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高等院校机能实验室建设标准的专家共识
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作者 范小芳 金宏波 +10 位作者 李英博 胡浩 于利 王玉芳 王慷慨 余华荣 宋德懋 严钰锋 黄武 董为人 龚永生 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期619-624,共6页
新时代对医学人才提出了更高的要求,不仅需要具备扎实的理论基础,还需具备较强的实践能力和创新能力。机能实验室的建设水平对于培养高质量的医学人才起着关键作用。基于国内高等院校机能实验教学的发展现状及趋势,特别是不同地区和院... 新时代对医学人才提出了更高的要求,不仅需要具备扎实的理论基础,还需具备较强的实践能力和创新能力。机能实验室的建设水平对于培养高质量的医学人才起着关键作用。基于国内高等院校机能实验教学的发展现状及趋势,特别是不同地区和院校间发展不平衡的问题,中国病理生理学会机能实验教学工作委员会在充分调查研究和论证的基础上,提出了机能实验室建设标准的专家共识,旨在为各院校提供参考,确保实验室能够高效运作,为学生提供优质的实验教学环境,推动基础医学教育的发展。 展开更多
关键词 机能学实验 实验室建设 实验教学 建设标准 专家共识
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儿童青少年近视防护基本素养问卷(家长版)编制及信效度检验
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作者 高艺博 何矝 +6 位作者 陈潇潇 江露沛 张傲雨 陆阿明 于利 胡海霞 张彦峰 《中国健康教育》 北大核心 2025年第8期723-728,735,共7页
目的编制儿童青少年近视防护基本素养问卷(家长版)并检验其信效度,为调查家长的儿童青少年近视防护素养情况提供测量工具。方法采用文献回顾、质性访谈、专家咨询方法,构建问卷条目池。采用多阶段随机和人口规模成比例相结合的抽样方法... 目的编制儿童青少年近视防护基本素养问卷(家长版)并检验其信效度,为调查家长的儿童青少年近视防护素养情况提供测量工具。方法采用文献回顾、质性访谈、专家咨询方法,构建问卷条目池。采用多阶段随机和人口规模成比例相结合的抽样方法,抽取山东省潍坊市部分儿童青少年的家长进行问卷调查。采用616份样本数据进行问卷的项目分析、探索性因子分析、验证性因子分析和内部一致性信度检验,并选取其中92份样本进行重测信度分析。结果最终形成的儿童青少年近视防护基本素养问卷(家长版)包括家长带孩子参加体育运动的态度、家长关注孩子的眼睛状态的知识、家长保护孩子眼睛的能力与技能、家长关注孩子书写/看电子产品的知识、家长了解睡眠和视力相关的知识、家长带孩子参与体育锻炼的行为与习惯、家长叮嘱孩子书写/看电子产品的姿势的行为与习惯、家长了解饮食与近视相关的知识和家长关注孩子的眼睛状态的行为与习惯9项一级条目、39项二级条目。探索性因子分析结果显示,累计方差贡献率为63.035%;验证性因子分析结果显示,χ^(2)/df=3.610,GFI=0.962,AGFI=0.936,CFI=0.907,IFI=0.908,TLI=0.876,RMSEA=0.071;问卷整体的Cronbach'sα为0.896,各维度的Cronbach'sα系数区间为0.835~0.965。结论儿童青少年近视防护基本素养问卷(家长版)具有较好的信效度,可用于测量家长的儿童青少年近视防护素养水平。 展开更多
关键词 儿童青少年 家长 近视防护 基本素养
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积雪草酸通过Nrf2/HO-1信号通路对脂多糖诱导大鼠海马神经元损伤的改善作用
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作者 白燕燕 周禹彤 +1 位作者 隋海娟 刘卓 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期85-95,共11页
目的:探讨积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导大鼠原代海马神经元炎症和氧化应激损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:原代培养大鼠海马神经元(免疫荧光染色法鉴定细胞纯度)分为对照组、LPS组(10 mg·L^(-1)LPS)、LPS+AA组(10 mg·L^... 目的:探讨积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导大鼠原代海马神经元炎症和氧化应激损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:原代培养大鼠海马神经元(免疫荧光染色法鉴定细胞纯度)分为对照组、LPS组(10 mg·L^(-1)LPS)、LPS+AA组(10 mg·L^(-1)LPS+10、20和40μmol·L^(-1)AA)、AA组(20μmol·L^(-1)AA)、ML385组[10μmol·L^(-1)核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂]和LPS+ML385+AA组(10mg·L^(-1)LPS+10μmol·L^(-1)ML385+20μmol·L^(-1)AA);给药处理后,噻唑蓝(MTT)法检测各组大鼠海马神经元的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组大鼠海马神经元LDH漏出率,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组大鼠海马神经元上清液中炎症因子[白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平以及各组大鼠海马神经元中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,Griess法测定各组大鼠海马神经元上清液中一氧化氮(NO)水平,免疫荧光法检测各组大鼠海马神经元中Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达情况;Western blotting法检测各组大鼠海马神经元中Nrf2、HO-1、核因子κB(NF-κB)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LPS组大鼠海马神经元中的海马神经元存活率、SOD活性和Bcl-2表达水平明显降低(P<0.01),LDH漏出率、IL^(-1)β和TNF-α水平、MDA水平、NO水平以及NF-κB蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),Nrf2和HO-1的荧光强度明显减弱,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与LPS组比较,LPS+10μmol?L^(-1)AA组和LPS+20μmol?L^(-1)AA组大鼠海马神经元存活率、SOD活性和Bcl-2表达水平明显升高(P<0.01),LDH漏出率、IL^(-1)β和TNF-α水平、MDA水平、NO水平以及NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Nrf2和HO-1的荧光强度明显升高(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与LPS+20μmol?L^(-1)AA组比较,LPS+ML385+AA组海马神经元中Nrf2和HO-1荧光强度明显减弱(P<0.01),细胞核和细胞质中Nrf2、细胞中HO-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:AA可改善LPS诱导的原代培养大鼠海马神经元炎症和氧化应激损伤,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 积雪草酸 海马神经元 炎症 氧化应激 核因子E2相关因子2 血红素氧合酶1
