新型局部麻醉药物4-甲氧基-N-2-(4-哌啶基)乙基苯甲酰胺类化合物的合成及生物活性研究 被引量：2

1

作者 周石洋 杨善彬 《贵州师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第6期93-98,共6页

以达克罗宁为先导化合物,通过烷基链改造和生物电子等排原理进行结构优化,共设计出12个类似化合物。在实验过程中,以4-羟基苯甲酸为起始原料,经酰氯化、酰胺化、醚键化、N-烷基化等4步合成目标产物,其目标分子结构经~1H NMR、^(13)C NMR... 以达克罗宁为先导化合物,通过烷基链改造和生物电子等排原理进行结构优化,共设计出12个类似化合物。在实验过程中,以4-羟基苯甲酸为起始原料,经酰氯化、酰胺化、醚键化、N-烷基化等4步合成目标产物,其目标分子结构经~1H NMR、^(13)C NMR、MS和元素分析法进行表征。通过角膜反射实验对各目标分子进行了生物活性研究,结果表明,各目标分子都具有良好的生物活性,其中化合物1l的生物活性最好。 展开更多

关键词 先导化合物 结构优化 表征 生物活性

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乙酰胆碱酯酶的分离纯化及生物学研究进展 被引量：12

2

作者 叶东平 陈斌 何正波 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期3811-3814,共4页

乙酰胆碱酯酶在神经突触间隙中通过催化水解神经递质乙酰胆碱来维持神经冲动的正常传递,广泛存在于各种动物组织中,如脑、红血球、鱼肉组织和动物血清中。总结了最近国内外关于乙酰胆碱酯酶的研究进展,包括乙酰胆碱酯酶的提取、纯化和... 乙酰胆碱酯酶在神经突触间隙中通过催化水解神经递质乙酰胆碱来维持神经冲动的正常传递,广泛存在于各种动物组织中,如脑、红血球、鱼肉组织和动物血清中。总结了最近国内外关于乙酰胆碱酯酶的研究进展,包括乙酰胆碱酯酶的提取、纯化和固定化研究,且综述了有关乙酰胆碱酯酶传感器的应用进展,以及在治疗疾病如阿尔茨海默病方面的应用,这将为以乙酰胆碱酯酶为目标的研究提供信息框架。 展开更多

关键词 乙酰胆碱酯酶 分离纯化 酶的固定 传感器 阿尔茨海默病

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养殖丁肝胰脏淀粉酶活性的初步研究 被引量：1

3

作者 马诚 朱敏 李英文 《安徽农业科学》 CAS 2012年第7期4013-4016,4140,共5页

[目的]研究养殖丁(Tinca tinca L.)肝胰脏淀粉酶的基本性质。[方法]采用酶学分析方法研究丁肝胰脏淀粉酶的pH、温度、底物浓度、缓冲液及8种金属离子对其肝胰脏淀粉酶活性影响。[结果]淀粉酶最适pH为7.5,最适温度44℃,最适底物浓度0... [目的]研究养殖丁(Tinca tinca L.)肝胰脏淀粉酶的基本性质。[方法]采用酶学分析方法研究丁肝胰脏淀粉酶的pH、温度、底物浓度、缓冲液及8种金属离子对其肝胰脏淀粉酶活性影响。[结果]淀粉酶最适pH为7.5,最适温度44℃,最适底物浓度0.4%,最适缓冲液为0.2 mol/L Tris-HCl缓冲液。在设定浓度范围内(10～50 mmol/L),K+、Na+对淀粉酶活力影响具有促进作用;Ca2+、Mg2+对淀粉酶活力也有促进作用;Fe3+在低浓度(10 mmol/L)表现为促进,高浓度(20～50 mmol/L)表现为抑制作用;Al3+、Pb2+、Ag+对酶活力具有抑制作用。[结论]结果为丁鱼岁的人工养殖和饲料优化,提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 丁 淀粉酶活力 金属离子

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高效溶栓菌株的筛选鉴定及活性测定 被引量：3

4

作者 霍金柱 陈斌 +2 位作者 李莹 何正波 敬俊锋 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期85-93,共9页

