柴胡皂苷A抗抑郁的靶点识别及作用研究 被引量：9

1

作者 任历 邵钰婷 +2 位作者 秦书华 杨文强 刘莹 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期44-51,共8页

中药柴胡具有改善抑郁患者临床治疗效果的作用,柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)是柴胡主要药效成分,本研究以SSA为研究对象,利用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠悬尾(tail suspension test,TST... 中药柴胡具有改善抑郁患者临床治疗效果的作用,柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)是柴胡主要药效成分,本研究以SSA为研究对象,利用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠悬尾(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST)明确SSA的抗抑郁作用。利用计算机分子对接技术分析并验证SSA的作用靶点,并利用细胞热转移测定实验(cellular thermal shift assay,CETSA)和药物亲和力靶稳定性实验(drug affinity responsive target stability,DARTS)验证SSA的靶标;采用Western blotting等技术研究SSA的抗抑郁作用机制。CUMS模型TST和FST结果表明,与模型组相比,SSA能够显著缩短小鼠的不动时间,表明SSA具有显著的抗抑郁作用。计算机分子对接证明了SSA与催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)结合效果较好,表明SSA抗抑郁的作用靶点可能是OXTR。CETSA结果表明在一系列温度梯度处理下,SSA能够明显延缓OXTR的热变性;DARTS实验结果表明,在一系列酶浓度梯度处理下,SSA能够显著降低OXTR对蛋白质水解的敏感性,表明SSA抗抑郁的作用靶点是OXTR。此外,SSA对OXTR下游的ERK通路没有激活作用。本研究表明SSA发挥抗抑郁作用的靶点可能为OXTR,为抑郁症等精神疾病的临床研究治疗和新药开发提供必要的理论与参考依据。 展开更多

关键词 抑郁症 柴胡皂苷A 催产素受体 细胞热转移测定实验 慢性不可预知性温和应激模型

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GRP78-c-Src信号通路介导周期性牵张力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究 被引量：1

2

作者 胡静 崔智华 +2 位作者 黄克强 苏荣健 赵颂 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期304-312,共9页

目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GR... 目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成。结果GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞。周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05)。结论GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化。 展开更多

关键词 周期性牵张力 成骨分化 牙周膜成纤维细胞 葡萄糖调节蛋白78

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载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量：2

3

作者 宋慧娟 徐振华 何东宁 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期128-135,共8页

目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不... 目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不同肝癌细胞中APOC1mRNA表达水平,筛选APOC1低表达的人肝癌HepG2细胞作为研究对象。将pcDNA3.1-APOC1质粒转染至HepG2细胞过表达APOC1 (APOC1过表达组),以转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞为对照组,采用MTS法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测2组细胞增殖活性和增殖率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移细胞数,流式细胞术和TUNEL法检测2组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测2组细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:TCGA数据库分析,肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平低于正常肝组织(P<0.05),并且APOC1 mRNA低表达组肝癌患者预后较差。RT-qPCR法检测,HepG2细胞中APOC1 mRNA表达水平最低,选取该细胞作为后续研究对象。与对照组比较,APOC1过表达组细胞增殖活性和增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.01), S期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与对照组比较,APOC1过表达组细胞中p-ERK、 p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:APOC1高表达能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达和促进cleaved caspase-3蛋白表达有关。 展开更多

关键词 载脂蛋白C1 肝肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 人肝癌HEPG2细胞

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姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的抑制作用 被引量：4

