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MVP对人肾癌细胞功能的影响及机制研究
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作者 赵海南 周丽娜 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期629-634,680,共7页
目的观察敲低穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)表达对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人肾小管上皮细胞(HK2)和人肾癌细胞株(786-O、769-P、ACHN)中MVP基因的基础表达水平,筛选... 目的观察敲低穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)表达对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人肾小管上皮细胞(HK2)和人肾癌细胞株(786-O、769-P、ACHN)中MVP基因的基础表达水平,筛选MVP显著高表达的细胞株作为实验细胞株;在候选肾癌细胞中敲低MVP表达,通过细胞克隆形成、EdU、细胞周期、细胞划痕、Transwell实验等方法观察敲低MVP表达对人肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响;通过Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达变化;通过通路激活剂确定MVP基因调控肾癌细胞生物学行为的作用机制。结果qRT-PCR和Western blot结果显示,相比HK2细胞,在786-O、769-P、ACHN细胞中MVP的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),且在769-P细胞中最为显著。在769-P细胞中敲低MVP表达后,细胞克隆形成能力明显减弱(P<0.01);EdU阳性细胞数明显减少(P<0.01);处于S期的细胞占比减少(P<0.01),而处于G_(2)期的细胞占比增加(P<0.01);细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制(均P<0.01);p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达降低(均P<0.01)。在敲低MVP的同时给予PI3K激活剂740Y-P,可见p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达升高(均P<0.01);因敲低MVP导致的细胞增殖、迁移、侵袭能力的抑制同样被740Y-P逆转(均P<0.01)。结论敲低MVP基因可以抑制人肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭,这种抑癌作用可能是通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活而实现。 展开更多
关键词 穹窿主体蛋白 肾癌 增殖 迁移 侵袭 PI3K/Akt/mTOR信号通路
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N-乙酰半胱氨酸对顺铂导致肾毒性的保护作用及作用机制分析 被引量:5
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作者 王健 赵硕 任博环 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期390-394,共5页
目的:通过动物实验分析探讨N-乙酰半胱氨酸对于顺铂诱导的肾毒性和肾损伤的保护功能及其机制,为临床药理研究提供参考。方法:选取60只BALB/c小鼠,雌雄各半,喂养7 d后腹腔注射20 mg/kg的顺铂,持续注射3 d诱导并建立急性肾损伤小鼠模型(AK... 目的:通过动物实验分析探讨N-乙酰半胱氨酸对于顺铂诱导的肾毒性和肾损伤的保护功能及其机制,为临床药理研究提供参考。方法:选取60只BALB/c小鼠,雌雄各半,喂养7 d后腹腔注射20 mg/kg的顺铂,持续注射3 d诱导并建立急性肾损伤小鼠模型(AKI),后随机分为6组,A组给予5 mg/kg顺铂,B组给予250 μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸,C组给予5 mg/kg顺铂+250 μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸;D组给予500 μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸;E组给予5 mg/kg 顺铂+500 μg/(100 g·d)的N-乙酰半胱氨酸,F组注射生理盐水做对照,连续治疗7 d后,抽取小鼠眼球血,测定生化指标、炎症因子水平;做肾脏病理切片图评价肾损伤水平,并加以比较。结果:在给药前,6组小鼠的血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾损伤评分(RIS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、谷胱甘肽(GSH)水平比较差异无统计学意义(P>0.05);给药后,6组上述指标差异有统计学意义(P<0.05):①血清Scr、BUN、TNF-α和肾损伤评分RIS:A组>F组>C组>E组>B组>D组,与治疗前相比,A组显著增加(P<0.05);B组、D组、E组显著降低(P<0.05),C组、F组差异无统计学意义(P>0.05);②血清GSH:A组<F组<C组<E组<B组<D组,与治疗前相比,A组显著降低(P<0.05);B组、D组、E组显著增加(P<0.05),C组、F组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:N-乙酰半胱氨酸可减轻因顺铂导致的小鼠肾毒性和肾损伤程度,对肾脏具有保护作用,且动物实验的疗效与N-乙酰半胱氨酸的剂量有高度相关性,其机制则与N-乙酰半胱氨酸具有抑制炎症反应和肾组织细胞凋亡、抗氧化应激等药理作用有关。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 顺铂诱导肾毒性 小鼠 保护作用 药理机制
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miR-183-5p和NDUFA4L2在肾透明细胞癌中的表达及相关性 被引量:3
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作者 刘彤崴 李良 +1 位作者 王卓 陈静 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第4期327-332,共6页
目的检测miR-183-5p和NDUFA4L2在肾透明细胞癌中的表达特征,分析二者相关性及其与术后生存时间的关系。方法收集确诊为肾透明细胞癌并行手术治疗的患者共57例,术后留取肿瘤组织和癌旁正常肾组织。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织... 目的检测miR-183-5p和NDUFA4L2在肾透明细胞癌中的表达特征,分析二者相关性及其与术后生存时间的关系。方法收集确诊为肾透明细胞癌并行手术治疗的患者共57例,术后留取肿瘤组织和癌旁正常肾组织。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-183-5p的表达,应用免疫组织化学法检测NDUFA4L2的表达。应用qRT-PCR检测人肾透明细胞癌786-0细胞株和人肾皮质近曲小管上皮HK-2细胞株中miR-183-5p和NDUFA4L2 mRNA的表达。结果肾透明细胞癌中miR-183-5p表达量明显低于正常肾组织,NDUFA4L2阳性率明显高于正常肾组织(均P<0.05)。miR-183-5p表达量和NDUFA4L2阳性率在不同WHO/ISUP分级、有无肾窦累犯和不同肿瘤最大径间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-183-5p表达量和NDUFA4L2评分均与术后生存时间相关,miR-183-5p表达量和NDUFA4L2评分呈负相关。786-0细胞株中,miR-183-5p表达量明显低于HK-2细胞株,NDUFA4L2 mRNA表达量明显高于HK-2细胞株(均P<0.05)。结论肾透明细胞癌中miR-183-5p和NDUFA4L2异常表达且二者呈负相关,对病变的形成和进展具有促进作用,检测二者的表达可能对预后有预测价值。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 miR-183-5p NDUFA4L2 预后
