【目的】设计一种能广泛应对当前国内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株及未来可能出现的新变体的通用多表位疫苗,用于预防和控制PEDV感染。【方法】对国内PEDV流行毒株的S蛋白进行遗传进化分析及相似性比对,筛选出保守序列并预测其抗原性...【目的】设计一种能广泛应对当前国内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株及未来可能出现的新变体的通用多表位疫苗,用于预防和控制PEDV感染。【方法】对国内PEDV流行毒株的S蛋白进行遗传进化分析及相似性比对,筛选出保守序列并预测其抗原性。使用IEDB、DTU Health Tech、ABCpred等免疫信息学工具筛选T淋巴细胞及B淋巴细胞表位,并通过柔性连接子串联重组后构建多表位疫苗。对疫苗的抗原性、过敏原性、毒性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构进行预测。通过免疫模拟评估该疫苗引起的免疫反应。【结果】成功从S蛋白中筛选出4段保守抗原序列,并识别出3个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位、5个辅助T淋巴细胞(HTL)表位和6个线性B细胞表位。这些表位被重组构建成多表位疫苗rPEDV-S,其分子质量为33.53 ku,表现为亲水性,具有2个潜在N-糖基化位点,无过敏原性和毒性。rPEDV-S的二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲分别占32.71%、14.02%和53.27%。三级结构分析显示,95.3%的残基位于Ramachandran有利区,Z-score为-5.30。免疫模拟结果显示,rPEDV-S能诱导强烈的T细胞和B细胞免疫应答。【结论】本研究成功设计出多表位疫苗rPEDV-S,可激发强烈的免疫反应,可为应对国内新型PEDV变异毒株提供新的研究思路及候选疫苗。展开更多
研究旨在利用仿生矿化方法提高戊型肝炎假病毒颗粒(MS2-HEV)的热稳定性,解决戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)核酸检测质控品耐热问题。将重组质粒pET28b-MS2-HEV转化至Rosetta(DE3)超级感受态细胞中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(...研究旨在利用仿生矿化方法提高戊型肝炎假病毒颗粒(MS2-HEV)的热稳定性,解决戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)核酸检测质控品耐热问题。将重组质粒pET28b-MS2-HEV转化至Rosetta(DE3)超级感受态细胞中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后制备MS2-HEV。将MS2-HEV置于pH值7.5、钙离子(Ca2+)终浓度为5.5 mmol/L、钙磷比(Ca/P)为1.67的矿化液中,37℃矿化3 h,制备戊型肝炎假病毒仿生矿化颗粒(MS2-HEV-CaP)。采用RT-qPCR与电镜方法分析其矿化效果与热稳定性。结果显示:MS2-HEV的矿化效率达70%,矿化制备的MS2-HEV-CaP可在37℃条件下稳定保存14 d。研究表明,试验成功制备了MS2-HEV-CaP,利用仿生矿化方法提高了MS2-HEV的热稳定性。展开更多
文摘【目的】设计一种能广泛应对当前国内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株及未来可能出现的新变体的通用多表位疫苗,用于预防和控制PEDV感染。【方法】对国内PEDV流行毒株的S蛋白进行遗传进化分析及相似性比对,筛选出保守序列并预测其抗原性。使用IEDB、DTU Health Tech、ABCpred等免疫信息学工具筛选T淋巴细胞及B淋巴细胞表位,并通过柔性连接子串联重组后构建多表位疫苗。对疫苗的抗原性、过敏原性、毒性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构进行预测。通过免疫模拟评估该疫苗引起的免疫反应。【结果】成功从S蛋白中筛选出4段保守抗原序列,并识别出3个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位、5个辅助T淋巴细胞(HTL)表位和6个线性B细胞表位。这些表位被重组构建成多表位疫苗rPEDV-S,其分子质量为33.53 ku,表现为亲水性,具有2个潜在N-糖基化位点,无过敏原性和毒性。rPEDV-S的二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲分别占32.71%、14.02%和53.27%。三级结构分析显示,95.3%的残基位于Ramachandran有利区,Z-score为-5.30。免疫模拟结果显示,rPEDV-S能诱导强烈的T细胞和B细胞免疫应答。【结论】本研究成功设计出多表位疫苗rPEDV-S,可激发强烈的免疫反应,可为应对国内新型PEDV变异毒株提供新的研究思路及候选疫苗。