4

作者 徐振华 苏荣健 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期228-233,470,共7页

目的:探讨姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其相关作用机制。方法:采用不同浓度姜油酮和索拉非尼单独或联合对人肝癌HepG2细胞进行干预,MTT法检测细胞增殖率,根据其结果选择姜油酮和索拉非尼的适合浓度。实... 目的:探讨姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其相关作用机制。方法:采用不同浓度姜油酮和索拉非尼单独或联合对人肝癌HepG2细胞进行干预,MTT法检测细胞增殖率,根据其结果选择姜油酮和索拉非尼的适合浓度。实验分为对照组(DMSO)、姜油酮组(30μmol·L^(-1))、索拉非尼组(3μmol·L^(-1))和联合组(姜油酮30μmol·L^(-1)+索拉非尼3μmol·L^(-1)),采用细胞划痕实验检测各组HepG2细胞划痕愈合率,Transwell实验检测各组HepG2细胞穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HepG2细胞中基质金属蛋白酶2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)蛋白表达水平。结果:MTT实验,与对照组比较,姜油酮组和联合组细胞增殖率明显降低(P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞划痕愈合率降低(P<0.05);与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01)。Transwell实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞穿膜细胞数减少(P<0.05);与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组穿膜细胞数明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05);与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:姜油酮可通过降低HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达来抑制人肝癌细胞迁移和侵袭能力,且与索拉非尼联用效果更佳。 展开更多

关键词 肝肿瘤 姜油酮 索拉非尼 细胞迁移 细胞侵袭

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葛根素对顺铂致毒小鼠耳蜗钙蛋白酶2表达的影响 被引量：3

5

作者 马婷婷 党嫣 +4 位作者 贾培丽 鲜建桥 刘双月 许涛 王爱梅 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期58-62,共5页

目的研究葛根素对顺铂致毒小鼠耳蜗钙蛋白酶2(Calpain 2)表达的影响。方法健康BALB/c小鼠60只,随机分成对照组(腹腔注射等量生理盐水)、顺铂组(腹腔注射顺铂4.5mg·kg^(-1)·d^(-1))、顺铂+葛根素组(一侧腹腔注射顺铂4.5mg·... 目的研究葛根素对顺铂致毒小鼠耳蜗钙蛋白酶2(Calpain 2)表达的影响。方法健康BALB/c小鼠60只,随机分成对照组(腹腔注射等量生理盐水)、顺铂组(腹腔注射顺铂4.5mg·kg^(-1)·d^(-1))、顺铂+葛根素组(一侧腹腔注射顺铂4.5mg·kg^(-1)·d^(-1),对侧腹腔注射葛根素200mg·kg^(-1)·d^(-1))和葛根素组(腹腔注射葛根素200mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组15只。各组小鼠给药前后进行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试,于停药并完成ABR测试后取动物听泡显微镜下观察耳蜗外毛细胞缺失情况,应用免疫荧光染色和蛋白质印迹技术检测各组耳蜗Calpain 2的表达。结果顺铂组小鼠ABR阈移和外毛细胞缺失率较对照组明显增大(P<0.01),耳蜗内Calpain 2表达较对照组明显增强(P<0.01);顺铂+葛根素组小鼠ABR阈移和外毛细胞缺失率(底回、中回)较顺铂组明显减少(P<0.01),耳蜗Calpain 2表达较顺铂组明显减弱(P<0.01);而葛根素组ABR阈移、外毛细胞缺失率及Calpain 2表达与对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论葛根素可有效抑制顺铂所致小鼠耳蜗Calpain 2的高表达,以减轻顺铂的耳毒性,改善小鼠听功能。 展开更多

关键词 葛根素 顺铂 耳蜗 钙蛋白酶2

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肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨 被引量：2

6

作者 赵艳 胡静 +4 位作者 杨文强 何鑫 杜佳睿 李宗泽 杨菁 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期174-178,共5页

目的探讨肌肽对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)引起脑微血管内皮细胞(HBMEC)凋亡的保护作用及机制。方法用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧(ROS)含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测... 目的探讨肌肽对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)引起脑微血管内皮细胞(HBMEC)凋亡的保护作用及机制。方法用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧(ROS)含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低(P>0.05),早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+肌肽组(10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L)凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低(P<0.05)。结论肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。 展开更多

