基于eDNA技术的长江上游珍稀特有鱼类国家级自然保护区重庆段鱼类多样性研究 被引量：32

1

作者 王梦 杨鑫 +5 位作者 王维 段聪 刘智皓 陈启亮 李英文 沈彦君 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期2-16,共15页

利用环境DNA宏条形码(environmental DNA metabarcoding;eDNA metabarcoding)检测长江上游珍稀特有鱼类国家级自然保护区重庆段鱼类多样性,探索适用于长江鱼类多样性监测和保护的新方法,为后期长江“十年禁渔”效果评估提供一定的基础... 利用环境DNA宏条形码(environmental DNA metabarcoding;eDNA metabarcoding)检测长江上游珍稀特有鱼类国家级自然保护区重庆段鱼类多样性,探索适用于长江鱼类多样性监测和保护的新方法,为后期长江“十年禁渔”效果评估提供一定的基础资料。研究于2021年3月在保护区重庆段共设置6个采样点,通过水样采集、eDNA捕获及提取、PCR扩增及测序和数据库对比分析等环境DNA宏条形码标准化分析流程来检测鱼类的多样性组成。结果表明保护区重庆段6个采样点中共检测出74种鱼类(不包括未鉴定到种水平的3属),隶属于6目16科52属,其中国家级保护鱼类2种,长江上游特有鱼类10种,重庆市重点保护鱼类1种,外来物种8种。鲤属(Cyprinus)、鲫属(Carassius)、草鱼属(Ctenopharyngodon)和黄颡鱼属(Tachysurus)在各采样点均被检测到且为优势种。各样点鱼类组成的Alpha和Beta多样性的各项指数差异不大,表明保护区鱼类的生态结构较为均衡和稳定。总体上,在现阶段的长江流域鱼类资源监测中,可根据监测任务的需要,将环境DNA技术与传统的监测方法结合使用,用于快速调查长江流域鱼类的多样性组成及分布等。 展开更多

关键词 环境DNA 鱼类多样性 自然保护区 长江上游 珍稀特有鱼类

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黑棘鲷的命名和分类地位探究 被引量：17

2

作者 吴仁协 刘静 +1 位作者 樊冀蓉 赵元莙 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期117-119,共3页

黑棘鲷Acanthopagrus schlegelii（Bleeker,1854）隶属鲈形目（Perciformes）、鲷科（Sparidae）、棘鲷属（Acanthopagrus），为暖温性底层鱼类，喜栖息于砂泥底质或多岩礁的浅海，分布于俄罗斯、中国、朝鲜半岛及日本沿海。黑棘鲷具有... 黑棘鲷Acanthopagrus schlegelii（Bleeker,1854）隶属鲈形目（Perciformes）、鲷科（Sparidae）、棘鲷属（Acanthopagrus），为暖温性底层鱼类，喜栖息于砂泥底质或多岩礁的浅海，分布于俄罗斯、中国、朝鲜半岛及日本沿海。黑棘鲷具有生长迅速、食性较杂、适应能力和抗病力强等特点，且肉质鲜美、营养丰富，深受人们喜爱，是西北太平洋沿海的名贵经济鱼类和重要的增养殖对象。 展开更多

关键词 鲷科 分类地位 名贵经济鱼类 日本沿海 西北太平洋 底层鱼类 朝鲜半岛 适应能力

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盐度对河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)胚胎、仔鱼发育过程中能量收支的影响 被引量：7

3

作者 胡先成 周忠良 +3 位作者 赵云龙 王艳 秦芬 徐晓倩 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期569-575,共7页

