H- L eu掺入量均显著高于对照组 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。而 5 ,10μg/ m l decorin作用 4d或 6 d后 ,HSC- T6和 L -0 2细胞增殖数量以及 3H- Td R掺入量均显著低于对照组 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。 结论 :decorin对细胞体外增殖有双重调节作用 ; 展开更多

关键词 肝纤维化 肝细胞 肝星形细胞 细胞增殖 核心蛋白聚糖

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改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白 被引量：6

12

作者 高春芳 李德岩 +3 位作者 万伟东 伍严安 王皓 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期708-710,共3页

目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析... 目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析人 α1( )胶原基因 5′侧翼区 - 2 6 8～ + 42 bp序列 DNA结合蛋白。结果 :在胶原产生细胞——人瘢痕成纤维细胞中存在 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的 DNA结合蛋白 ,其结合活性具有特异性 ,并能被 Sp- 1,NF- 1,NF- κB识别序列所竞争。结论 :改良 EMSA法可用于分析较长序列的 DNA结合蛋白 ,人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列中存在转录因子Sp- 1,NF- 1,NF- κB结合序列 ,这些转录因子结合位点可能与人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的高启动活性有关。 展开更多

关键词 基因 胶原 DNA结合蛋白 电泳迁移率改变分析

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负极性聚四氟乙烯驻极体对成纤维细胞凋亡的影响 被引量：4

13

作者 江键 宋诚荣 +4 位作者 崔黎丽 王小平 方影 李莉 叶熙亭 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期409-411,共3页

目的 :研究负电晕充电的聚四氟乙烯 (PTFE)驻极体对成纤维细胞凋亡的影响及其调控机制。 方法 :选用 - 30 0、- 5 0 0和 - 10 0 0 V PTFE驻极体作用于成纤维细胞 2 4、48和 72 h,利用流式细胞仪和透射电子显微镜研究负极性驻极体对成纤... 目的 :研究负电晕充电的聚四氟乙烯 (PTFE)驻极体对成纤维细胞凋亡的影响及其调控机制。 方法 :选用 - 30 0、- 5 0 0和 - 10 0 0 V PTFE驻极体作用于成纤维细胞 2 4、48和 72 h,利用流式细胞仪和透射电子显微镜研究负极性驻极体对成纤维细胞凋亡的影响。结果 :- 30 0、- 5 0 0和 - 10 0 0 V驻极体作用成纤维细胞 2 4、48和 72 h以后 ,与对照组相比 ,成纤维细胞的凋亡量从 0 .5 %增至 10 % (部分可达 15 % ) ;驻极体作用成纤维细胞 48～ 72 h,出现细胞凋亡特有的形态学特征 ,即 :细胞异染色质边集 ,细胞裂解 ,可见凋亡小体。驻极体诱导成纤维细胞凋亡的效应与作用时间和场强呈正相关性 (P<0 .0 5 )。 结论 :负极性驻极体有促进成纤维细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 驻极体 成纤维细胞 细胞凋亡 负极性聚四氟乙烯

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小鼠α2(Ⅰ)胶原基因DNA结合蛋白研究 被引量：5

14

作者 高春芳 王皓 +2 位作者 万伟东 徐庆文 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期704-707,共4页

目的 :初步分析小鼠α2 ( )胶原基因上游 5′- U TR近端 80 0 bp(- 780～ + 5 4bp)序列的 DNA结合蛋白。 方法 :PCR扩增小鼠α2 ( )胶原基因 - 2 5 8～ + 5 4bp,- 5 19～ - 2 48bp,- 741～ - 5 0 1bp片段 ,Dig- d U TP末端标记 PCR产物 ... 目的 :初步分析小鼠α2 ( )胶原基因上游 5′- U TR近端 80 0 bp(- 780～ + 5 4bp)序列的 DNA结合蛋白。 方法 :PCR扩增小鼠α2 ( )胶原基因 - 2 5 8～ + 5 4bp,- 5 19～ - 2 48bp,- 741～ - 5 0 1bp片段 ,Dig- d U TP末端标记 PCR产物 ,与经 SDS- PAGE并转印至膜上的胶原产生细胞的核抽提物进行 DNA -蛋白质结合反应 ,以抗 Dig抗体检测结合反应信号。 结果 : 型胶原基因上游 5′- U TR近端 80 0 bp序列中存在至少 3个不同的核转录因子结合位点 ,相识别 (consensus)的核蛋白因子相对分子质量分别为 12万 ,5万 ,2万。TGF- β1可增强细胞中相对分子质量为 12万的核蛋白因子的表达。结论 :小鼠 α2( )胶原基因上游 - 780～ + 5 4bp这 80 0 bp片段中存在与不同的核蛋白因子结合的序列 ,可能与 Sp- 1有关。TGF- β1通过增强相对分子质量为 12万核蛋白的表达而促进该蛋白与靶调控序列的结合。 展开更多

