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副结核分枝杆菌85A、85B蛋白生物信息学特征及其原核表达
1
作者 平宇明 张宏莉 +7 位作者 王佳 李明鑫 李超 赵萍萍 王娅荣 张立华 李劼 常华 《福建农业学报》 北大核心 2025年第5期467-475,共9页
【目的】探究副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)85A和85B蛋白的生物信息学结构特征,通过原核表达技术获取两种蛋白,并评估其反应原性,从而为后续该菌ELISA检测试剂盒的研发及疫苗研究奠定基础。【方法】... 【目的】探究副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)85A和85B蛋白的生物信息学结构特征,通过原核表达技术获取两种蛋白,并评估其反应原性,从而为后续该菌ELISA检测试剂盒的研发及疫苗研究奠定基础。【方法】运用生物信息学在线分析平台对85A和85B蛋白的氨基酸序列展开分析,去除跨膜区和信号肽结构,进行密码子优化,成功构建pET-30a-MAP-85A和pET-30a-MAP-85B重组质粒。以BL21(DE3)作为表达菌株进行原核表达,优化诱导表达的温度、IPTG浓度及诱导时间;对诱导表达蛋白进行可溶性分析,利用镍柱进行纯化;用Western blotting技术评估重组蛋白的免疫反应性。【结果】成功获得重组85A蛋白,其分子量约为31.3 kDa,在37℃、IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1)诱导4 h,可达到最佳表达效果;重组85B蛋白分子量为31.8 kDa,在37℃、IPTG终浓度0.8 mmol·L^(-1)诱导6 h表达量最好。两种重组蛋白均以包涵体形式表达,经镍离子柱纯化后获得高纯度目标蛋白。以MAP阳性牛血清为一抗,对纯化后蛋白进行Western blotting检测,结果显示特异性条带,充分证实85A和85B重组蛋白具备良好的免疫反应性。【结论】研究成功实现副结核分枝杆菌重组85A和85B蛋白的高效表达,且有较好的免疫反应性,为该菌免疫学检测技术的开发提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 原核表达 85A 85B
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兽用生物制品的质量管理体系建设与实践策略
2
作者 谯小燕 郭冬梅 《今日畜牧兽医》 2025年第8期70-72,共3页
兽用生物制品的质量直接关系到动物疫病防控和公共卫生安全。当前,该行业面临生产标准滞后、监管体系存在断层以及与国际技术存在代差等核心挑战。基于此,本文通过实证研究,系统地构建了一套覆盖原材料筛选、工艺控制和终端评价的全流... 兽用生物制品的质量直接关系到动物疫病防控和公共卫生安全。当前,该行业面临生产标准滞后、监管体系存在断层以及与国际技术存在代差等核心挑战。基于此,本文通过实证研究,系统地构建了一套覆盖原材料筛选、工艺控制和终端评价的全流程质量管理体系。同时,创新性地设计了三级追溯机制和生物安全动态监控模型,并通过质量文化培育实践,揭示了组织架构优化和激励机制对质量提升的协同效应。此外,研究提出了技术标准互认框架和产学研协同创新模式,旨在推动行业从被动合规向主动预防转型。这不仅为完善兽药质量防控理论体系提供了创新性解决方案,还填补了该领域系统性研究的空白。 展开更多
关键词 兽用生物制品 质量管理体系 风险防控 标准化生产 行业协同
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荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性分析与免疫效果评价
3
作者 高洁 李晓成 +3 位作者 穆杨 张慧 魏荣 李劼 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2168-2175,共8页
旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope... 旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察OMVs的形态及大小,采用SDS-PAGE、LC-MS/MS分析OMVs主要蛋白,以蛋白定量试剂测定其蛋白浓度以及鲎试剂法测定其内毒素含量,然后以新西兰白兔为动物模型,开展免疫保护效果评价。结果显示,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs呈完整规则的球形结构,平均粒径108.3 nm,其中的蛋白质主要集中在33、40、53 ku处,内毒素含量为3.31×10^(6) EU·mL^(-1),用制备的OMVs以50μg·只^(-1)免疫新西兰白兔2次后,免疫兔血清抗体效价可达1∶405 600,外周血淋巴细胞IFN-γ和IL-4转录水平明显升高,对荚膜B型多杀性巴氏杆菌攻击的保护效率为75%。综上表明,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的外膜囊泡具有良好的免疫保护效果,有作为候选疫苗的潜质,本研究为外膜囊泡疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 外膜囊泡 生物学特性 疫苗
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副结核分支杆菌MAP0862-2191c串联蛋白的原核表达及反应原性检测
4
作者 郝彦儒 郭号 +3 位作者 谢梦圆 陈坚 杨文洁 徐晓静 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期28-34,共7页
副结核分支杆菌(MAP)由于其胞内寄生的特性,难以在早期发现,待发现后往往已经不再具备治疗价值,因此寻找并制备出能同时在早晚期都有显著标识作用的抗原蛋白,有利于更好地诊断牛副结核病。通过生物信息学软件对MAP的MAP0862和MAP2191c... 副结核分支杆菌(MAP)由于其胞内寄生的特性,难以在早期发现,待发现后往往已经不再具备治疗价值,因此寻找并制备出能同时在早晚期都有显著标识作用的抗原蛋白,有利于更好地诊断牛副结核病。通过生物信息学软件对MAP的MAP0862和MAP2191c两种蛋白进行一级、二级及三级结构上的理化性质、抗原性分析及相对位置建模预测,判断串联蛋白重组表达的可行性;使用柔性肽短链序列(G4S)2连接两段序列构建了重组表达载体pET30a-MAP6291c,将其导入至BL21(DE3)原核表达载体中进行诱导表达,并进行Western blot分析。结果显示,预测MAP0862-2191c串联蛋白为一个有多个抗原表位的亲水性的蛋白,两种蛋白在三级结构上无相互影响,因此可以进行原核表达;构建合成的融合基因双酶切结果与预期结果相符;经SDS-PCGE凝胶电泳检测成功表达串联蛋白,大小约68.5 ku,与预期蛋白大小相符;分别选择鼠源抗His抗体及MAP阳性牛血清作为一抗进行Western blot验证,均显示MAP0862-2191c重组蛋白有单一的特异性条带,位置及大小与预期结果一致,证明了该串联蛋白制备的正确性,并且具有良好的反应原性,能够作为牛副结核病的诊断蛋白,为后续建立牛副结核病的诊断方法奠定了良好基础。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 MAP0862 MAP2191c 蛋白预测 串联表达
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四种布鲁氏菌病疫苗临床效果及免疫方式比较评估 被引量：2
5
作者 刘国民 高日明 +2 位作者 刘艳琴 马琛 胡日查毕力格 《中国动物保健》 2025年第3期244-245,共2页
为评估不同羊布鲁氏菌病疫苗的安全性和效果性,选取新疆规模羊场作为实验动物,A组免疫M5疫苗,B组免疫ReV.1疫苗,C组免疫M5-90△26,D组免疫S2疫苗,分别于免疫后7、21、30、60、90、120、150、180、210、240、270 d采集血液并分类血清,用R... 为评估不同羊布鲁氏菌病疫苗的安全性和效果性,选取新疆规模羊场作为实验动物,A组免疫M5疫苗,B组免疫ReV.1疫苗,C组免疫M5-90△26,D组免疫S2疫苗,分别于免疫后7、21、30、60、90、120、150、180、210、240、270 d采集血液并分类血清,用RBPT和SAT检测抗体。同时,在接种疫苗后12 h内,观察和记录免疫羊的健康状况。结果显示:4种疫苗均安全有效且都能产生较好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 疫苗 临床效果 免疫方式
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呼和浩特两座牧场BVD-IBR疫苗免疫效果评估
6
作者 赵晓军 武国栋 +3 位作者 付婧 张俊杰 秦飞 袁莉刚 《中国奶牛》 2025年第2期62-64,共3页