提要在淡水、1.00、2.00、3.00、4.00盐度等条件下,采用鱼类生物能量学的方法,测定了河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中的耗氧率、NH3-N排泄率,并对不同盐度下河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中的能量流转进行了研究。结果表明,在不同发育时... 提要在淡水、1.00、2.00、3.00、4.00盐度等条件下,采用鱼类生物能量学的方法,测定了河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中的耗氧率、NH3-N排泄率,并对不同盐度下河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中的能量流转进行了研究。结果表明,在不同发育时期,盐度对耗氧率和NH3-N排泄率都有显著影响,以1.00盐度条件下的耗氧率为最低,而NH3-N排泄率则在淡水条件下为最低并随着盐度的升高逐渐增高;盐度对河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中的能量收支有显著影响,以1.00盐度条件下的能量分配模式为最佳模式,代谢耗能占食物能的比例(R/C)最低,为35.06%,而生长能占食物能的比例(G/C)最高,达到58.55%,能量收支方程为:100C=6.40U+35.06R+58.55G。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢 胚胎 仔鱼 盐度 耗氧率 NH3-N排泄率 能量收支

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黄颡鱼繁殖期主要组织器官中氨基酸和脂肪酸的组成 被引量：10

4

作者 姚俊杰 姜海波 +2 位作者 胡先成 安苗 李川 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2009年第5期115-118,共4页

采用生物化学方法,对黄颡鱼繁殖期的性腺、肝脏、肌肉中的氨基酸和脂肪酸进行了测定。结果表明:氨基酸组成中,雄性亲鱼肌肉中氨基酸总量最高,为42.73 g/100g;其次是精巢,为36.40 g/100g;肝脏中含量最低,为24.01 g/100g。含量较高的氨基... 采用生物化学方法,对黄颡鱼繁殖期的性腺、肝脏、肌肉中的氨基酸和脂肪酸进行了测定。结果表明:氨基酸组成中,雄性亲鱼肌肉中氨基酸总量最高,为42.73 g/100g;其次是精巢,为36.40 g/100g;肝脏中含量最低,为24.01 g/100g。含量较高的氨基酸有Glu,Asp,Lys,Leu,Arg,Ala,Gly,Phe。Glu在所有氨基酸中含量最高,Lys在必需氨基酸中含量最高。雌性亲鱼肌肉中氨基酸总量最高,为41.98 g/100g;其次是卵巢,为25.71 g/100g;肝脏中含量最低,为18.74 g/100g。脂肪酸:雌雄亲鱼均为MUFA所占比例最高,其次是SFA,PUFA比例最小。脂肪酸比例较高的雄鱼与雌鱼相似,分别是C18:1n-9(油酸),C16:0(软脂酸),C18:2n-6(亚油酸),C16:1n-7(棕榈酸),C18:0(硬脂酸)。研究揭示了黄颡鱼繁殖期性腺、肝脏、肌肉在物质组成上的特点。 展开更多

关键词 黄颡鱼 繁殖期 器官 氨基酸 脂肪酸

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河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中蛋白酶活性的变化 被引量：9

5

作者 刘铭 胡先成 +1 位作者 韩强 罗颖 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第5期39-41,共3页

采用生物化学方法测定和分析了河川沙塘鳢(Odontobutis potam ophila)胚胎、仔鱼发育过程中胃蛋白酶、胰蛋白酶的活性及其变化。结果显示,在胚胎发育初期,其胃蛋白酶的活性一直很低,在孵化前期,其胃蛋白酶的活性增高,之后继续升高,在孵... 采用生物化学方法测定和分析了河川沙塘鳢(Odontobutis potam ophila)胚胎、仔鱼发育过程中胃蛋白酶、胰蛋白酶的活性及其变化。结果显示,在胚胎发育初期,其胃蛋白酶的活性一直很低,在孵化前期,其胃蛋白酶的活性增高,之后继续升高,在孵出后5 d的仔鱼,其胃蛋白酶的活性达到最高。在胚胎发育初期,其胰蛋白酶活性相对较高,在眼黑色素出现期时明显升高,而在孵化前期时再次升高,孵出后5 d的仔鱼,其胰蛋白酶的活性亦达到最高。这也说明在河川沙塘鳢的胚胎、仔鱼发育过程中,其蛋白酶的活性总体呈上升的趋势。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila) 胚胎发育 仔鱼发育 胃蛋白酶 胰蛋白酶