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缝隙连接蛋白β2对肺腺癌患者预后及肺腺癌A549细胞生物学行为的影响
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作者 王繁 温馨 +1 位作者 王艺璇 王远 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期716-726,共11页
目的:探讨缝隙连接蛋白β2 (GJB2)在肺腺癌(LUAD) A549细胞中的表达情况和生物学功能,为LUAD治疗提供参考。方法:利用TIMER数据库分析多种肿瘤中GJB2基因表达差异,GEPIA数据库检测LUAD中GJB2 mRNA表达情况,分析GJB2基因与LUAD不同临床... 目的:探讨缝隙连接蛋白β2 (GJB2)在肺腺癌(LUAD) A549细胞中的表达情况和生物学功能,为LUAD治疗提供参考。方法:利用TIMER数据库分析多种肿瘤中GJB2基因表达差异,GEPIA数据库检测LUAD中GJB2 mRNA表达情况,分析GJB2基因与LUAD不同临床分期的相关性,采用Kaplan-Meier plotter数据库分析GJB2蛋白与LUAD患者预后的相关性。收集111例LUAD患者癌组织及癌旁正常肺组织样本,采用免疫组织化学染色法观察LUAD患者癌组织和癌旁正常肺组织中GJB2蛋白表达情况。体外培养人肺腺癌A549细胞,将A549细胞分为GJB2过表达组(OE-GJB2组,转染GJB2过表达质粒)及其阴性对照组(OE-NC组,转染GJB2空载质粒)、小干扰RNA (si-RNA)-GJB2组(si-GJB2组,转染GJB2-siRNA)及其阴性对照组(si-NC组,转染对照si-RNA),采用Western blotting法验证细胞转染效率。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组A549细胞增殖活性,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组A549细胞阳性表达率,克隆形成实验检测各组A549细胞克隆形成数,细胞划痕实验检测各组A549细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组A549细胞中侵袭细胞数,Western blotting法检测各组A549细胞中GJB2蛋白和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果:GJB2基因在多种肿瘤中均存在异常表达;与癌旁正常肺组织比较,LUAD患者癌组织中GJB2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且GJB2的高表达与LUAD患者癌的临床病理分期具有关联性(P<0.05);与GJB2低表达LUAD患者比较,GJB2高表达LUAD患者的总生存期明显减少[风险比(HR)=1.71,95%CI:1.34~2.18,P<0.05];GJB2蛋白在癌旁正常肺泡和支气管上皮细胞中均阴性表达,与癌旁正常肺组织比较,LUAD患者癌组织中GJB2蛋白表达明显增强;LUAD患者癌组织中GJB2蛋白阳性表达与淋巴结转移具有明显关联性(P<0.05),但与患者性别(P=0.626)、年龄(P=0.639)和TNM分期(P=0.837)无关联性(P>0.05)。CCK-8法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞增殖活性明显升高(P<0.05或P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01)。EdU染色法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中EdU阳性表达率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞中EdU阳性表达率明显降低(P<0.01)。克隆形成实验,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞克隆形成数明显增加(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞克隆形成数明显减少(P<0.01)。Transwell小室实验,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。细胞划痕实验,细胞划痕24 h后,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞迁移率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Western blotting法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中GJB2和N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),E钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中GJB2和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:GJB2在LUAD患者癌组织中高表达,并与LUAD患者的不良预后有关。GJB2可促进A549细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白β2 肺腺癌 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移 上皮-间质转化
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miR-155-5p/sirt1信号通路对白色念珠菌诱导川崎病模型小鼠免疫功能的影响
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作者 魏刚 田晶 +2 位作者 梁冬雪 张凤香 陈月 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第2期307-312,320,共7页