关键词 器官纤维化 α2(Ⅰ)胶原基因 DNA结合蛋白

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CD28协同刺激分子对T细胞受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响 被引量：3

15

作者 李红梅 张华刚 +3 位作者 王宏程 钱晓萍 陈慰峰 孔宪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期14-16,共3页

目的:分析anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度,分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡 的影响。方法:新鲜分离胸腺细胞,加入anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ... 目的:分析anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度,分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡 的影响。方法:新鲜分离胸腺细胞,加入anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb等培养20 h,进行多重染色,流式细胞仪分析。结果:与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较:①双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目,尤其是CD4+ CD8+胸腺细胞的凋亡数目。②凋亡的CD4+ CD8+亚群、CD4+ CD8-亚群细胞表面CD28的表达均增多。结论:CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关。CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡。 展开更多

关键词 CD28协同刺激分子 T细胞受体介导 胸腺细胞亚群 细胞凋亡

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年龄、性别在幼鼠胸腺T细胞增殖中的作用 被引量：3

16

作者 李红梅 仲人前 +3 位作者 钱晓萍 张玲珍 孔宪涛 陈慰峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期297-299,共3页

目的 :分析年幼小鼠性别、年龄与CD3、CD4、CD8免疫参数表达的关系。方法 :分离 3～ 9周小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞 ,FACS分析细胞表面CD3、CD4、CD8的表达 ;CFSE标记后细胞 ,加入ConA、抗TCR抗体、PMA +IONO刺激剂培养 72小时 ,流式细胞... 目的 :分析年幼小鼠性别、年龄与CD3、CD4、CD8免疫参数表达的关系。方法 :分离 3～ 9周小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞 ,FACS分析细胞表面CD3、CD4、CD8的表达 ;CFSE标记后细胞 ,加入ConA、抗TCR抗体、PMA +IONO刺激剂培养 72小时 ,流式细胞仪分析的方法比较不同刺激剂作用下雌、雄小鼠T细胞的增殖。结果 :结果胸腺和脾脏表面CD3、CD4、CD8的表达与性别无明显关系 ,6～ 9周小鼠脾脏CD3+细胞明显多于 3～ 4周小鼠 ;胸腺细胞的增殖与年龄、性别无关 ,而 3周雌性小鼠脾细胞对PMA +IONO刺激后的增殖应答比雄性明显 ,4～ 6周雄性小鼠脾细胞的增殖能力强于雌性小鼠 ,7～ 8周雌性小鼠脾细胞对抗TCR抗体的应答能力明显减小。结论 展开更多

关键词 性别 年龄 T淋巴细胞

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神经细胞粘附分子对人恶性脑胶质瘤细胞株体内外增殖能力的影响 被引量：2

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作者 王建军 高莉 +1 位作者 祝峙 李莉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期730-732,共3页

目的 :探讨神经细胞粘附分子 ( neural cell adhesion molecule,NCAM)对人脑胶质瘤细胞株 U2 51 MG增殖行为的影响。 方法 :将外源性 NCAM-1 40质粒转入 U2 51 MG细胞株 ,采用流式细胞仪及培养细胞增殖动力学方法比较转染前后细胞的细... 目的 :探讨神经细胞粘附分子 ( neural cell adhesion molecule,NCAM)对人脑胶质瘤细胞株 U2 51 MG增殖行为的影响。 方法 :将外源性 NCAM-1 40质粒转入 U2 51 MG细胞株 ,采用流式细胞仪及培养细胞增殖动力学方法比较转染前后细胞的细胞周期、增殖细胞核抗原 ( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及群体增殖速度 ;在裸鼠颅内原位接种上述细胞 ,观察成瘤率及肿瘤大小。 结果 :NCAM转染后细胞的体外增殖速度减慢 ( P<0 .0 5) ,S期细胞减少 ,PCNA表达率下降 ;裸鼠颅内接种的成瘤率显著降低 ( P<0 .0 1 ) ,肿瘤体积明显较小。 结论 :转染外源性 NCAM在体外、体内均可抑制人脑胶质瘤细胞株 U2 51 MG的增殖。 展开更多

关键词 细胞粘附分子 神经元 基因转染 细胞增殖 恶性脑神经胶质瘤 HCAM

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中国东部汉族人群原发性胆汁性肝硬化与HLA-DRB1相关性分析 被引量：3

