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基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用
被引量：
16
1
作者
李凡
岳华
+3 位作者
邱莞思
张斌
黄建德
汤承
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期1092-1098,共7页
轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根据BRV和牦牛RVVP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系...
轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根据BRV和牦牛RVVP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系,配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒,建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法。结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV,不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原;检测下限为96.6copies·μL-1,重复性好;对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明,本方法对BRV的检出率是33.33%,对牦牛RV的检出率为73.33%,与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100%;对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,既可用于BRV检测,又可用于牦牛RV的检测;从核酸提取到报告检测结果仅需1h,操作方便,可现场使用,为BRV的现场快速诊断提供有力的工具。
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关键词
牛
牦牛
轮状病毒
VP6基因
恒温隔绝PCR
现场检测
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职称材料
牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立
被引量：
10
2
作者
张颖慧
岳华
+1 位作者
汤承
黄建德
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期601-604,640,共5页
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副...
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出。该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性。对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点。对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24%(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍。本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法。
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关键词
牛传染性鼻气管炎病毒
恒温隔绝式荧光PCR方法
现地检测
精液
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职称材料
题名
基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用
被引量：
16
1
作者
李凡
岳华
邱莞思
张斌
黄建德
汤承
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队
金瑞鸿
捷
(
厦门
)
生物科技
有限公司
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期1092-1098,共7页
基金
十三五国家重点研发计划(2016YFD0500907)
国家民委科研项目(14XNZ025)
文摘
轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根据BRV和牦牛RVVP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系,配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒,建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法。结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV,不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原;检测下限为96.6copies·μL-1,重复性好;对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明,本方法对BRV的检出率是33.33%,对牦牛RV的检出率为73.33%,与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100%;对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,既可用于BRV检测,又可用于牦牛RV的检测;从核酸提取到报告检测结果仅需1h,操作方便,可现场使用,为BRV的现场快速诊断提供有力的工具。
关键词
牛
牦牛
轮状病毒
VP6基因
恒温隔绝PCR
现场检测
Keywords
calf
yak
rotavirus
VP6 gene
iiPCR
on-site detection
分类号
S852.653 [农业科学—基础兽医学]
S852.659.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立
被引量：
10
2
作者
张颖慧
岳华
汤承
黄建德
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室
金瑞鸿
捷
(
厦门
)
生物科技
有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期601-604,640,共5页
基金
四川省应用基础项目(2017JY0066)
国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队项目(13TD0057)
文摘
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出。该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性。对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点。对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24%(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍。本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法。
关键词
牛传染性鼻气管炎病毒
恒温隔绝式荧光PCR方法
现地检测
精液
Keywords
infectious bovine rhinotracheitis virus
insulated isothermal PCR
detection on-site
semen
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用
李凡
岳华
邱莞思
张斌
黄建德
汤承
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
16
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立
张颖慧
岳华
汤承
黄建德
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
10
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职称材料
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