为评估BVD-IBR疫苗的免疫应用效果,选择呼和浩特2座牧场,在成母牛转干奶当天首免、转围产当天加强免疫及犊牛90日龄首免、120日龄加强免疫BVD-IBR二联灭活疫苗,在免疫前后采集样品监测中和抗体水平。结果显示,成母牛BVD疫苗加强免疫后50... 为评估BVD-IBR疫苗的免疫应用效果,选择呼和浩特2座牧场,在成母牛转干奶当天首免、转围产当天加强免疫及犊牛90日龄首免、120日龄加强免疫BVD-IBR二联灭活疫苗,在免疫前后采集样品监测中和抗体水平。结果显示,成母牛BVD疫苗加强免疫后50d中和抗体保护率≥95%,犊牛饲喂初乳后35d中和抗体保护率达100%;成母牛IBR疫苗加强免疫后50d中和抗体保护率及犊牛饲喂初乳后35d中和抗体保护率均达100%;A牧场在免疫后腹泻发病率呈下降趋势,12月份较5月份下降2.4个百分点。 展开更多
关键词 BVD IBR 免疫 效果评估
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1种牛轮状病毒Taq-Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：1
7
作者 王秀明 陈君彦 +1 位作者 础鲁 刘艳霞 《现代畜牧兽医》 2025年第3期11-15,共5页
试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方... 试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法。利用建立的检测方法检测标准品,绘制标准曲线,检测方法的特异性、灵敏性和稳定性,并对临床样品及疫苗半成品进行检验。结果显示,建立的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法的最低检测限为10 copies/μL,组内和组间重复变异系数(CV)均小于3.50%。检测临床样品和疫苗半成品,疫苗半成品均检测阳性,临床样品检测阳性率69%。研究表明,BRV Taq-Man荧光定量RTPCR检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,对BRV的诊断检测及疫苗生产具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) Taq-Man探针 荧光定量RT-PCR VP7基因
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3种羊布鲁氏菌病新型疫苗免疫效果评估比较 被引量：1
8
作者 钏有科 李威 +2 位作者 刘国民 南金龙 高日明 《中国动物保健》 2025年第4期171-172,共2页
为评估布鲁氏菌病3种新型疫苗的免疫效果,本试验选取新疆和田地区3~6月龄羔羊作为实验羊群,将150只试验羊随机分为3组,每组50只,A组采用点眼免疫,B、C组采取皮下注射的免疫方式,另外选取和田地区某养殖户同一时间接种M5株疫苗50只羊作... 为评估布鲁氏菌病3种新型疫苗的免疫效果,本试验选取新疆和田地区3~6月龄羔羊作为实验羊群,将150只试验羊随机分为3组,每组50只,A组采用点眼免疫,B、C组采取皮下注射的免疫方式,另外选取和田地区某养殖户同一时间接种M5株疫苗50只羊作为对照组即D组;在接种后48 h内观察并记录免疫羊的健康状况,采集7次血清样品开展免疫抗体检测,统计转阳率指标。通过得出的结果可判断,3种新型疫苗可安全地用于羊的布病免疫,并在2周内能产生较好的转阳率。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 新型疫苗 免疫效果
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A型塞内卡病毒研究进展
9
作者 侯丽娜 齐志涛 +8 位作者 吉格木德 陈九连 刘玉梅 李晓艳 俎红丽 李超 刘东霞 王子涵 陈坚 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期113-119,共7页
A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)作为一种新的猪水泡病病原体,具有较强的进化和传播能力,感染后可引起类似于口蹄疫的临床症状。SVA给养猪业带来重大的经济损失。近年来在巴西、美国和中国由SVA感染所致的疫情逐年增加。中国目前尚无... A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)作为一种新的猪水泡病病原体,具有较强的进化和传播能力,感染后可引起类似于口蹄疫的临床症状。SVA给养猪业带来重大的经济损失。近年来在巴西、美国和中国由SVA感染所致的疫情逐年增加。中国目前尚无可用的标准诊断方法和商业疫苗。因此,目前亟需提高对SVA的关注并加快相关研究,以防止该病毒在国内广泛扩散与传播。本文对目前有关SVA流行病学、诊断方法和疫苗研究的进展进行了详细叙述,为控制SVA的传播和采取有效预防措施提供参考。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 流行病学 诊断 疫苗
