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副结核分枝杆菌85A、85B蛋白生物信息学特征及其原核表达: 1; 作者平宇明张宏莉 +7 位作者王佳李明鑫李超赵萍萍王娅荣张立华李劼常华《福建农业学报》北大核心 2025年第5期467-475,共9页; 【目的】探究副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)85A和85B蛋白的生物信息学结构特征,通过原核表达技术获取两种蛋白,并评估其反应原性,从而为后续该菌ELISA检测试剂盒的研发及疫苗研究奠定基础。【方法】... 展开更多; 关键词副结核分枝杆菌原核表达 85A 85B; 在线阅读下载PDF 职称材料

副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1: 2; 作者平宇明张宏莉 +8 位作者班亚星刘建奇任希恩邬彩丽刘东霞徐丽媛杨雪娇常华李劼《动物医学进展》北大核心 2024年第7期1-6,共6页; 为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏... 展开更多; 关键词副结核分支杆菌实时荧光定量PCR 检测方法感染调查; 在线阅读下载PDF 职称材料

三株牛支原体的致病性比较被引量：4: 3; 作者刘重阳黄海碧 +7 位作者范文霞乌吉斯古楞张彦婷陈学飞纪燕刘玉梅宋庆庆关平原《中国动物检疫》 CAS 2021年第2期114-119,共6页; 为检测从内蒙古发病牛场分离到的3株牛支原体(HS2019、HSZ2019、HSS2019)的致病性,对其进行本动物回归试验,通过观察攻毒后的临床症状、病理变化,以及应用实时荧光定量PCR确定组织器官中支原体载量,分析3株支原体的毒力。结果显示,3株... 展开更多; 关键词牛支原体动物回归试验荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

犬腺病毒Ⅰ型和Ⅱ型Taq Man双重荧光定量PCR方法的建立被引量：2: 4; 作者巨敏莹王艳杰 +5 位作者刘东霞张斌韩宇乌吉斯古楞宋庆庆关平原《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期83-88,共6页; 为鉴别检测犬腺病毒(CAV)Ⅰ型和Ⅱ型,根据GenBank中CAV-I和CAV-II型参考基因序列,设计合成1对通用引物和2条鉴别探针,建立了可鉴别检测CAV-Ⅰ型和CAV-Ⅱ型的双重荧光定量PCR检测方法。同时,对该方法进行了优化,并对该方法的特异性、敏... 展开更多; 关键词犬腺病毒Ⅰ型犬腺病毒Ⅱ型 TaqMan荧光定量PCR 检测方法; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 5; 作者张智刘泽 +5 位作者乌吉斯古楞刘重阳权璞宏任旭荣宋庆庆关平原《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期94-99,共6页; 为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质... 展开更多; 关键词多杀性巴氏杆菌原核表达 PlpE基因多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

一株肉牛A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定被引量：8: 6; 作者张贵刚徐丽媛 +4 位作者黄海碧韩四娥李化生关平原刘国英《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期86-90,共5页; 河北省某肉牛场肉牛发生呼吸困难、咳血及颈胸部气肿等症状的疾病。为快速确诊发病牛的致病原因,及时防控和治疗,无菌采集发病牛的鼻拭子进行病原菌的分离培养、形态学鉴定和毒力测定,并进行PCR检测和测序鉴定。结果显示,病原菌在鲜血... 展开更多; 关键词 A型多杀性巴氏杆菌荚膜血清型毒力检测分离鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名副结核分枝杆菌85A、85B蛋白生物信息学特征及其原核表达: 1; 作者平宇明张宏莉王佳李明鑫李超赵萍萍王娅荣张立华李劼常华; 机构云南农业大学动物医学院金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室甘肃省畜牧兽医研究所宜宾市翠屏区农业农村局; 出处《福建农业学报》北大核心 2025年第5期467-475,共9页; 基金云南省重大科技专项计划项目(202302AA310020) 呼和浩特市科技创新领域人才项目(2022RC-联合体-1) 云南省重点研发计划——建设面向南亚东南亚科技创新中心专项(202403AP140033)。; 文摘【目的】探究副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)85A和85B蛋白的生物信息学结构特征,通过原核表达技术获取两种蛋白,并评估其反应原性,从而为后续该菌ELISA检测试剂盒的研发及疫苗研究奠定基础。【方法】运用生物信息学在线分析平台对85A和85B蛋白的氨基酸序列展开分析,去除跨膜区和信号肽结构,进行密码子优化,成功构建pET-30a-MAP-85A和pET-30a-MAP-85B重组质粒。