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糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾功能保护作用的实验研究
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作者 张孟姝 刘金磊 +2 位作者 刘学政 周红丽 张荣明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期85-91,共7页
目的:观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机制。方法:(1)通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。实验分为5组,每组8只。(2)通过Western blot检测各组动物糜蛋白酶抗体... 目的:观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机制。方法:(1)通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。实验分为5组,每组8只。(2)通过Western blot检测各组动物糜蛋白酶抗体、血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin I-converting enzyme,ACE)、过氧化物酶4(NADPH oxidase-4,NOX-4)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶亚单位p22phox的表达情况。(3)通过免疫荧光检测各组动物糜蛋白抑制剂对血管紧张素系统(reninangiotensin system,RAS)的成分,氧化应激的影响。(4)通过q RT-PCR及Western blot检测糜蛋白抑制剂对人血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)来源的基质蛋白合成影响。结果:(1)免疫组化结果显示糖尿病组仓鼠肾小管和血管球糜蛋白酶表达明显。qRT-PCR结果显示糜蛋白酶m RNA水平较对照组普遍增高(P<0.01)。而胰岛素治疗后降至正常水平。(2)糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-Ⅱ升高,同时明显降低了8-羟化脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHd G)分泌水平。(3)NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物明显增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。(4)Western blot证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂明显降低了其表达。(5)血管球转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。结论:糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-Ⅱ水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。 展开更多
关键词 糜蛋白酶抑制剂 肾脏 氧化应激 糖尿病仓鼠
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糜蛋白酶抑制剂保护糖尿病仓鼠肾功能的机制研究
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作者 张孟姝 刘金磊 +2 位作者 刘学政 周红丽 张荣明 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期661-667,共7页
目的观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机理。方法链脲佐菌素腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。通过分子生物学技术、免疫组织化学技术、免疫印记技术检测各组动物糜蛋白酶,RAS成分:ACE、肾素、ANG-... 目的观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机理。方法链脲佐菌素腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。通过分子生物学技术、免疫组织化学技术、免疫印记技术检测各组动物糜蛋白酶,RAS成分:ACE、肾素、ANG-I、ANG-II;氧化应激水平:8-Ohd G,NOX-4,p22phox,以及TGF-β1的表达情况。结果糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-II升高,同时明显降低了8-OHd G分泌水平。NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物显著增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。Western blot证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂显著降低了其表达。血管球TGF-β1表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。结论糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-II水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。 展开更多
关键词 糜蛋白酶抑制剂 氧化应激 糖尿病仓鼠
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硒对高糖诱导的大鼠腹膜透析相关腹膜纤维化的影响 被引量:2
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作者 高利丽 蔡宏宇 刘彤崴 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期46-50,共5页
目的 探讨硒对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 将40只清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组(NC组)、高糖组(HG组)、低硒组(HG+L-Se组)、高硒组(HG+H-Se组),每组10只,分别腹腔注射无菌生理盐水、4.25%葡萄糖腹膜... 目的 探讨硒对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 将40只清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组(NC组)、高糖组(HG组)、低硒组(HG+L-Se组)、高硒组(HG+H-Se组),每组10只,分别腹腔注射无菌生理盐水、4.25%葡萄糖腹膜透析液、4.25%葡萄糖腹膜透析液和3 mg/kg亚硒酸钠、4.25%葡萄糖腹膜透析液和6 mg/kg亚硒酸钠。腹腔注射28 d后,量取腹腔流出液,计算超滤量。HE染色检测大鼠腹膜组织形态学改变,免疫组织化学染色检测大鼠腹膜组织EMT情况,分光光度法检测大鼠血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和总超氧化物岐化酶(T-SOD)活性。结果 与NC组比较,HG组大鼠腹膜超滤量明显减少,腹膜厚度明显增加(均P <0.05);E-cadherin蛋白表达明显降低,vimentin蛋白表达明显增加(均P <0.05);血清MDA含量明显增加,GSH含量、T-SOD活性明显降低(均P <0.05)。与HG组比较,HG+L-Se组和HG+H-Se组大鼠腹膜超滤量增加,腹膜厚度减少;E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低;MDA含量降低,血清GSH含量、T-SOD活性升高。且HG+L-Se组与HG组比较,上述指标的差异均无统计学意义(均P> 0.05);HG+H-Se组与HG组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论 硒可部分逆转高糖诱导的大鼠腹膜形态和功能的改变,通过抑制氧化应激,延缓大鼠腹膜间皮细胞出现EMT。 展开更多
关键词 腹膜间皮细胞 高糖 氧化应激 上皮-间质转化
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