目的探讨miR-155-5p/沉默信息调节因子1(sirt1)信号通路对白色念珠菌诱导川崎病模型小鼠免疫功能的影响。方法将C56BL/6小鼠分为对照组、川崎病组、拮抗剂对照组、miR-155-5p拮抗剂组、miR-155-5p拮抗剂+si-NC组、miR-155-5p拮抗剂+si-s... 目的探讨miR-155-5p/沉默信息调节因子1(sirt1)信号通路对白色念珠菌诱导川崎病模型小鼠免疫功能的影响。方法将C56BL/6小鼠分为对照组、川崎病组、拮抗剂对照组、miR-155-5p拮抗剂组、miR-155-5p拮抗剂+si-NC组、miR-155-5p拮抗剂+si-sirt1组,每组12只。除对照组外,其他组小鼠均通过腹腔注射白色念珠菌水溶物构建川崎病模型。建模成功后进行给药处理,1 d给药1次,持续7 d。qRT-PCR检测冠状动脉中miR-155-5p表达;Western blot检测冠状动脉中sirt1蛋白;HE染色检测冠状动脉的病理变化;检测小鼠胸腺指数和脾指数;流式细胞术检测外周血中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg);ELISA检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;验证sirt1与miR-155-5p靶向关系。结果与对照组比较,川崎病组小鼠冠状动脉中有大量炎性细胞浸润,miR-155-5p表达、Th17比例、Th17/Treg比例、IL-17水平升高,sirt1蛋白表达、胸腺指数、脾指数、Treg比例、IL-10水平降低(均P<0.05);与川崎病组比较,miR-155-5p拮抗剂组小鼠冠状动脉中炎性细胞浸润现象有所缓解,miR-155-5p表达、Th17比例、Th17/Treg比例、IL-17水平降低,sirt1蛋白表达、胸腺指数、脾指数、Treg比例、IL-10水平升高(均P<0.05);si-sirt1减弱了抑制miR-155-5p对川崎病小鼠Th17/Treg平衡的促进作用以及对血管炎症的抑制作用,miR-155-5p靶向调控sirt1。结论抑制miR-155-5p促进川崎病小鼠Th17/Treg平衡,抑制血管炎症的机制可能与上调sirt1表达有关。 展开更多
关键词 miR-155-5p 沉默信息调节因子1 川崎病 辅助性T细胞17 调节性T细胞 炎症 免疫
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KIAA1522对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制
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作者 王艺慧 张晴 +1 位作者 李英楠 叶丽平 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期727-739,共13页
目的:探讨KIAA1522对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其信号机制。方法:采用生物信息学方法分析75例人非小细胞肺癌(NSCLC)组织和癌旁正常肺组织中KIAA1522 mRNA及蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测NSCLC组织及癌旁正常肺组织... 目的:探讨KIAA1522对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其信号机制。方法:采用生物信息学方法分析75例人非小细胞肺癌(NSCLC)组织和癌旁正常肺组织中KIAA1522 mRNA及蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测NSCLC组织及癌旁正常肺组织中KIAA1522蛋白表达情况,Western blotting法检测在多种肺癌细胞系中KIAA1522蛋白表达水平。分别将KIAA1522-小干扰RNA(siRNA)和过表达质粒转染至肺癌H1299及A549细胞。KIAA1522-siRNA实验分为空白组、阴性对照组(si-NC组)、KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组;KIAA1522过表达实验分为对照组、空载对照组(OE-NC组,转染KIAA1522过表达空载质粒)、过表达KIAA1522组(OE-KIAA1522组,转染KIAA1522过表达质粒)、过表达KIAA1522+MK2206组[OE-KIAA1522+MK2206组,共转染KIAA1522过表达质粒和蛋白激酶B (AKT)信号通路抑制剂MK2206]和MK2206组(转染MK2206)。采用Western blotting法验证各组细胞转染效率,噻唑蓝(MTT)法检测各组肺癌细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组肺癌细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组肺癌细胞中侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化AKT (p-AKT)、总AKT (t-AKT)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、血管内皮生长因子(VEGF)和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白[波形蛋白(Vimentin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)和E钙黏蛋白(E-cadherin)]蛋白表达水平。结果:生物信息学方法分析,与癌旁正常肺组织比较,NSCLC组织中KIAA1522 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。免疫组织化学染色法,与癌旁正常肺组织比较,NSCLC组织中KIAA1522蛋白阳性表达率明显升高(P<0.05),且与TNM分期有关(P<0.01)。Western blotting法,与正常肺上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌细胞系PC9、H1299、H460、A549、H1975和H226细胞中KIAA1522蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与si-NC组比较,KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组H1299细胞中KIAA1522蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-KIAA1522组A549细胞中KIAA1522蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。MTT法,细胞培养24、48和72 h时,与si-NC组比较,KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组H1299细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-KIAA1522组A549细胞增殖活性明显升高(P<0.05);与OE-KIAA1522组比较,OE-KIAA1522+MK2206组A549细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与OE-KIAA1522+MK2206组比较,MK2206组A549细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。