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牛昏睡嗜血杆菌的分离鉴定及其应用研究
10
作者 刘玉梅 张彦婷 +11 位作者 赵苏苏 赵利平 刘东霞 辛颖 方建国 杨晓婷 莫绍江 陈学飞 张鸣华 范文霞 赵丽霞 关平原 《中国兽药杂志》 2025年第2期1-7,共7页
为明确国内流行牛昏睡嗜血杆菌病病原特性,将临床采集牛昏睡嗜血杆菌病诊断阳性病料划线接种于脑心浸液酵母浸提膏血琼脂固体培养基,经多代次最适固液培养基纯化分离培养,获得稳定传代的目标菌株,经8~12 h液体培养基培养,其菌数可达3... 为明确国内流行牛昏睡嗜血杆菌病病原特性,将临床采集牛昏睡嗜血杆菌病诊断阳性病料划线接种于脑心浸液酵母浸提膏血琼脂固体培养基,经多代次最适固液培养基纯化分离培养,获得稳定传代的目标菌株,经8~12 h液体培养基培养,其菌数可达3×10^(9) CFU/mL,对小鼠的最小致死剂量为4×10^(8) CFU,致病性较强。将培养菌液制备成灭活疫苗免疫小鼠后,能够针对流行的昏睡嗜血杆菌致病菌株产生80%以上免疫保护效果,且对小鼠安全性良好。该菌株的成功分离对牛昏睡嗜血杆菌病疫苗的研制具有促进作用。 展开更多
关键词 昏睡嗜血杆菌 分离 培养 PCR鉴定 致病力
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牛布鲁氏菌A19株和S19株鉴别方法研究
11
作者 白白音宝力高 赵键龙 +2 位作者 吴梅花 狄栋栋 赵丹彤 《现代畜牧科技》 2025年第5期15-17,共3页
布鲁氏菌病(简称布病)是严重威胁人类健康的人畜共患病之一,使用疫苗和提高诊断准确性是布病防控最有效的手段。目前,国际最常见的牛种布鲁氏菌病活疫苗是布鲁氏菌病活疫苗(S19株),我国最常用的则是布鲁氏菌病活疫苗(A19株)。为找到快... 布鲁氏菌病(简称布病)是严重威胁人类健康的人畜共患病之一,使用疫苗和提高诊断准确性是布病防控最有效的手段。目前,国际最常见的牛种布鲁氏菌病活疫苗是布鲁氏菌病活疫苗(S19株),我国最常用的则是布鲁氏菌病活疫苗(A19株)。为找到快速、准确区分2种疫苗的方法,该研究通过细菌培养和PCR鉴定2种试验进行比较。结果发现,2种菌株可以在通过赤藓醇利用方面进行区分。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 活疫苗 赤藓醇
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猪瘟E2亚单位联苗的免疫持续期及效力研究
12
作者 武春芳 禹佳琪 +2 位作者 张建华 王秀斌 狄栋栋 《中国兽药杂志》 2025年第2期8-12,共5页
将猪瘟、猪伪狂犬病基因工程二联灭活疫苗(E2+gB+gD,CHO细胞源)免疫断奶仔猪,于一免后第7日、14日、21日,二免后第7日、14日、21日、42日、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、9个月、11个月、13个月采血,进行猪瘟ELISA抗体效... 将猪瘟、猪伪狂犬病基因工程二联灭活疫苗(E2+gB+gD,CHO细胞源)免疫断奶仔猪,于一免后第7日、14日、21日,二免后第7日、14日、21日、42日、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、9个月、11个月、13个月采血,进行猪瘟ELISA抗体效价检测,并在二免后第13个月进行猪瘟攻毒保护试验。结果显示:免疫组免疫后第14日至2个月,猪瘟中和抗体水平处于上升期,在免疫第13个月抗体水平仍维持在较高水平,阻断率80%以上;二免后第13个月的疫苗免疫组猪瘟攻毒可达到5/5头保护,保护率100%,未免疫攻毒对照组5/5头发病且死亡。研究表明,猪瘟、猪伪狂犬病基因工程二联灭活疫苗(E2+gB+gD,CHO细胞源)猪瘟效力免疫持续期至少可以达到13个月,能够至少抵抗13个月猪瘟病毒的攻击。研究结果可为制定猪瘟E2亚单位联苗免疫程序提供依据。 展开更多
关键词 猪瘟亚单位联苗 免疫持续期 效力
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布鲁氏菌病疫苗的免疫抗体消长规律
