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Kex2酶在法夫驹形氏酵母中的重组表达、纯化及其稳定性研究
1
作者
窦培冲
戴舒春
+5 位作者
张莲莲
苏敬允
董国明
朱梦丹
钟远广
张明义
《食品与发酵工业》
2025年第19期26-32,共7页
该研究旨在构建蛋白内切酶Kex2表达菌株,并对其纯化过程及酶稳定性进行研究,开发适合规模化生产的整体工艺,进一步促进其工业化应用。选取酿酒酵母Kex2酶前体肽至丝氨酸苏氨酸区域进行基因合成并克隆于质粒pPICZαA中,电转化野生营养型...
该研究旨在构建蛋白内切酶Kex2表达菌株,并对其纯化过程及酶稳定性进行研究,开发适合规模化生产的整体工艺,进一步促进其工业化应用。选取酿酒酵母Kex2酶前体肽至丝氨酸苏氨酸区域进行基因合成并克隆于质粒pPICZαA中,电转化野生营养型菌株X33,通过抗生素(博来霉素)平板及菌落PCR筛选重组子,使用基础盐培养基进行了5 L罐发酵获得重组酶Kex2,通过发酵液预处理、离子交换层析获得了纯化Kex2酶,进一步研究了10%(体积分数)甘油保护、冻干粉2种形态下纯化Kex2酶的保存稳定性。菌落PCR结果显示,通过平板筛选成功获得重组菌,经过60 h甲醇诱导5 L发酵罐Kex2表达量达到2.53 g/L发酵上清液;上清液经过中空纤维柱超滤、浓缩换液后电导率明显降低,可直接用于离子交换柱上样,经一步纯化得到Kex2(比活力20.24 U/mg),相对于发酵上清液其综合收率为41.6%;保存稳定性结果显示,甘油保护及冻干粉2种形态的重组Kex2在-20℃和冷藏条件下均具有较好的稳定性,其中甘油保护的Kex2在-20℃和冷藏条件下3个月后,剩余酶活力分别为77.7%、82.9%,冻干粉在-20℃和冷藏条件下3个月后,剩余酶活力分别为86.2%、77.8%。该研究获得的Kex2表达菌株、Kex2纯化工艺及Kex2对解决该酶应用成本高等问题具有重要意义。
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关键词
Kex2
重组表达
法夫驹形氏酵母
纯化
比活力
稳定性
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职称材料
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
2
作者
张明义
赵帅
+4 位作者
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
《食品与发酵工业》
2025年第17期20-25,共6页
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取...
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取了3种对甜菊糖核心骨架贝壳杉烯有吸附能力的苯乙烯-二乙烯苯骨架的大孔树脂。考察了3种树脂富集莱鲍迪苷与分离莱鲍迪苷D的能力,选出了能够有效吸附莱鲍迪苷D并对莱鲍迪苷D具有良好分离能力的LX-T28树脂。最后,该研究以LX-T28树脂为填料采用连续柱色谱法实现了酶催化体系中莱鲍迪苷D的富集与分离,高收率低成本地获得了纯度>95%的莱鲍迪苷D,为后续酶法生产莱鲍迪苷D实现工业化解决了后处理难题。
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关键词
莱鲍迪苷D
酶法制备
富集与分离
连续柱色谱法
大孔树脂
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职称材料
题名
Kex2酶在法夫驹形氏酵母中的重组表达、纯化及其稳定性研究
1
作者
窦培冲
戴舒春
张莲莲
苏敬允
董国明
朱梦丹
钟远广
张明义
机构
铭
诚
惠众
(
江苏
)
药物
研究
有限公司
出处
《食品与发酵工业》
2025年第19期26-32,共7页
文摘
该研究旨在构建蛋白内切酶Kex2表达菌株,并对其纯化过程及酶稳定性进行研究,开发适合规模化生产的整体工艺,进一步促进其工业化应用。选取酿酒酵母Kex2酶前体肽至丝氨酸苏氨酸区域进行基因合成并克隆于质粒pPICZαA中,电转化野生营养型菌株X33,通过抗生素(博来霉素)平板及菌落PCR筛选重组子,使用基础盐培养基进行了5 L罐发酵获得重组酶Kex2,通过发酵液预处理、离子交换层析获得了纯化Kex2酶,进一步研究了10%(体积分数)甘油保护、冻干粉2种形态下纯化Kex2酶的保存稳定性。菌落PCR结果显示,通过平板筛选成功获得重组菌,经过60 h甲醇诱导5 L发酵罐Kex2表达量达到2.53 g/L发酵上清液;上清液经过中空纤维柱超滤、浓缩换液后电导率明显降低,可直接用于离子交换柱上样,经一步纯化得到Kex2(比活力20.24 U/mg),相对于发酵上清液其综合收率为41.6%;保存稳定性结果显示,甘油保护及冻干粉2种形态的重组Kex2在-20℃和冷藏条件下均具有较好的稳定性,其中甘油保护的Kex2在-20℃和冷藏条件下3个月后,剩余酶活力分别为77.7%、82.9%,冻干粉在-20℃和冷藏条件下3个月后,剩余酶活力分别为86.2%、77.8%。该研究获得的Kex2表达菌株、Kex2纯化工艺及Kex2对解决该酶应用成本高等问题具有重要意义。
关键词
Kex2
重组表达
法夫驹形氏酵母
纯化
比活力
稳定性
Keywords
Kex2
recombinant expression
Komagataella phaffii
purification
specific activity
stability
分类号
TQ925 [轻工技术与工程]
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职称材料
题名
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
2
作者
张明义
赵帅
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
机构
铭
诚
惠众
(
江苏
)
药物
研究
有限公司
出处
《食品与发酵工业》
2025年第17期20-25,共6页
文摘
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取了3种对甜菊糖核心骨架贝壳杉烯有吸附能力的苯乙烯-二乙烯苯骨架的大孔树脂。考察了3种树脂富集莱鲍迪苷与分离莱鲍迪苷D的能力,选出了能够有效吸附莱鲍迪苷D并对莱鲍迪苷D具有良好分离能力的LX-T28树脂。最后,该研究以LX-T28树脂为填料采用连续柱色谱法实现了酶催化体系中莱鲍迪苷D的富集与分离,高收率低成本地获得了纯度>95%的莱鲍迪苷D,为后续酶法生产莱鲍迪苷D实现工业化解决了后处理难题。
关键词
莱鲍迪苷D
酶法制备
富集与分离
连续柱色谱法
大孔树脂
Keywords
Rebaudioside D
enzymatic production
enrichment and separation
tandem column chromatography
macroporous resin
分类号
TS202.3 [轻工技术与工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Kex2酶在法夫驹形氏酵母中的重组表达、纯化及其稳定性研究
窦培冲
戴舒春
张莲莲
苏敬允
董国明
朱梦丹
钟远广
张明义
《食品与发酵工业》
2025
在线阅读
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职称材料
2
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
张明义
赵帅
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
《食品与发酵工业》
2025
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职称材料
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