细胞划痕实验,与si-NC组比较,KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组H1299细胞迁移率均明显降低(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-KIAA1522组A549细胞迁移率明显升高(P<0.01);与OE-KIAA1522组比较,OE-KIAA1522+MK2206组A549细胞迁移率明显降低(P<0.05);与OE-KIAA1522+MK2206组比较,MK2206组A549细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与si-NC组比较,KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组H1299细胞中侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-KIAA1522组A549细胞侵袭细胞数明显增多(P<0.01);与OE-KIAA1522组比较,OE-KIAA1522+MK2206组A549细胞中侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与OE-KIAA1522+MK2206组比较,MK2206组A549细胞中侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Western blotting法,与si-NC组比较,KIAA1522-siRNA#1组和KIAA1522-siRNA#2组H1299细胞中p-AKT、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin及VEGF蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-KIAA1522组A549细胞中p-AKT、 Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin和VEGF蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与OE-KIAA1522组比较,OE-KIAA1522+MK2206组A549细胞中p-AKT、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin和VEGF蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与OE-KIAA1522+MK2206组比较,MK2206组A549细胞中Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin和VEGF蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:KIAA1522蛋白可上调肺癌细胞中Cyclin D1、EMT相关蛋白和VEGF蛋白表达,促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制与激活AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 KIAA1522 癌 非小细胞肺 蛋白激酶B 细胞增殖 细胞侵袭
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胶质瘤中MICALL2的表达与临床意义
7
作者 隋馨瑶 高静 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第7期590-594,共5页
目的检测MICALL2在胶质瘤中的表达,分析MICALL2与胶质瘤患者临床病理特征的相关性及其预后价值,推测MICALL2在胶质瘤中的生物学作用。方法采用免疫组织化学染色检测MICALL2在芯片胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异。利用癌症基因组图... 目的检测MICALL2在胶质瘤中的表达,分析MICALL2与胶质瘤患者临床病理特征的相关性及其预后价值,推测MICALL2在胶质瘤中的生物学作用。方法采用免疫组织化学染色检测MICALL2在芯片胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库、基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库以及正常组织和肿瘤组织的基因表达数据库2(GENT2)分析MICALL2与胶质瘤患者预后的相关性。采用基因集富集分析(GSEA)鉴定低级别胶质瘤中MICALL2的差异表达基因,推测MICALL2在胶质瘤中的生物学作用。结果胶质瘤组织中MICALL2阳性率高于正常脑组织(P<0.001),MICALL2的表达量与胶质瘤患者TNM病理分期(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)显著相关。生存分析结果显示,MICALL2可能是胶质瘤患者预后不良的影响因素。GSEA富集分析结果显示,MICALL2在胶质瘤中可能与细胞间黏附等相关。结论MICALL2在胶质瘤中的表达水平升高并影响预后,提示其可能成为胶质瘤患者临床治疗和预后判断的潜在靶点。 展开更多
关键词 胶质瘤 MIACLL2 临床意义 预后
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TRIM24蛋白在人肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义
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作者 耿海营 于焱 +2 位作者 代春美 温有锋 李宁 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期486-492,共7页
目的:探讨三重基序蛋白24(TRIM24)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达,阐明TRIM24蛋白与ccRCC患者临床病理特征和预后的关联。方法:选取术前均未行放化疗的90例ccRCC患者的癌组织和癌旁正常组织。采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测c... 目的:探讨三重基序蛋白24(TRIM24)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达,阐明TRIM24蛋白与ccRCC患者临床病理特征和预后的关联。方法:选取术前均未行放化疗的90例ccRCC患者的癌组织和癌旁正常组织。采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测ccRCC组织中TRIM24蛋白表达水平,分析ccRCC组织与癌旁正常组织中TRIM24蛋白表达水平的差异。计算TRIM24蛋白表达评分及其平均值,并根据平均值将ccRCC患者分为TRIM24蛋白低表达组和TRIM24蛋白高表达组;分析TRIM24蛋白表达水平与患者不同临床病理特征之间的关联,分析TRIM24蛋白表达水平与患者预后之间的关系。结果:免疫组织化学法,TRIM24蛋白在ccRCC患者癌组织细胞核和细胞质中均有表达,且癌组织中TRIM24蛋白表达水平与癌旁正常组织比较差异均有统计学意义(P<0.05);ccRCC组织细胞核中TRIM24蛋白表达水平与患者年龄、性别和肿瘤大小有关联(P<0.05);KaplanMeier生存分析,TRIM24蛋白在ccRCC组织细胞质中高表达、年龄大和病理分级高的患者总生存期短于TRIM24蛋白低表达、年龄小和病理分级低的患者(P<0.05);多因素Cox回归分析,与TRIM24蛋白低表达和病理分级低的患者比较,ccRCC组织细胞质中TRIM24蛋白高表达和病理分级高的患者预后较差(P<0.05)。结论:ccRCC癌组织的细胞质中TRIM24高表达和病理分级高的患者术后生存率较低,预后较差。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 三重基序蛋白24 免疫组织化学 病理分级 预后