13
作者 刘艳琴 马宏 +6 位作者 乌日娜 王春 贺佳唯 郭雅娟 梁莉 皇甫江 刘国民 《中国畜牧业》 2025年第8期46-47,共2页
布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病,接种布鲁氏菌病疫苗成为控制和预防该病的主要措施。布鲁氏菌病威胁着公共卫生安全。动物一旦感染布鲁氏菌,往往会导致关节肿大变形,母畜流产、公畜生殖系统受到侵害。病初母畜会出现流... 布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病,接种布鲁氏菌病疫苗成为控制和预防该病的主要措施。布鲁氏菌病威胁着公共卫生安全。动物一旦感染布鲁氏菌,往往会导致关节肿大变形,母畜流产、公畜生殖系统受到侵害。病初母畜会出现流产,多数母畜会流产一次,流产两次的不多见,流产高峰期过后畜群会停止流产,常出现弱胎或死胎。布鲁氏菌主要通过患病动物的流产物、排泄物及分泌物传播。 展开更多
关键词 疫苗 免疫抗体 人畜共患传染病
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一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分离鉴定与全基因序列分析 被引量：1
14
作者 吕香玉 温树波 +6 位作者 赵丽霞 林浩 韩健健 杨芳 郭帅 翟景波 刘锴 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期210-215,共6页
探究内蒙古自治区通辽市牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染毒株主要基因型,为BVDV流行病学及防控提供参考依据。试验前期在内蒙古通辽市某牛场采集腹泻犊牛粪便样品经PCR检测,将BVDV阳性的粪便样品处理后接种到牛肾细胞(MDBK)中进行分离,通过R... 探究内蒙古自治区通辽市牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染毒株主要基因型,为BVDV流行病学及防控提供参考依据。试验前期在内蒙古通辽市某牛场采集腹泻犊牛粪便样品经PCR检测,将BVDV阳性的粪便样品处理后接种到牛肾细胞(MDBK)中进行分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光染色对分离株进行鉴定,并对其基因组全长进行测序,根据5′UTR、N pro和E2基因序列进行遗传进化分析和基因分型鉴定。结果表明,试验成功分离到一株BVDV毒株,将其命名为NM-21,接种NM-21的MDBK未产生细胞病变,说明该毒株为非细胞病变型(NCP),RT-PCR、间接免疫荧光染色鉴定均为阳性,病毒滴度为10-3 TCID 50/mL。基于基因组全长序列、5′UTR、N pro和E2基因序列的同源性和遗传进化分析,分离株NM-21与中国内蒙古自治区毒株NM2103(GenBank登录号ON337882.1)核苷酸同源性最高,为BVDV-1c亚型。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 BVDV-1c亚型 分离 鉴定 遗传进化分析
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副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
15
作者 平宇明 张宏莉 +8 位作者 班亚星 刘建奇 任希恩 邬彩丽 刘东霞 徐丽媛 杨雪娇 常华 李劼 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期1-6,共6页
为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏... 为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 实时荧光定量PCR 检测方法 感染调查
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猪瘟基因工程亚单位疫苗(CHO-133D)免疫攻毒后带毒、排毒评价研究
16
作者 陈坚 贾宝琴 +14 位作者 高洁 赵丽霞 车影 程水生 宋志刚 杜宇荣 李晓艳 岳继恒 狄栋栋 张建华 吴素芳 张强 高日明 闫聪 才学鹏 《中国兽药杂志》 2024年第12期1-8,共8页