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作者 陈燕 周晔 +3 位作者 邓安梅 陈波 蒋天舒 仲人前 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1143-1145,共3页

目的:探讨组织相容性抗原Ⅱ类HLA-DRB1等位基因与原发性肝汁性肝硬化(Primarybiliarycirrhosis,PBC)患者人群的相关性。方法:采用序列特异性引物PCR(SSP-PCR)对105例确诊PBC患者,400例健康人群进行HLA-DRB1等位基因及相关亚型基因分析... 目的:探讨组织相容性抗原Ⅱ类HLA-DRB1等位基因与原发性肝汁性肝硬化(Primarybiliarycirrhosis,PBC)患者人群的相关性。方法:采用序列特异性引物PCR(SSP-PCR)对105例确诊PBC患者,400例健康人群进行HLA-DRB1等位基因及相关亚型基因分析。结果:PBC患者组DRB1*07的频率为37·26%,与正常人组的13·8%相比存在显著性差异(P<0·05,比数比为2·7),所有阳性患者经亚型分析均为DRB1*0701;其余DRB1的等位基因频率与正常对照组比较无显著性差异。DRB1*0701阳性与阴性患者群体的疾病进程、临床指征、实验室指征等无显著性差异。结论:中国人群PBC患者可能与DRB1*0701易感性相关,为临床治疗提供了一定线索。 展开更多

关键词 原发性胆汁性肝硬化(PBC) HLA-DRB1 序列特异性引物聚合酶链反应

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蛋白激酶C对肥大细胞活化信号转导的影响 被引量：2

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作者 陆月明 李莉 +1 位作者 黄超 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期28-31,共4页

目的 :观察蛋白激酶 C (PKC)对肥大细胞 RBL - 2 H 3活化时酪氨酸磷酸化及 c- fos和 c- jun表达等信号转导的影响。方法 :采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定活化的 RBL - 2 H 3细胞在佛波酯 (PMA)作用后 ,酪氨酸磷酸化和组胺浓度的... 目的 :观察蛋白激酶 C (PKC)对肥大细胞 RBL - 2 H 3活化时酪氨酸磷酸化及 c- fos和 c- jun表达等信号转导的影响。方法 :采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定活化的 RBL - 2 H 3细胞在佛波酯 (PMA)作用后 ,酪氨酸磷酸化和组胺浓度的改变 ;用 RT- PCR观察 PKC对 RBL - 2 H3细胞 c- fos和 c- jun基因 m RNA表达的影响。结果 :致敏 RBL - 2 H3细胞 ,在 PMA作用 48h后 ,抗原活化时磷酸化酪氨酸的平均荧光强度和组胺浓度分别为 (2 .79± 0 .0 7) %和 (6 0 .75± 1.38) nm ol/L ,都明显低于对照组的 (4 .47± 0 .0 3) %和 (10 4.47± 1.31) nm ol/L (P<0 .0 5 ) ;c- fos和 c- jun m RNA的表达量分别减少 91%和 82 %。结论 :PKC的活化可调节肥大细胞酪氨酸蛋白激酶活性 ,上调 c- fos和 c- jun m 展开更多

关键词 肥大细胞 蛋白激酶C 蛋白酪氨酸激酶 信号转导 哮喘

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共刺激分子CD28和B7在关节炎发病中的作用 被引量：2

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作者 邓安梅 仲人前 +2 位作者 陈孙孝 施笑梅 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期305-308,共4页

目的：探讨Ｂ７：ＣＤ２８共刺激信号在关节炎发病机制中的作用。方法：经牛Ⅱ型胶原（ＢⅡＣ）诱导ＳＤ大鼠建立关节炎动物模型；分析抗Ｂ７－１和抗Ｂ７－２抗体对关节炎大鼠临床症状和特异性免疫反应的影响。结果：抗Ｂ７－１抗体可... 目的：探讨Ｂ７：ＣＤ２８共刺激信号在关节炎发病机制中的作用。方法：经牛Ⅱ型胶原（ＢⅡＣ）诱导ＳＤ大鼠建立关节炎动物模型；分析抗Ｂ７－１和抗Ｂ７－２抗体对关节炎大鼠临床症状和特异性免疫反应的影响。结果：抗Ｂ７－１抗体可阻止ＳＤ大鼠发生胶原诱发性关节炎，降低大鼠对ＢⅡＣ的体液免疫反应。结论：Ｂ７：ＣＤ２８共刺激信号在诱发 Ｔ细胞介导的自身免疫疾病中起作用，抗Ｂ７－１抗体具有潜在的治疗作用。 展开更多

关键词 共刺激信号 B7 抗原 CD28 类风湿性关节炎

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