关键词 肌肽 脂多糖 人脑微血管内皮细胞 细胞凋亡 NF-κB

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蛋白磷酸酶1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中的表达 被引量：2

7

作者 许涛 马婷婷 +1 位作者 吴喜迪 刘双月 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期176-179,共4页

目的观察D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)的定位表达及作用。方法 40只昆明小鼠随机分为对照组和D-半乳糖组,每组20只。D-半乳糖组颈背部皮下注射D-半乳糖(800mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组... 目的观察D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)的定位表达及作用。方法 40只昆明小鼠随机分为对照组和D-半乳糖组,每组20只。D-半乳糖组颈背部皮下注射D-半乳糖(800mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组每日皮下注射等量生理盐水,连续给药8w;停药后检测血浆总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;免疫荧光法定位PP1在耳蜗的表达,real-time PCR法检测耳蜗中PP1mRNA水平,Western blot法检测小鼠蛋白磷酸酶1核目标亚基(protein phosphates 1nuclear targeting subunit,PNUTS)、PP1及caspase-3的表达。结果与对照组比较,D-半乳糖组小鼠总SOD活力降低而MDA水平升高(均为P<0.01);PP1主要定位表达于小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及血管纹细胞的胞核和胞浆中,且给予D-半乳糖后,小鼠耳蜗中PP1mRNA及其蛋白表达水平显著升高,而PNUTS表达减少,caspase-3表达增加(均为P<0.05)。结论 PP1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节及血管纹细胞中表达,且参与了其耳蜗老化过程。 展开更多

关键词 蛋白磷酸酶1 D-半乳糖 耳蜗 年龄相关性听力损失

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周期性牵张力介导BMP9通过PI3K/AKT信号通路调控人牙周膜成纤维细胞成骨分化 被引量：2

8

作者 张超 胡静 +3 位作者 张君怡 魏克元 孙海豹 黄克强 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第6期656-661,共6页

目的研究在周期性牵张力介导下,骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)能否激活PI3K/AKT信号通路调控人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化。方法利用FlexCell系统对体外培养的hP... 目的研究在周期性牵张力介导下,骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)能否激活PI3K/AKT信号通路调控人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化。方法利用FlexCell系统对体外培养的hPDLFs加载正弦波、形变率10%、频率0.5Hz的周期性牵张力,免疫荧光法检测细胞骨架蛋白的表达及分布,qPCR检测RUNX2、OCN、OPN、OSX mRNA的表达情况,免疫印迹法检测成骨标志蛋白OCN、OPN的表达,加入PI3K信号抑制剂LY294002后AKT、P-AKT以及OCN、OPN的变化。结果与对照组比较,6 h、12 h组的细胞骨架蛋白表达增多且呈受力方向分布,OCN、OPN表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),qPCR检测mRNA的表达趋势与蛋白检测结果一致。结论周期性牵张力介导BMP9可以通过PI3K/AKT信号通路调控hPDLFs成骨分化。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白9 周期性牵张力 人牙周膜成纤维细胞 PI3K/AKT

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zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126对舌鳞状细胞癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量：1

9

作者 刘佳楠 马曌磊 +1 位作者 苏荣健 黄克强 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期495-501,共7页

目的观察zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126对人舌鳞状细胞癌细胞体外增殖与凋亡的影响,并探讨其相关机制,为舌鳞状细胞癌的临床治疗提供新思路。方法将不同浓度的GSK126作用于舌鳞状细胞癌CAL-27细胞,通过甲基噻唑基四唑(MTT)... 目的观察zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126对人舌鳞状细胞癌细胞体外增殖与凋亡的影响,并探讨其相关机制,为舌鳞状细胞癌的临床治疗提供新思路。方法将不同浓度的GSK126作用于舌鳞状细胞癌CAL-27细胞,通过甲基噻唑基四唑(MTT)、克隆形成、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)荧光染色实验检测药物对细胞增殖能力的影响;采用Hoechst33342荧光染色、JC-1法观察细胞凋亡情况;采用Western blot法检测CAL-27细胞内相关蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-9的表达水平。结果GSK126能抑制CAL-27细胞增殖并对细胞凋亡有促进作用。GSK126能下调细胞内p-ERK、Bcl-2的表达水平,同时可增加Bax、Cleaved caspase-9的表达(P<0.05)。结论GSK126可抑制舌鳞状细胞癌CAL-27细胞的增殖,并且能促进其凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK信号通路以及激活Bax/Bcl-2通路有关。 展开更多

