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结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达
被引量：
2
1
作者
周丽蓉
徐敬华
+1 位作者
罗永艾
王国治
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期703-705,共3页
目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入...
目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
CFP10
基因克隆
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职称材料
结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究
被引量：
3
2
作者
周丽蓉
罗永艾
王国治
《中国防痨杂志》
CAS
2007年第3期235-237,共3页
目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LP...
目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。
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关键词
分枝杆菌
结核
脂多糖
抗原
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职称材料
题名
结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达
被引量：
2
1
作者
周丽蓉
徐敬华
罗永艾
王国治
机构
重钢总医院呼吸科
中国药品生物制品检定所菌苗室
重庆医
科
大学附属第一
医院
肺
科
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期703-705,共3页
文摘
目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
CFP10
基因克隆
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
CFP10
Gene cloning
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究
被引量：
3
2
作者
周丽蓉
罗永艾
王国治
机构
重钢总医院呼吸科
重庆医
科
大学附属第一
医院
肺
科
中国药品生物制品检定所菌苗室
出处
《中国防痨杂志》
CAS
2007年第3期235-237,共3页
文摘
目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。
关键词
分枝杆菌
结核
脂多糖
抗原
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Lipopolysaccharide
Antigen
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达
周丽蓉
徐敬华
罗永艾
王国治
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究
周丽蓉
罗永艾
王国治
《中国防痨杂志》
CAS
2007
3
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