以日本纳豆、重庆江津豆豉、忠县豆腐乳为原料,采用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛,得到18株产溶栓酶的菌株.通过纤维蛋白平板实验,从忠县豆腐乳中筛选出1株具有较高溶栓活性的菌株FR-033(登录号:HQ009804),菌株经液体发酵后获得含酶发酵液,... 以日本纳豆、重庆江津豆豉、忠县豆腐乳为原料,采用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛,得到18株产溶栓酶的菌株.通过纤维蛋白平板实验,从忠县豆腐乳中筛选出1株具有较高溶栓活性的菌株FR-033(登录号:HQ009804),菌株经液体发酵后获得含酶发酵液,采用硫酸铵分段盐析及sephadexG-50凝胶层析进行纯化,获得较高纯度的溶栓酶,酶活力为2 163 IU/mL.进一步对FR-033菌株的形态和生理生化特征进行研究.利用细菌16S rDNA通用引物对16S rRNA进行PCR扩增并测序,得到1444 bp长度的DNA序列,通过BLAST软件在NCBI网站收索其同源性性序列,利用PAUP4.0和MAGE4软件绘制系统发育树,结果表明:菌株FR-033与枯草芽孢杆菌(Bacil-lus subtilis)的16S rRNA序列同源性达99%以上,在系统发育树中,菌株FR-033与枯草芽孢杆菌在同一支上,且遗传距离最短;FR-033的形态及大部分生理生化特征与枯草芽孢杆菌极为相似,表明该菌株是枯草芽孢杆菌(Ba-cillus subtilis)的一个高效的产溶栓酶菌株. 展开更多

关键词 豆腐乳 枯草芽孢杆菌 活性测定 16S RRNA

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纳豆激酶研究进展 被引量：1

5

作者 敬俊锋 陈斌 +1 位作者 李莹 何正波 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期3821-3823,3830,共4页

对纳豆激酶的理化性质、基因与蛋白结构、纳豆激酶基因的克隆与表达及体外溶栓活性测定方面的研究进展进行了综述,并对纳豆激酶的发展前景进行了展望。

关键词 纳豆激酶 结构 克隆表达 活性测定 展望

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温度、pH对泥鳅肠道消化酶活性的影响

6

作者 丁茜 田宝军 +1 位作者 耿丽娜 李英文 《河北渔业》 2009年第5期5-7,共3页

以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)为研究材料,测定不同温度及不同pH条件下肠道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。结果表明,随温度、pH值的升高,三种酶活性的变化均表现为先增高后降低。蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的最适温度分别为50℃... 以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)为研究材料,测定不同温度及不同pH条件下肠道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。结果表明,随温度、pH值的升高,三种酶活性的变化均表现为先增高后降低。蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的最适温度分别为50℃、50℃、40℃,最适pH值分别为7.0、7.0、7.5。 展开更多

关键词 泥鳅 消化酶活性 温度 PH

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葱蝇Dorsal基因的克隆·表达及生物信息学分析 被引量：1

7

作者 魏慧敏 陈斌 任爽 《安徽农业科学》 CAS 2012年第17期9332-9335,共4页

[目的]探讨Dorsal与葱蝇滞育发育的关系。[方法]以葱蝇(Delia antiqua)为试虫,采用RACE方法克隆了葱蝇Dorsal的全长cDNA序列;将该序列推导的氨基酸序列在GenBank搜寻同源序列,与搜寻到的14个代表性昆虫Dorsal序列进行相似性比较,并进行... [目的]探讨Dorsal与葱蝇滞育发育的关系。[方法]以葱蝇(Delia antiqua)为试虫,采用RACE方法克隆了葱蝇Dorsal的全长cDNA序列;将该序列推导的氨基酸序列在GenBank搜寻同源序列,与搜寻到的14个代表性昆虫Dorsal序列进行相似性比较,并进行系统进化分析;采用半定量RT-PCR方法分析了Dorsal基因在葱蝇非滞育、夏滞育、冬滞育蛹中的表达情况。[结果]克隆了葱蝇Dorsal基因的cDNA序列,全长2 412 bp,开放阅读框1 974 bp,编码657个氨基酸,等电点PI约8.5,分子量72.9 kDa。与GenBank中的其他14个昆虫代表性Dorsal序列相似性比较和进化分析显示葱蝇的Dorsal与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、拟暗果蝇(Drosophlia pseudoob-scura)的Dorsal序列相似性最大。半定量分析显示葱蝇Dorsal基因在葱蝇冬滞育、夏滞育、非滞育蛹滞育发育关键期的表达量均明显升高,尤其在滞育后期表达量最高,初步判断Dorsal基因与葱蝇滞育发育相关。[结论]为进一步开展Dorsal基因在昆虫滞育发育过程中的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 Dorsal基因 葱蝇 RACE 序列分析 系统发育树 半定量分析