关键词 舌鳞状细胞癌 GSK126 增殖 凋亡

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ZHX3基因沉默对BMSCs中BMP2/smad通路的影响 被引量：1

10

作者 李艳芹 张苗苗 +3 位作者 闵鹤鸣 王艳 秦书俭 袁静 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期990-994,共5页

目的:探讨转录抑制因子——锌指蛋白和同源框3(zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)中BMP2/smad通路相关因子骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、磷酸化smad1(... 目的:探讨转录抑制因子——锌指蛋白和同源框3(zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)中BMP2/smad通路相关因子骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、磷酸化smad1(phospho-smad1(或pho-smad1))表达的影响。方法:构建ZHX3低表达慢病毒载体转染大鼠BMSCs,同时设阴性对照空载病毒转染BMSCs及空白对照不做任何处理的BMSCs。采用荧光显微镜下测定细胞转染率、免疫印迹技术鉴定转染效果、免疫细胞化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时BMP2、pho-smad1和smad4的表达情况。细胞经成骨诱导液处理后进行碱性磷酸酶和茜素红染色检测各组细胞成骨能力。结果:1复苏培养的细胞具有BMSCs形态。2转染后,ZHX3低表达组和空载体对照组均表达绿色荧光,转染率分别为(93.18±4.41)%和(92.56±4.35)%,空白对照组不表达荧光,未见转染阳性细胞(F=1 123.464,P<0.05)。3免疫细胞化学及免疫印迹结果显示,BMP2、pho-smad1、smad4于3组细胞内均可见阳性表达,但ZHX3低表达组的BMP2、pho-smad1水平(0.383 0±0.006 3,0.329 1±0.025 8)明显高于空白对照组(0.306 2±0.011 6,0.209 0±0.017 0)和空载体对照组(0.291 2±0.022 2,0.180 0±0.018 7),P<0.05;而ZHX3低表达组smad4的表达(0.107 4±0.004 3)显著低于空白对照组(0.380 1±0.023 6)和空载体对照组(0.353 7±0.016 7),P<0.05。4空白对照组、空载体对照组、ZHX3低表达组均可见碱性磷酸酶阳性表达的细胞及矿化结节,但后者数量均小于前两者。结论:ZHX3基因低表达可延迟BMSCs体外成骨能力,可能通过调控BMP2/smad通路中的smad4来发挥作用。 展开更多

关键词 锌指蛋白和同源框3 基因沉默 骨髓间充质干细胞 骨形成蛋白 SMAD

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鼓室内显微注射慢病毒转染小鼠耳蜗的技术改良 被引量：1

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作者 赵若轩 芦冬博 +6 位作者 梁瑞 杨若函 屈东昊 林宇涵 许涛 刘双月 王爱梅 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期172-176,共5页