猪瘟基因工程亚单位疫苗(CHO-133D)为中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)表达的E2蛋白加佐剂乳化制成。为评价其免疫攻毒保护效果,同时重点监测攻毒后的带毒、排毒及水平传播情况,将制备的1批猪瘟基因工程亚单位疫苗(CH... 猪瘟基因工程亚单位疫苗(CHO-133D)为中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)表达的E2蛋白加佐剂乳化制成。为评价其免疫攻毒保护效果,同时重点监测攻毒后的带毒、排毒及水平传播情况,将制备的1批猪瘟基因工程亚单位疫苗(CHO-133D)两次免疫接种4~6周龄仔猪,二免后第21天连同对照猪进行猪瘟石门系强毒攻击,另设同居组;各组实验猪于攻毒后第0、2、4、6、8、10、12、14、16天,采集口、鼻、肛拭子及全血进行RT-qPCR检测猪瘟病毒核酸,并于攻毒后第16天剖检所有试验猪,采集各组织器官进行免疫组化检测及组织病毒载量检测。攻毒观察结果表明,免疫组5/5保护,对照组5/5发病并死亡。RT-qPCR结果表明,对照组猪攻毒后口、鼻、肛拭子,及全血均持续检测到明显排毒,各脏器均检出猪瘟病毒;免疫组攻毒后口、鼻、肛拭子均未检测到猪瘟病毒,且攻毒12 d之后全血中猪瘟病毒核酸全部转为阴性,免疫组部分猪扁桃体和淋巴结中检出较低的病毒核酸拷贝数;同居组猪,口、鼻、肛拭子及全血、各组织器官中均未检测到猪瘟病毒。免疫组化结果表明,对照组猪各脏器均为阳性,免疫组和同居组猪各脏器均为阴性。猪瘟基因工程亚单位疫苗(CHO-133D)对猪只提供良好的免疫保护,猪瘟石门系强毒攻击后免疫猪健活不排毒,有效阻断病毒的水平传播,可作为今后临床中猪瘟疫病传播防控的参考疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因工程亚单位疫苗 带毒 排毒 水平传播
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猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法的建立和应用 被引量：4
17
作者 汪志恒 王景成 +1 位作者 佘志成 王凯 《现代畜牧科技》 2024年第1期6-9,共4页
目的:建立一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法。方法:选择云南省大理地区患有猪支原体肺炎疾病的60只猪作为研究对象,针对猪肺炎支原体的保守序列p36基因设计了引物和探针,建立猪支原体肺炎RT-PCR检测反应体系,并对其灵敏度、特异性、重复... 目的:建立一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法。方法:选择云南省大理地区患有猪支原体肺炎疾病的60只猪作为研究对象,针对猪肺炎支原体的保守序列p36基因设计了引物和探针,建立猪支原体肺炎RT-PCR检测反应体系,并对其灵敏度、特异性、重复性进行分析及临床样本验证。结果:RT-PCR检测灵敏度为10^(2)拷贝、与PRRSV、PPV、FMDV、PCV、CSFV、APP等无交叉反应,批内和批间变异系数均小于2.00%,肺组织样本检出阳性数26例(86.67%),鼻拭子样本检出阳性数19例(63.33%)。结论:该研究成功建立了一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法,具有较高的检测灵敏度和特异性,重复性能良好,这为后期MPS的临床精准诊断和疫病科学防控提供试验依据。 展开更多
关键词 猪支原体肺炎 RT-PCR 灵敏度 特异性
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两种PED返饲驯化后备猪方法效果评价 被引量：2
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作者 于淇 高峰 黄子琛 《今日畜牧兽医》 2024年第3期2-4,共3页
为探究后备母猪PED驯化的最佳返饲方式,本实验选择拌料返饲和饮水返饲两种返饲方式,通过对返饲后猪群临床症状、肛拭子抗原检测、血清PED-IgA抗体进行监测,评价返饲效果。结果显示,临床症状方面:拌料返饲猪群腹泻比例为88.95%(338/380)... 为探究后备母猪PED驯化的最佳返饲方式,本实验选择拌料返饲和饮水返饲两种返饲方式,通过对返饲后猪群临床症状、肛拭子抗原检测、血清PED-IgA抗体进行监测,评价返饲效果。结果显示,临床症状方面:拌料返饲猪群腹泻比例为88.95%(338/380),腹泻比例峰值出现在返饲后第4 d,排毒期为14d,饮水返饲猪群腹泻比例为48.55%(184/379),腹泻比例峰值出现在返饲后第7 d,排毒期为26 d;返饲完成后3周各实验组分别采集30份血液样本,检测PEDIgA抗体,拌料返饲血清PED-IgA抗体阳性率为100%,离散度为14.76%,S/P均值为4.016,饮水返饲血清PED-IgA抗体阳性率为96.67%,离散度为54.66%,S/P均值2.382。结果显示,在进行PED驯化后备猪过程中,拌料返饲比饮水返饲感染周期和排毒时间更短,拌料返饲比饮水返饲的血清PED-IgA抗体阳性率和S/P值更高、离散度更低。在后备猪开展PED驯化过程中,拌料返饲方式优于饮水返饲方式。 展开更多