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纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：8

8

作者 敬俊锋 陈斌 +2 位作者 李莹 何正波 霍金柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期55-59,54,共6页

纳豆激酶纳是从日本传统食品纳豆中发现的一类具有溶栓效果的蛋白酶,由于其具有安全,高效,作用时间长,易吸收,廉价等优点,现在正成为一个开发治疗血栓类疾病药物的研究热点。从本实验室保存的一株高溶栓的纳豆杆菌N07出发,提取总基因组D... 纳豆激酶纳是从日本传统食品纳豆中发现的一类具有溶栓效果的蛋白酶,由于其具有安全,高效,作用时间长,易吸收,廉价等优点,现在正成为一个开发治疗血栓类疾病药物的研究热点。从本实验室保存的一株高溶栓的纳豆杆菌N07出发,提取总基因组DNA,利用PCR手段扩增获得了纳豆激酶长为825bp的成熟肽基因片段。构建重组表达质粒pPICZaA-NK,经EcoR I、Xba I双酶切、PCR、测序验证得出重组表达质粒上的外源基因即为825bp的目的片段;将重组质粒pPICZaA-NK用内切酶Sac I线性化后电击导入毕赤酵母X33,通过含Zeocin的YPDS平板筛选获得重组酵母。重组酵母在BMMY培养基中发酵培养,用1%甲醇诱导目的蛋白表达。用纤维蛋白平板法检测发现发酵上清具有纤溶活性,经硫酸铵盐析、透析、Sephadex-G50过柱等步骤分离得到纳豆激酶蛋白,进行SDS-PAGE鉴定表明,表达的纳豆激酶蛋白分子量为27KD。以尿激酶为标准,实验所得纳豆激酶发酵上清液溶栓活性约为195U/mL。成功的将纳豆激酶成熟肽基因在毕赤酵母X33中表达,为纳豆激酶基因工程进一步研究奠定基础。 展开更多

关键词 纳豆激酶基因 毕赤酵母 克隆 表达

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葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库构建 被引量：5

9

作者 冯国忠 黎万顺 +1 位作者 陈斌 李莹 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期89-94,共6页

葱蝇具有夏滞育的特性且与果蝇近缘.为构建葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库,并为进一步的夏滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础,利用RNAiso试剂盒提取葱蝇夏滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,限制性酶切消化后将cDNA克隆到... 葱蝇具有夏滞育的特性且与果蝇近缘.为构建葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库,并为进一步的夏滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础,利用RNAiso试剂盒提取葱蝇夏滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,限制性酶切消化后将cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB.经鉴定原始文库的滴度为2.4×107cfu/mL.随机挑取克隆,经PCR快速鉴定,插入片段大小在0.35～2.2kb之间,平均大小约为0.9kb,重组率达100%,获得了高质量的葱蝇夏滞育蛹cDNA文库. 展开更多

关键词 葱蝇 夏滞育蛹 全长CDNA文库 SMART技术

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己烯雌酚抑制斑马鱼精子发生及其可能的分子机制 被引量：4

10

作者 谭号 李英文 +1 位作者 尹盼 刘智皓 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期331-338,共8页

为研究内分泌干扰物己烯雌酚(DES)对鱼类精巢发育和配子发生的影响,研究用DES(0.1、1和10μg/L,暴露20d)对内分泌干扰研究的经典模式动物——斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行了处理。组织学研究结果表明,DES严重影响斑马鱼精子发生。同... 为研究内分泌干扰物己烯雌酚(DES)对鱼类精巢发育和配子发生的影响,研究用DES(0.1、1和10μg/L,暴露20d)对内分泌干扰研究的经典模式动物——斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行了处理。组织学研究结果表明,DES严重影响斑马鱼精子发生。同时,研究克隆了斑马鱼与生殖细胞发育和减数分裂相关的vasa、dmc1的部分c DNA,对其组织和细胞表达模式进行了研究。结果表明,vasa仅表达于精巢的精原细胞、初级精母细胞和卵巢不同时期的生殖细胞;而dmc1则表达于精巢精母细胞和卵巢卵母细胞发育早期。半定量PCR结果表明,DES处理后vasa的表达没有明显变化;而dmc1的表达则被明显抑制,且呈时间依赖性和剂量依赖性效应;而转录因子dmrt1和雄激素合成关键酶基因P450 11β的表达也被显著抑制。因此本研究推测,DES可能通过抑制dmrt1和P450 11β的表达诱导了斑马鱼生殖细胞凋亡;并通过抑制dmc1的表达阻碍了减数分裂。 展开更多