目的改良经鼓室内显微注射慢病毒转染小鼠耳蜗的实验技术。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组:1μl/min组(12只)和20μl/min组(12只)小鼠经腹侧入路鼓室内分别以1μl/min和20μl/min的速度显微注射5μl的携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒(LV... 目的改良经鼓室内显微注射慢病毒转染小鼠耳蜗的实验技术。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组:1μl/min组(12只)和20μl/min组(12只)小鼠经腹侧入路鼓室内分别以1μl/min和20μl/min的速度显微注射5μl的携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒(LV3-GFP),人工外淋巴液组(6只)以1μl/min速度注入等量外淋巴液。于手术前、术后1、3、7天各组动物行听性脑干反应(ABR)测试后,进行耳蜗基底膜铺片荧光染色和耳蜗切片免疫荧光染色,并在激光共聚焦显微镜下观察慢病毒转染情况。结果各组小鼠术后1天ABR阈值均较术前明显升高(P<0.01),1μl/min组和人工外淋巴液组术后3天ABR阈值恢复正常,20μl/min组术后7天恢复正常。慢病毒转染后,1μl/min组术后1天在耳蜗毛细胞观察到慢病毒阳性表达,术后3天在耳蜗Corti器、螺旋神经节及血管纹处均可见阳性表达;术后1、3、7天耳蜗中回外毛细胞转染率平均为98.3%、98.1%和98.7%,而20μl/min组术后1天未见明显阳性表达,术后1、3、7天耳蜗中回外毛细胞的转染率分别为4.2%、20.2%和47.3%。结论鼓室内显微慢速注射法可将携带目的基因的慢病毒高效转染至耳蜗组织并表达。 展开更多

关键词 慢病毒 小鼠 耳蜗 基因转染 显微注射

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抗体封闭细胞表面GRP78抑制厄洛替尼耐药性口腔舌鳞状细胞癌细胞的生长和转移

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作者 商家炜 徐振华 +3 位作者 黄克强 王月 王志静 苏荣健 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期489-494,共6页

目的观察应用特异性抗体封闭细胞表面葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对厄洛替尼耐药的口腔舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞生长的抑制作用。方法应用GRP78特异性抗体处理厄洛替尼耐药性舌鳞癌细胞(TCA-8113-ER),采用MTT方法和克隆形成实验检测抗... 目的观察应用特异性抗体封闭细胞表面葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对厄洛替尼耐药的口腔舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞生长的抑制作用。方法应用GRP78特异性抗体处理厄洛替尼耐药性舌鳞癌细胞(TCA-8113-ER),采用MTT方法和克隆形成实验检测抗体封闭对TCA-8113-ER细胞增殖情况及其对厄洛替尼反应性的影响,in-cell Western技术检测GRP78在TCA-8113-ER细胞表面的表达,流式细胞术检测TCA-8113-ER细胞凋亡情况,划痕法和Transwell法检测TCA-8113-ER细胞侵袭和转移情况,Western blotting检测c-MET、AKT和STAT3表达及磷酸化水平。结果GRP78特异性抗体可以抑制TCA-8113-ER细胞的生长,促进其凋亡,增强其对厄洛替尼的反应性,抑制其侵袭和转移,抑制c-MET、AKT和STAT3的磷酸化。结论抗体封闭细胞表面GRP78能够抑制厄洛替尼耐药性舌鳞癌细胞的生长、侵袭和转移,增加其对厄洛替尼的敏感性。 展开更多

关键词 细胞表面葡萄糖调节蛋白78 舌鳞状细胞癌 获得性耐药 厄洛替尼 生长抑制

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葡萄糖调节蛋白78对L858R突变的非小细胞肺癌erlotinib敏感性的影响

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作者 王倩文 徐振华 +3 位作者 王志静 苏荣健 陈学军 谷艳娇 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期701-704,共4页

目的观察葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对L858R突变非小细胞肺癌对erlotinib敏感性的影响。方法应用基因转染技术干预H3255细胞中GRP78及其突变体的表达,应用MTT方法检测erlotinib对细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞术和FITCTUNEL分析凋亡情... 目的观察葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对L858R突变非小细胞肺癌对erlotinib敏感性的影响。方法应用基因转染技术干预H3255细胞中GRP78及其突变体的表达,应用MTT方法检测erlotinib对细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞术和FITCTUNEL分析凋亡情况,应用免疫印迹技术检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化水平。结果过表达GRP78及其多肽结合结构域删除的突变体降低H3255细胞对erlotinib的敏感性,抑制erlotinib诱导的细胞凋亡,促进EGFR、ERK的磷酸化。结论 GRP78通过其ATPase结构域促进非小细胞肺癌细胞对erlotinib耐药。 展开更多