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纳尔逊海湾病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的转录物组分析
9
作者 马竹萍 陈淼娟 +4 位作者 孙绿茵 付纹瑞 田晶 李永刚 陶晓莉 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第4期340-345,共6页
目的通过分析纳尔逊海湾病毒(NBV)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7转录物组测序结果,筛选差异表达基因,探讨固有免疫应答在呼肠孤病毒感染中的作用机制。方法用感染复数为30的NBV-Miyazaki病毒株感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,运用高通量转录物组... 目的通过分析纳尔逊海湾病毒(NBV)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7转录物组测序结果,筛选差异表达基因,探讨固有免疫应答在呼肠孤病毒感染中的作用机制。方法用感染复数为30的NBV-Miyazaki病毒株感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,运用高通量转录物组测序技术,以q<0.05且|log2FC|≥1为条件,筛选感染组和对照组的差异表达基因,利用基因本体论(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)对差异表达基因进行富集分析。结果与对照组相比,感染组差异表达的基因共442个,其中显著上调的基因381个,显著下调的基因61个。差异表达基因在GO富集中主要与固有免疫反应、对病毒的防御反应、细胞因子的产生以及细胞对细胞因子刺激的反应等功能相关,在KEGG中主要富集到Toll样受体信号通路、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体信号通路、PI3K/Akt等信号通路。结论RAW264.7细胞被NBV-Miyazaki病毒感染后,可以通过激活模式识别受体,促进细胞因子、趋化因子和其他免疫相关因子释放,增强抗体依赖细胞介导的细胞毒作用,以发挥免疫效应,为探究固有免疫在NBV-Miyazaki病毒感染过程中的作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 纳尔逊海湾病毒 巨噬细胞 转录物组
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日粮能量和蛋白质水平对大骨鸡生长性能、屠宰性能及肉品质的影响
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作者 刘政宇 李孝涵 +5 位作者 张宝刚 王滔 王杰 朱弘焱 田玉民 苏玉虹 《现代畜牧兽医》 2025年第8期45-49,共5页
试验旨在探究不同能量蛋白水平饲料对大骨鸡公鸡生长性能、屠宰性能及肉品质的影响,为大骨鸡育肥的饲养管理提供参考。将同一批孵化所获笼养大骨鸡公鸡雏鸡根据饲喂不同能量、蛋白水平日粮随机分为3组,每组3个重复,每个重复10只。各组... 试验旨在探究不同能量蛋白水平饲料对大骨鸡公鸡生长性能、屠宰性能及肉品质的影响,为大骨鸡育肥的饲养管理提供参考。将同一批孵化所获笼养大骨鸡公鸡雏鸡根据饲喂不同能量、蛋白水平日粮随机分为3组,每组3个重复,每个重复10只。各组均使用商品雏鸡配合饲料育雏至6周龄。处理A组在育肥前、后期均饲喂高能量、高蛋白水平日粮;处理B组在育肥前期饲喂低能量、低蛋白水平日粮,后期饲喂高能量、低蛋白水平日粮;处理C组为对照组,在育肥前、后期均饲喂低能量、低蛋白水平日粮。结果显示:12周龄末,处理A组大骨鸡公鸡体重显著高于处理C组(P<0.05);20周龄末,处理A组大骨鸡公鸡体重极显著高于处理C组(P<0.01)。试验期间各组大骨鸡公鸡平均日增重、平均日采食量差异均不显著(P>0.05)。育肥前期,处理A组大骨鸡公鸡料重比显著低于处理C组(P<0.05)。育肥期间,处理A组、处理B组大骨鸡公鸡成活率显著低于处理C组(P<0.05)。各组大骨鸡公鸡全净膛率、翅膀率、腿肌率、胸肌率、皮下脂肪厚差异均不显著(P>0.05);处理B组大骨鸡公鸡半净膛率显著低于处理C组(P<0.05),处理A组、处理B组大骨鸡公鸡腹脂率、皮下脂肪宽极显著高于处理C组(P<0.01),处理A组大骨鸡公鸡屠宰率显著低于处理B组、处理C组(P<0.05)。各组大骨鸡公鸡胸肌和腿肌肉色、剪切力、滴水损失率、pH值差异均不显著(P>0.05)。研究表明,饲喂高能量、高蛋白水平日粮可提高大骨鸡公鸡增重性能,但体脂率高、成活率低;低能量、低蛋白水平日粮会降低大骨鸡公鸡增重性能,但体脂率低、成活率高。日粮的能量和蛋白水平对大骨鸡肉品质影响较小。 展开更多
关键词 大骨鸡 日粮能量水平 日粮蛋白水平 生长性能 屠宰性能
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大骨鸡不同品系雏鸡胎粪微生物群落特征分析
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作者 石安琪 李孝涵 +3 位作者 朱弘焱 王洪才 田玉民 苏玉虹 《现代畜牧兽医》 2025年第7期34-39,共6页
研究旨在探讨不同品系大骨鸡雏鸡胎粪微生物菌群差异。试验随机选取青脚快大(A组)、黄脚快大(B组)、青脚高繁(C组)、黄脚高繁(D组)各5只1日龄雏鸡采集新鲜胎粪(即共20份样本),进行胎粪微生物16S rRNA测序和分析。结果显示,各组大骨鸡雏... 研究旨在探讨不同品系大骨鸡雏鸡胎粪微生物菌群差异。试验随机选取青脚快大(A组)、黄脚快大(B组)、青脚高繁(C组)、黄脚高繁(D组)各5只1日龄雏鸡采集新鲜胎粪(即共20份样本),进行胎粪微生物16S rRNA测序和分析。结果显示,各组大骨鸡雏鸡胎粪微生物组成具有相似性。alpha多样性分析结果显示,C组雏鸡胎粪微生物物种丰富度最高。beta多样性分析结果显示,C组的微生物群落与其他组均存在差别。4组雏鸡胎粪样本进行比较分析,A组中拟杆菌纲(Bacteroidia)和拟杆菌门(Bacteroidota)的丰度较高;C组中阿克曼氏菌属(Akkermansia)和疣微菌目(Verrucomicrobiales)的丰度较高;D组中溶血杆菌属(Solirubrobacter)、噬热链球菌纲(Thermoleophilia)的丰度较高,产碱菌属(Alcaligenes)的丰度最低。4个不同品系雏鸡胎粪微生物菌群共涉及7个第一层次代谢通路,其中排在前3位的是生物合成中氨基酸合成和辅助因子、维生素的生物合成以及核苷和核苷酸生物合成。研究表明,不同品系大骨鸡雏鸡胎粪微生物丰度结构存在显著差异,各品系雏鸡胎粪微生物菌群功能主要是生物合成和碳水化合物降解。 展开更多
关键词 大骨鸡 雏鸡 品系 粪便微生物 高通量测序
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近交系大骨鸡不同杂交组合产蛋性能的研究
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作者 王杰 李孝涵 +5 位作者 丛玲 王滔 刘政宇 朱弘焱 田玉民 苏玉虹 《现代畜牧兽医》 2025年第6期39-44,共6页