以BL21(DE3)作为表达菌株进行原核表达,优化诱导表达的温度、IPTG浓度及诱导时间;对诱导表达蛋白进行可溶性分析,利用镍柱进行纯化;用Western blotting技术评估重组蛋白的免疫反应性。【结果】成功获得重组85A蛋白,其分子量约为31.3 kDa,在37℃、IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1)诱导4 h,可达到最佳表达效果;重组85B蛋白分子量为31.8 kDa,在37℃、IPTG终浓度0.8 mmol·L^(-1)诱导6 h表达量最好。两种重组蛋白均以包涵体形式表达,经镍离子柱纯化后获得高纯度目标蛋白。以MAP阳性牛血清为一抗,对纯化后蛋白进行Western blotting检测,结果显示特异性条带,充分证实85A和85B重组蛋白具备良好的免疫反应性。【结论】研究成功实现副结核分枝杆菌重组85A和85B蛋白的高效表达,且有较好的免疫反应性,为该菌免疫学检测技术的开发提供重要的理论基础。; 关键词副结核分枝杆菌原核表达 85A 85B; Keywords Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis prokaryotic expression 85A 85B; 分类号 S851.2 [农业科学—预防兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1: 2; 作者平宇明张宏莉班亚星刘建奇任希恩邬彩丽刘东霞徐丽媛杨雪娇常华李劼; 机构云南农业大学动物医学院金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室河南省卫辉市农业农村局; 出处《动物医学进展》北大核心 2024年第7期1-6,共6页; 基金呼和浩特市科技创新领域人才项目(2022RC-联合体-1) 云南省基础研究面上项目(202001AT070119) +3 种基金云南省石林县奶山羊产业科技特派团项目(202104BI090017)。; 文摘为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。; 关键词副结核分支杆菌实时荧光定量PCR 检测方法感染调查; Keywords Mycobactium paratuberculosis(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis) real-time fluorescence quantitative PCR detection method infection investigation; 分类号 S852.619 [农业科学—基础兽医学] S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名三株牛支原体的致病性比较被引量：4: 3; 作者刘重阳黄海碧范文霞乌吉斯古楞张彦婷陈学飞纪燕刘玉梅宋庆庆关平原; 机构内蒙古农业大学兽医学院金宇保灵生物药品有限公司; 出处《中国动物检疫》 CAS 2021年第2期114-119,共6页; 文摘为检测从内蒙古发病牛场分离到的3株牛支原体(HS2019、HSZ2019、HSS2019)的致病性,对其进行本动物回归试验,通过观察攻毒后的临床症状、病理变化,以及应用实时荧光定量PCR确定组织器官中支原体载量,分析3株支原体的毒力。结果显示,3株牛支原体回归牛体后均使试验牛出现体温升高、咳嗽、呼吸困难等临床症状,解剖可观察到试验牛肺部损伤以及肺脏与胸腔粘连的病理变化,其中HS2019株较其他两株引起的症状与病变更为明显,组织脏器中的载菌量最高。结果表明,这3株支原体均有致病性,其中HS2019株致病性最强,可作为今后疫苗研制的预备菌株。本研究既为国内疫苗的研制提供了菌株资源,也为今后牛支原体的免疫攻毒试验提供了评价标准。; 关键词牛支原体动物回归试验荧光定量PCR; Keywords Mycoplasma bovis animal regression test quantitative real-time PCR; 分类号 S852.62 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名犬腺病毒Ⅰ型和Ⅱ型Taq Man双重荧光定量PCR方法的建立被引量：2: 4; 作者巨敏莹王艳杰刘东霞张斌韩宇乌吉斯古楞宋庆庆关平原; 机构内蒙古农业大学兽医学院金宇保灵生物药品有限公司; 出处《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期83-88,共6页; 文摘为鉴别检测犬腺病毒(CAV)Ⅰ型和Ⅱ型,根据GenBank中CAV-I和CAV-II型参考基因序列,设计合成1对通用引物和2条鉴别探针,建立了可鉴别检测CAV-Ⅰ型和CAV-Ⅱ型的双重荧光定量PCR检测方法。同时,对该方法进行了优化,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了试验,并与普通PCR检测方法进行样品检测符合率分析。特异性试验结果显示;本研究建立方法对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬冠状病毒均未产生扩增曲线。敏感性试验结果显示,建立方法对CAV-Ⅰ的检测敏感度为100copies/μL,对CAV-Ⅱ的检测敏感度为10copies/μL。