关键词 返饲 防控方法 猪流行性腹泻
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H5N2亚型禽流感病毒中药佐剂灭活苗对公雏鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响 被引量：7
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作者 马德慧 薛江东 +3 位作者 姚春雨 孟宪龙 杨明霞 刘国文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期131-133,共3页
将200只海兰褐公雏鸡分为4组,每组50只。A组注射H5N2亚型禽流感病毒黄芪多糖油乳剂灭活苗;B组注射H5N2亚型禽流感病毒人参皂苷油乳剂灭活苗;C组注射H5N2亚型禽流感病毒普通油乳剂灭活苗;D组注射生理盐水油乳剂(空白对照)。分别在免疫前... 将200只海兰褐公雏鸡分为4组,每组50只。A组注射H5N2亚型禽流感病毒黄芪多糖油乳剂灭活苗;B组注射H5N2亚型禽流感病毒人参皂苷油乳剂灭活苗;C组注射H5N2亚型禽流感病毒普通油乳剂灭活苗;D组注射生理盐水油乳剂(空白对照)。分别在免疫前随机选取5只鸡心脏采血,EDTA抗凝。于免疫后5、12、19 d每组每次分别随机选取5只鸡心脏采血,EDTA抗凝,检查各阶段各组鸡外周血T淋巴细胞亚群变化情况。结果表明,免疫后第12天,黄芪多糖和人参皂苷可提高CD4+/CD8+淋巴细胞的比值,与普通疫苗和对照组相比,差异极显著(P<0.01);黄芪多糖和人参皂苷可提高CD4+淋巴细胞亚群的百分率,与免疫前相比,差异极显著或显著(P<0.01或P<0.05)。 展开更多
关键词 禽流感灭活苗 黄芪多糖 人参皂苷 T淋巴细胞亚群
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5株PCV2四川株全基因组的克隆与遗传进化分析 被引量：4
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作者 杨泽晓 马玉峰 +6 位作者 汪开毓 王印 赵希仑 姚学萍 任冉阳 陈平 胡凌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第4期1-9,16,共10页
[目的] 了解目前四川省猪圆环病毒2型（PCV2）的分子流行病学特征和遗传变异情况,探讨PCV2感染的控制对策。[方法] 根据GenBank中发表的PCV2基因组序列设计2对特异性引物,对2012-2014年临床送检的PCV2感染病例材料中的5株PCV2全基因组... [目的] 了解目前四川省猪圆环病毒2型（PCV2）的分子流行病学特征和遗传变异情况,探讨PCV2感染的控制对策。[方法] 根据GenBank中发表的PCV2基因组序列设计2对特异性引物,对2012-2014年临床送检的PCV2感染病例材料中的5株PCV2全基因组序列进行扩增测序,并利用DNAStar等生物信息分析软件对获得的PCV2基因组序列进行分子特性与遗传演变分析。[结果] 5株PCV2四川株全基因组序列长度都为1 767bp,均具有滚环复制起点（ORC）典型结构。序列比对和进化分析显示,5株PCV2四川株的基因序列同源性很高,基因组核苷酸序列及ORF1、ORF2和ORF3基因序列同源性分别为98.4%～99.9%,97.5%～99.6%,99.4%～100%和96.2%～100%,ORF1、ORF2和ORF3基因推导氨基酸序列同源性分别为98.4%～99%,99.6%和91.5%～100%;与47条参比PCV2毒株核苷酸序列的同源性比较发现,5株PCV2与国内一些新出现的PCV2毒株亲缘关系较近,且均属于PCV2d基因型毒株。[结论] 5株PCV2四川株之间尽管存在着不同程度的基因变异,但遗传进化相对较稳定。 展开更多
关键词 PCV2 基因克隆 遗传进化分析
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