试验旨在研究近交系大骨鸡不同杂交组合的产蛋性能,设置5组,分别为黄脚高繁♂×青脚高繁♀(A组)、青脚高繁♂×黄脚高繁♀(B组)、黄脚体大♂×青脚体大♀(C组)青脚体大♂×黄脚体大♀(D组)以及纯繁近交品系(E组),各组... 试验旨在研究近交系大骨鸡不同杂交组合的产蛋性能,设置5组,分别为黄脚高繁♂×青脚高繁♀(A组)、青脚高繁♂×黄脚高繁♀(B组)、黄脚体大♂×青脚体大♀(C组)青脚体大♂×黄脚体大♀(D组)以及纯繁近交品系(E组),各组饲养管理条件完全相同,对比产蛋性能和蛋品质的差异。试验期52周。结果显示,18~52周龄,B组产蛋率显著高于E组(P<0.05),C组、D组平均蛋重极显著大于E组(P<0.01),B组、C组、D组产蛋量极显著高于E组(P<0.01),A组、B组、C组、D组料蛋比极显著低于E组(P<0.01)。研究表明,近交系大骨鸡不同杂交组合产蛋性能均明显优于纯繁近交品系;青脚高繁♂×黄脚高繁♀组合具有较高的产蛋率且蛋品质较好,黄脚体大♂×青脚体大♀组合平均蛋重以及累计产蛋量均大于其他杂交组合且平均料蛋比最低。近交系大骨鸡不同杂交组合的产蛋性能存在明显差异,可以根据各自特点进行配套利用,保持产蛋性能的持续提高。 展开更多
关键词 大骨鸡 近交系 杂交组合 产蛋性能
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负性注意偏向的神经递质基础:来自大鼠抑郁症模型的证据 被引量：9
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作者 张立伟 王苏妍 +3 位作者 高野 宋若冰 张芷毓 李红 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期807-811,共5页
目的探讨神经化学物质对大鼠负性注意偏向的影响。方法应用不可预知慢性温和应激(CUMS)建立大鼠抑郁症模型(实验组)。对实验组和对照组大鼠进行注意偏向测试;采集2组大鼠海马附近神经组织,利用高效液相色谱检测神经递质5-羟色胺(5-HT)... 目的探讨神经化学物质对大鼠负性注意偏向的影响。方法应用不可预知慢性温和应激(CUMS)建立大鼠抑郁症模型(实验组)。对实验组和对照组大鼠进行注意偏向测试;采集2组大鼠海马附近神经组织,利用高效液相色谱检测神经递质5-羟色胺(5-HT)、5-羟(基)吲哚乙酸(5-HIAAA)、去甲肾上腺素(NE)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、内啡肽(EP)、高香草酸(HVA)水平;分析神经递质水平与注意偏向的相关性。结果CUMS抑郁症大鼠模型造模成功;实验组大鼠出现了抑郁症状;实验组大鼠出现了明显的负性偏向;实验组大鼠5-HIAA、DOPAC水平明显高于对照组,5-HT、EP和HVA水平则明显低于对照组,而NE水平无统计学差异;实验组大鼠5-HIAA和HVA与注意偏向的变化有显著关联,5-HT和DOPAC水平的变化对注意偏向有影响。结论CUMS抑郁症模型适用于大鼠。抑郁症大鼠神经递质水平明显不同于正常大鼠,神经递质对抑郁症大鼠的注意偏向有直接影响。 展开更多
关键词 负性注意偏向 不可预知慢性温和应激抑郁症模型 大鼠 五-羟色胺 5-羟(基)吲哚乙酸 去甲肾上腺素 高香草酸
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基于动物医学实验平台的设计性实验教学研究 被引量：2
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作者 张玲 李丽 +1 位作者 王宏军 蒋月 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期118-119,共2页
实验教学作为我国高等教育的重要组成部分,是培养学生将理论知识、动手能力和实践能力融为一体的重要过程。为了打破学科界限、有效开展多种类的大型实验,锦州医科大学将学科实验室按专业进行整合,重新组建了40余个实验平台,动物医学实... 实验教学作为我国高等教育的重要组成部分,是培养学生将理论知识、动手能力和实践能力融为一体的重要过程。为了打破学科界限、有效开展多种类的大型实验,锦州医科大学将学科实验室按专业进行整合,重新组建了40余个实验平台,动物医学实验教学平台就是其中之一。实验平台建立后,不仅需要新的运行机制和管理模式,更需要新的实验教学内容与之相适应。动物医学实验平台的任课教师就对实验教学内容进行了整合和改革,开设了新型实验——设计性实验。 展开更多
关键词 学科实验室 任课教师 我国高等教育 学科界限 设计性实验教学 实验平台 医学实验教学 大型实验
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基础转录激活因子1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义 被引量：1
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作者 穆天驰 刘超 +3 位作者 富帅 李启阳 王馨梦 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期94-99,219,共7页
目的:探讨基础转录激活因子1 (ABT1)蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者临床参数和预后的相关性,阐明ABT1在胃癌发生发展中的作用。方法:选择100例胃癌患者的胃癌组织和80例与其配对的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测ABT1蛋白在癌... 目的:探讨基础转录激活因子1 (ABT1)蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者临床参数和预后的相关性,阐明ABT1在胃癌发生发展中的作用。方法:选择100例胃癌患者的胃癌组织和80例与其配对的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测ABT1蛋白在癌组织及癌旁组织中的表达情况。对免疫组织化学结果中染色细胞的比例和染色程度进行半定量分析,对半定量分析结果与胃癌患者临床参数的关系进行统计学分析。采用Kaplan-Meier法分析ABT1蛋白表达水平与胃癌患者生存期的相关性。结果:ABT1蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的细胞核和细胞质中均有表达,且胃癌组织中ABT1蛋白表达水平低于癌旁组织(P=0.021);胃癌患者胃癌组织中ABT1蛋白表达水平与胃癌组织病理分级呈负相关关系(r=-0.224,P=0.026)。Kaplan-Meier生存曲线分析,胃癌患者ABT1蛋白高表达与预后良好呈正相关关系(HR=1.483,P<0.01),且ABT1蛋白高表达的胃癌患者生存率明显高于ABT1蛋白低表达的胃癌患者(HR=2.411,P=0.027)。结论:ABT1蛋白在胃癌组织中低表达,提示其可作为胃癌预后良好的标志因子之一。 展开更多
关键词 基础转录激活因子1 胃肿瘤 免疫组织化学 组织芯片
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PolyI:C刺激猪PK15细胞后病毒感染应答基因未注释转录本鉴定及其特征分析
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作者 赵为民 王红 +5 位作者 徐盼 陈哲 陶晓莉 李碧侠 付言峰 程金花 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1622-1631,共10页