关键词 葡萄糖调节蛋白78 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 L858R突变 ERLOTINIB

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三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析

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作者 费东亮 胡影 +1 位作者 岳金金 马鸣潇 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期47-51,共5页

目的通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选最佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性。方法分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日... 目的通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选最佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性。方法分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性。结果与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率最高(P<0.05),为最佳移植癌细胞株,最佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体最佳生长周期为4~8 d,最佳实验时间为接种后第7天。结论筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型。 展开更多

关键词 鸡胚绒毛尿囊膜 移植瘤 A549细胞株 TCA8113细胞株 QGY7703细胞株

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PCV-2和PCV-3 Cap蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达和鉴定

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作者 董宇璠 金宏凯 +4 位作者 孙莉 费东亮 马跃宇 马鸣潇 李明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期55-59,共5页

为了实现猪圆环病毒2型(PCV-2)和3型(PCV-3)Cap蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,本试验利用刚性连接肽连接PCV-2和PCV-3 Cap基因,构建杆状病毒转移载体pFastBac-PCV-2-3-Cap,双酶切验证正确后,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,... 为了实现猪圆环病毒2型(PCV-2)和3型(PCV-3)Cap蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,本试验利用刚性连接肽连接PCV-2和PCV-3 Cap基因,构建杆状病毒转移载体pFastBac-PCV-2-3-Cap,双酶切验证正确后,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆粒。将重组杆粒转染SF9细胞(昆虫卵巢细胞),盲传3代,获得重组病毒。将重组病毒接种SF9细胞96 h后,通过细胞免疫荧光检测、Western blot和电镜观察对其进行验证,并利用噬斑法检测其效价。结果显示:成功构建重组质粒pFastBac-PCV-2-3-Cap,获得了重组杆粒rAcBacmid-PCV-2-3-Cap,并制备出重组杆状病毒rvAc-PCV-2-3-Cap。重组病毒感染SF9细胞后,目的蛋白成功表达,并可以形成病毒样颗粒,病毒效价为3.41×10^(6) PFU/mL。本试验成功在昆虫细胞-杆状病毒系统中共表达了PCV-2-3-Cap,为防治PCV-2和PCV-3混合感染的二联疫苗研究提供了数据支持。 展开更多

关键词 PCV-2 PCV-3 重组质粒 杆状病毒 真核表达

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外分泌葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌侵袭的影响

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作者 王月 徐振华 苏荣健 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期589-592,共4页

目的观察肝细胞癌细胞外分泌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝细胞癌侵袭的影响。方法应用重组GRP78处理肝细胞癌细胞(SMMC7721和PLC5),采用Transwell方法检测肝细胞癌细胞侵袭,共聚焦显微镜技术观察侵袭伪足的形成情况,免疫印迹技术检测Cor... 目的观察肝细胞癌细胞外分泌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝细胞癌侵袭的影响。方法应用重组GRP78处理肝细胞癌细胞(SMMC7721和PLC5),采用Transwell方法检测肝细胞癌细胞侵袭,共聚焦显微镜技术观察侵袭伪足的形成情况,免疫印迹技术检测Cortactin、FAK和Src表达及磷酸化水平。结果重组GRP78可以促进肝细胞癌细胞侵袭,促进侵袭伪足形成和Cortactin、FAK、Src磷酸化,应用表皮生长因子受体(EGFR)抗体阻断可以抑制重组GRP78对肝细胞癌细胞侵袭的促进作用。结论肝细胞癌细胞外分泌GRP78可以促进肝细胞癌侵袭,EGFR在该过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 外分泌葡萄糖调节蛋白78 肝细胞癌 侵袭 侵袭伪足 表皮生长因子受体

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