关键词 己烯雌酚 斑马鱼 生殖细胞丢失 精子发生 减数分裂

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piggyBac转座子及其转基因昆虫的应用 被引量：5

11

作者 唐丽莉 陈斌 +1 位作者 何正波 李廷景 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第6期2809-2811,2814,共4页

综述了piggyBac转座子的结构、转座机制及其在获得转基因动物方面的应用成果,介绍了利用该转座子获得的转基因昆虫在功能基因研究、生物反应器、昆虫改良和害虫防治等方面的应用。

关键词 PIGGYBAC 转座子 转基因昆虫

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乙炔基雌二醇(EE2)对雄性黄颡鱼GtH 3个亚基基因表达的影响 被引量：2

12

作者 谭号 李英文 +1 位作者 饶剑军 刘智皓 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1117-1125,共9页

为研究乙炔基雌二醇(EE2)是否能影响雄性黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)垂体中促性腺激素3个亚基基因的表达,从而干扰FSH和LH的分泌,研究采用末端快速扩增(RACE)的方法在黄颡鱼垂体中克隆了促性腺激素的2个β亚基(FSHβ和LHβ)的全长c... 为研究乙炔基雌二醇(EE2)是否能影响雄性黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)垂体中促性腺激素3个亚基基因的表达,从而干扰FSH和LH的分泌,研究采用末端快速扩增(RACE)的方法在黄颡鱼垂体中克隆了促性腺激素的2个β亚基(FSHβ和LHβ)的全长c DNA,对其组织表达模式和雌雄性垂体中的季节表达模式进行了研究;另外,研究还用100 ng/L的EE2对雄性黄颡鱼(2龄)进行了28d的暴露处理。结果发现,黄颡鱼FSHβc DNA全长528 bp,ORF为399 bp,编码132个氨基酸;LHβ全长为870 bp,ORF为417 bp,编码138个氨基酸。序列分析结果表明,黄颡鱼FSHβ含有一个17氨基酸的信号肽,2个保守的N-糖基化位点和13个半胱氨酸残基,而LHβ含有一个18个氨基酸的信号肽,1个N-糖基化位点和12个半胱氨酸残基,与其他鲶形目鱼类极其相似。进化分析显示,黄颡鱼FSHβ和LHβ与鲶形目的鱼类进化关系较近。组织分布结果发现,黄颡鱼3亚基均仅在垂体中表达。季节表达模式结果表明,雌雄黄颡鱼Gt Hα和LHβ表达水平在5月份左右达到最高,随后降低;FSHβ在雌性的表达模式与Gt Hα和LHβ相同,而在雄性,FSHβ的表达没有明显变化。半定量RT-PCR结果显示,100 ng/L的EE2能显著抑制黄颡鱼促性腺激素3个亚基基因的表达。研究认为,EE2抑制黄颡鱼雄性垂体FSH和LH的分泌,可能阻碍其正常的精子发生、精子成熟和排精过程,从而影响其正常的繁殖和发育。 展开更多

关键词 黄颡鱼 促性腺激素β亚基 CDNA克隆 基因表达 乙炔基雌二醇

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葱蝇ADH基因的克隆及序列分析

13

作者 陈春露 陈斌 +1 位作者 司风玲 何正波 《安徽农业科学》 CAS 2012年第14期8027-8030,共4页

[目的]对葱蝇(Delia antiqua)ADH基因进行克隆,并对其进行序列分析。[方法]通过RACE的方法克隆葱蝇ADH基因的cDNA序列,同时对该序列进行同源性分析、氨基酸序列比对和系统发育分析。[结果]试验获得的cDNA全长1 088 bp,其中ORF 771 bp,编... [目的]对葱蝇(Delia antiqua)ADH基因进行克隆,并对其进行序列分析。[方法]通过RACE的方法克隆葱蝇ADH基因的cDNA序列,同时对该序列进行同源性分析、氨基酸序列比对和系统发育分析。[结果]试验获得的cDNA全长1 088 bp,其中ORF 771 bp,编码256个氨基酸,推测其相对分子质量为30.80 kDa,等电点为8.22;通过该基因推导的氨基酸序列与其他物种的ADH进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与刺舌蝇(Glossina morsitans)氨基酸序列的同源性最高。[结论]该研究为ADH基因的进一步研究提供了基础。 展开更多

关键词 葱蝇 乙醇脱氢酶 ADH基因 序列分析 系统发育

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