重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于5%。临床样品检测对比结果显示,建立方法与普通PCR方法的符合率为95.12%。结果表明,本研究建立的TaqMan双重荧光定量PCR方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好等优点,可用于临床鉴别检测CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ型。本研究为CAV-I和CAV-II型感染的检测、鉴别以及流行病学调查提供了便捷快速的方法。; 关键词犬腺病毒Ⅰ型犬腺病毒Ⅱ型 TaqMan荧光定量PCR 检测方法; Keywords CAV-I CAV-Ⅱ TaqMan real-time PCR detection method; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 5; 作者张智刘泽乌吉斯古楞刘重阳权璞宏任旭荣宋庆庆关平原; 机构内蒙古农业大学兽医学院金宇保灵生物药品有限公司; 出处《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期94-99,共6页; 文摘为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析。结果显示,扩增的PlpE基因大小为1050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa。间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好。PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础。; 关键词多杀性巴氏杆菌原核表达 PlpE基因多克隆抗体; Keywords Pasteurella multocida prokaryotic expression PlpE gene polyclonal antibody; 分类号 S855.1 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一株肉牛A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定被引量：8: 6; 作者张贵刚徐丽媛黄海碧韩四娥李化生关平原刘国英; 机构金宇保灵生物药品有限公司兽用疫苗国家工程实验室; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期86-90,共5页; 基金内蒙古自治区科技厅《反刍动物优质疫苗研制与技术集成》; 文摘河北省某肉牛场肉牛发生呼吸困难、咳血及颈胸部气肿等症状的疾病。为快速确诊发病牛的致病原因,及时防控和治疗,无菌采集发病牛的鼻拭子进行病原菌的分离培养、形态学鉴定和毒力测定,并进行PCR检测和测序鉴定。结果显示,病原菌在鲜血琼脂培养基上呈圆形的水滴样菌落,革兰氏染色为球形或短杆状的阴性菌。多杀性巴氏杆菌种属特异性引物PCR扩增为阳性,荚膜血清分型鉴定为A型,经16S rDNA测序鉴定分离的病原菌为多杀性巴氏杆菌,小鼠的最小致死量为3个菌/mL。本研究为该牛场发病牛的防治提供了依据,也为研制高效疫苗提供了优势菌种。; 关键词 A型多杀性巴氏杆菌荚膜血清型毒力检测分离鉴定; Keywords Pasteurella multocida serotype virulence identification; 分类号 S852.612 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	副结核分枝杆菌85A、85B蛋白生物信息学特征及其原核表达	平宇明张宏莉王佳李明鑫李超赵萍萍王娅荣张立华李劼常华	《福建农业学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用	平宇明张宏莉班亚星刘建奇任希恩邬彩丽刘东霞徐丽媛杨雪娇常华李劼	《动物医学进展》北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	三株牛支原体的致病性比较	刘重阳黄海碧范文霞乌吉斯古楞张彦婷陈学飞纪燕刘玉梅宋庆庆关平原	《中国动物检疫》 CAS	2021	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	犬腺病毒Ⅰ型和Ⅱ型Taq Man双重荧光定量PCR方法的建立	巨敏莹王艳杰刘东霞张斌韩宇乌吉斯古楞宋庆庆关平原	《中国动物检疫》 CAS	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备	张智刘泽乌吉斯古楞刘重阳权璞宏任旭荣宋庆庆关平原	《中国动物检疫》 CAS	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	一株肉牛A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定	张贵刚徐丽媛黄海碧韩四娥李化生关平原刘国英	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2019	8	在线阅读下载PDF 职称材料