【目的】鉴定猪PK15细胞在类病毒聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的数量、剪接类型、新蛋白编码与分子结构,为进一步研究这些未注释转录本的功能奠定基础。【方法】将猪PK15细胞分为对照组和试验组,每组3个重... 【目的】鉴定猪PK15细胞在类病毒聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的数量、剪接类型、新蛋白编码与分子结构,为进一步研究这些未注释转录本的功能奠定基础。【方法】将猪PK15细胞分为对照组和试验组,每组3个重复;试验组加入终浓度为20μg/mL的PolyI:C,对照组加入等体积(2μL)的PBS,两组在37℃、5%CO_(2)条件下分别刺激6 h后进行Nanopore测序,鉴定两组的总转录本与差异表达基因。对差异表达基因进行GO功能分析,进一步筛选病毒感染的应答基因。对总转录本与Ensemble注释的转录本序列进行比较,发现未注释转录本。将病毒感染应答基因的未注释转录本与其对应的Ensemble注释转录本序列进行比对,分析未注释转录本的剪接类型和编码蛋白。【结果】PolyI:C刺激后,两组共鉴定蛋白编码的转录本61505个,其中有Ensemble数据库注释的39497个,未注释的转录本22008个,未注释转录本数量占总数的35.78%。同时两组鉴定到71个差异蛋白编码基因,与对照组相比,试验组上调表达基因57个,下调表达基因14个。GO功能富集分析显示,这些差异表达基因富集到20个生物过程,其中前3个生物过程分别是防御病毒反应、Ⅰ型干扰素信号通路和病毒应答,均与病毒感染应答相关。24个病毒感染应答的基因有16个基因存在未注释转录本,其中CCL 5、IFI 6、BST 2和MX 1基因未注释转录本的数量多于其Ensemble注释的总转录本数量,且大部分未注释转录本产生新的蛋白序列。IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的未注释转录本有差异表达。【结论】本研究系统地鉴定了猪PK15细胞受PolyI:C刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的分子特征,筛选的IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的差异表达的未注释转录本可能具有重要生物学作用,为进一步解析宿主基因在抗病毒反应中的复杂转录调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 Nanopore测序 PolyI:C 病毒感染 转录本 选择性剪接
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柴胡皂苷A抗抑郁的靶点识别及作用研究 被引量：9
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作者 任历 邵钰婷 +2 位作者 秦书华 杨文强 刘莹 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期44-51,共8页
中药柴胡具有改善抑郁患者临床治疗效果的作用,柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)是柴胡主要药效成分,本研究以SSA为研究对象,利用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠悬尾(tail suspension test,TST... 中药柴胡具有改善抑郁患者临床治疗效果的作用,柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)是柴胡主要药效成分,本研究以SSA为研究对象,利用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠悬尾(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST)明确SSA的抗抑郁作用。利用计算机分子对接技术分析并验证SSA的作用靶点,并利用细胞热转移测定实验(cellular thermal shift assay,CETSA)和药物亲和力靶稳定性实验(drug affinity responsive target stability,DARTS)验证SSA的靶标;采用Western blotting等技术研究SSA的抗抑郁作用机制。CUMS模型TST和FST结果表明,与模型组相比,SSA能够显著缩短小鼠的不动时间,表明SSA具有显著的抗抑郁作用。计算机分子对接证明了SSA与催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)结合效果较好,表明SSA抗抑郁的作用靶点可能是OXTR。CETSA结果表明在一系列温度梯度处理下,SSA能够明显延缓OXTR的热变性;DARTS实验结果表明,在一系列酶浓度梯度处理下,SSA能够显著降低OXTR对蛋白质水解的敏感性,表明SSA抗抑郁的作用靶点是OXTR。此外,SSA对OXTR下游的ERK通路没有激活作用。本研究表明SSA发挥抗抑郁作用的靶点可能为OXTR,为抑郁症等精神疾病的临床研究治疗和新药开发提供必要的理论与参考依据。 展开更多
关键词 抑郁症 柴胡皂苷A 催产素受体 细胞热转移测定实验 慢性不可预知性温和应激模型
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过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究 被引量：4
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作者 田慧梅 何韶衡 张慧云 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期250-257,共8页
目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis,AR)、过敏性哮喘(allergy asthma,AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达... 目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis,AR)、过敏性哮喘(allergy asthma,AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达的影响。方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的100例志愿者,包括点刺实验阴性的19例健康对照(health control,HC)志愿者、点刺实验阳性的40例AR患者、26例AA患者、15例ARA患者。流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(home dust mite allergen extract,HDME)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract,ASWE)、梧桐过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract,PPE)刺激前后患者外周血B细胞中TLR9的表达;并采用野生(WT)小鼠和FcεRI基因敲除(FcεRI-KO)小鼠建立AR和AA致敏模型,检测过敏原以及FcεRI对B细胞中TLR9表达的影响。结果AR、AA、ARA患者外周血B细胞中TLR9的表达和平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均较HC组有所增高;过敏原激发后,AR、AA患者血液B细胞中TLR9的表达和MFI升高(P<0.05)。WT小鼠和FcεRI-KO小鼠与NS对照组相比,过敏原激发后,AR、AA小鼠外周血B细胞TLR9^(+)高表达,但差异无统计学意义,而几乎每组MFI均升高;与NS对照组相比,过敏原激发后FcεRI基因敲除的AA小鼠肺组织中TLR9^(+)B细胞表达差异无统计学意义,但其MFI升高。FcεRI-KO小鼠与WT小鼠相比,过敏原激发后B细胞中TLR9^(+)MFI较低。结论B细胞中TLR9可能参与AR、AA的发生,检测B细胞中TLR9的表达可能成为诊断AR、AA的新方向。 展开更多
关键词 Toll样受体(TLR9) B淋巴细胞(B细胞) 过敏性鼻炎(AR) 过敏性哮喘(AA)
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淫羊藿苷调控BDNF/TrkB信号通路及突触可塑性对创伤后应激障碍大鼠恐惧记忆的改善作用 被引量：4
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作者 刘晓晨 金娜 +2 位作者 高源泽 史宝湘 单伟 《中国医科大学学报》 北大核心 2024年第1期27-33,共7页
目的探讨淫羊藿苷对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠恐惧记忆的影响及作用机制。方法选取雄性SD大鼠30只,应用单一连续应激(SPS)构建PTSD大鼠模型。将模型大鼠按随机数字表法分成SPS组、淫羊藿苷组及淫羊藿苷+K252a组,其中K252a为酪氨酸激酶受... 目的探讨淫羊藿苷对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠恐惧记忆的影响及作用机制。方法选取雄性SD大鼠30只,应用单一连续应激(SPS)构建PTSD大鼠模型。将模型大鼠按随机数字表法分成SPS组、淫羊藿苷组及淫羊藿苷+K252a组,其中K252a为酪氨酸激酶受体B(TrkB)抑制剂,每组10只;另取10只正常大鼠作为对照组。淫羊藿苷组及淫羊藿苷+K252a组大鼠均于SPS造模1 d后灌胃给药淫羊藿苷,剂量为20 mg/kg,1次/d,共2周。对照组、SPS组给予等剂量生理盐水。K252a为造模7 d后侧脑室注射单次给药。2周后,旷场试验、高架十字迷宫实验、条件性恐惧测试检测各组大鼠焦虑、抑郁及恐惧记忆障碍状况;分子对接验证淫羊藿苷与脑源性神经营养因子(BDNF)的结合活性。免疫组化检测大鼠杏仁核BDNF和TrkB的表达;Western blotting检测BDNF和TrkB蛋白的相对表达。免疫荧光检测大鼠杏仁核突触后密度蛋白95(PSD95)和突触素(SYN)的表达。结果淫羊藿苷与BDNF具有较好的结合活性。与对照组相比,SPS组和淫羊藿苷+K252a组大鼠进入中心区域次数和中心区域运动距离百分比明显降低,开臂进入(OE)和开臂时间(OT)明显降低,僵住时间和排便次数明显增加,BDNF、TrkB、PSD95和SYN蛋白表达明显降低(P<0.05);而与SPS组相比,淫羊藿苷组大鼠进入中心区域次数和中心区域运动距离百分比明显增加,OE和OT明显增加,僵住时间和排便次数明显减少,BDNF、TrkB、PSD95和SYN蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论淫羊藿苷可以有效缓解SPS诱导的大鼠恐惧记忆障碍,这种保护作用可能与激活BDNF/TrkB信号通路及上调突触相关蛋白SYN和PSD95有关。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 创伤后应激障碍 恐惧记忆 脑源性神经营养因子 突触可塑性
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志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak的表达纯化与多克隆抗体的制备及应用 被引量：2
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作者 贾雪娇 刘梦琦 +7 位作者 刘洋 刘长城 李小凤 胡屹硕 李香雨 李润林 李永刚 赵微 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期236-242,共7页
目的表达轮状病毒感染的乳鼠体内志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak(Hsp70),并制备Dnak多克隆抗体。方法以提取的志贺氏杆菌基因组为模板PCR扩增Dnak片段,与pET-24a(+)和PCDNA3.1分别连接构建原核表达质粒pET24a(+)-Dnak和真核表达质粒PCDNA3.1-Dn... 目的表达轮状病毒感染的乳鼠体内志贺氏杆菌分泌蛋白Dnak(Hsp70),并制备Dnak多克隆抗体。方法以提取的志贺氏杆菌基因组为模板PCR扩增Dnak片段,与pET-24a(+)和PCDNA3.1分别连接构建原核表达质粒pET24a(+)-Dnak和真核表达质粒PCDNA3.1-Dnak;pET24a(+)-Dnak原核表达质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,经镍柱纯化Dnak蛋白。以纯化后的重组蛋白为免疫原免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测效价,Western Blot法检测灵敏度和特异性。利用制备的多克隆抗体在GST Pull-down实验中检测Dnak与轮状病毒非结构蛋白Nsp2的相互作用。真核表达质粒PCDNA3.1-Dnak转染至HEK293T细胞,以制备的DnaK多克隆抗体为一抗,Western blot法检测Dnak在细胞中的表达。利用MEGA11及Genedoc软件分析此志贺氏杆菌与志贺菌属其他细菌Dnak氨基酸序列同源性。结果重组质粒pET24a(+)-Dnak与PCDNA3.1-Dnak经测序比对包含与此志贺氏杆菌(Shigella:PRJNA804371)序列一致的基因,证明质粒构建成功。诱导表达的重组Dnak蛋白主要以可溶性形式存在,相对分子质量约为75 kDa,浓度可达0.62 mg/mL;Dnak鼠多克隆抗体可与重组Dnak蛋白发生特异性反应,效价为1∶32000,至少可以在1∶6000稀释度下检测到Dnak蛋白。GST Pull-down实验可以检测到Dnak与轮状病毒非结构蛋白Nsp2发生相互作用。转染PCDNA3.1-Dnak重组质粒的HEK293T细胞可以表达Dnak蛋白。经MEGA11和Genedoc软件比对PRJNA804371株与宋内志贺菌(Shigella sonnei)、痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)、鲍氏志贺菌(Shigella boydii)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)Dnak氨基酸序列同源性较高。结论成功表达志贺氏杆菌Dnak蛋白,具有良好反应性与免疫原性;制备的鼠多克隆抗体效价及灵敏度较高可满足后续实验需要。 展开更多
关键词 志贺氏杆菌 DNAK 蛋白表达与纯化 多克隆抗体 轮状病毒
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