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不同盐度下鲈鱼稚鱼鳃的显微结构观察 被引量：23

6

作者 王艳 胡先成 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期138-142,共5页

采用石蜡切片和显微摄影技术,研究了不同盐度下鲈鱼(Lateolabrax japonicus)稚鱼鳃的显微结构。结果显示,在15.00盐度组,稚鱼鳃的鳃丝和鳃小片上泌氯细胞数量较多,泌氯细胞集中分布在鳃小片基部,且黏液细胞较多。与15.00盐度组和淡水组... 采用石蜡切片和显微摄影技术,研究了不同盐度下鲈鱼(Lateolabrax japonicus)稚鱼鳃的显微结构。结果显示,在15.00盐度组,稚鱼鳃的鳃丝和鳃小片上泌氯细胞数量较多,泌氯细胞集中分布在鳃小片基部,且黏液细胞较多。与15.00盐度组和淡水组相比,7.50盐度组稚鱼鳃的鳃小片较窄,泌氯细胞的分布、结构及数量变化均不明显。在0.00盐度组,稚鱼鳃中鳃小片较宽,排列紧密,泌氯细胞数量较少,且主要分布在近鳃小片基部。鲈鱼稚鱼鳃的结构能够适应外界水体盐度的变化,其中泌氯细胞的结构和数量变化是与鲈鱼稚鱼所处的环境相适应的。 展开更多

关键词 鲈鱼(Lateolabrax japonicus) 稚鱼 鳃 泌氯细胞 盐度 渗透压调节

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不同盐度条件下饥饿及恢复摄食鲈稚鱼脂肪酸的组成 被引量：8

7

作者 王艳 胡先成 韩强 《水产科学》 CAS 北大核心 2008年第7期334-339,共6页

采用气相色谱法测定和分析了15.00、7.50及淡水3个盐度条件下鲈稚鱼在饥饿时及其恢复摄食后的脂肪酸变化。结果显示,在3个盐度条件下,饥饿的鲈稚鱼均首先消耗饱和脂肪酸,随后才会消耗不饱和脂肪酸;恢复摄食后的鲈稚鱼,其不饱和脂肪酸也... 采用气相色谱法测定和分析了15.00、7.50及淡水3个盐度条件下鲈稚鱼在饥饿时及其恢复摄食后的脂肪酸变化。结果显示,在3个盐度条件下,饥饿的鲈稚鱼均首先消耗饱和脂肪酸,随后才会消耗不饱和脂肪酸;恢复摄食后的鲈稚鱼,其不饱和脂肪酸也优先得到补充。在3个盐度条件下,以淡水组饥饿稚鱼的多不饱和脂肪酸的消耗量最大,但在恢复摄食后,其EPA、DHA的含量又为最高,这可能与不同盐度条件下鲈稚鱼的生物转化能力不同有关。 展开更多

关键词 鲈 饥饿稚鱼 盐度 脂肪酸

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盐度对饥饿状态下河川沙塘鳢稚鱼生化组成及能量收支的影响 被引量：6

8

作者 胡先成 赵云龙 周忠良 《水产科学》 CAS 北大核心 2008年第3期109-113,共5页

在0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00不同盐度条件下,分析和测定了饥饿6 d的河川沙塘鳢稚鱼的生化组成、NH3-N排泄率,并对能量流转进行了研究。试验结果表明,盐度对河川沙塘鳢饥饿稚鱼的生化组成、NH3-N排泄率均有显著影响。盐度2.00... 在0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00不同盐度条件下,分析和测定了饥饿6 d的河川沙塘鳢稚鱼的生化组成、NH3-N排泄率,并对能量流转进行了研究。试验结果表明,盐度对河川沙塘鳢饥饿稚鱼的生化组成、NH3-N排泄率均有显著影响。盐度2.00,饥饿稚鱼的失重最少,蛋白质、脂肪等能源物质的消耗最少;NH3-N排泄率随着盐度的升高逐渐增高,但在盐度5.00时又稍有下降。盐度对河川沙塘鳢稚鱼在饥饿期间能量收支的各组分有显著影响,其最佳盐度为2.00,在此盐度条件下,河川沙塘鳢饥饿稚鱼损失的生长能最少,为-13.295 J,代谢耗能最低,为11.94 J。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢 稚鱼 饥饿 盐度 生化组成 NH3-N排泄率 能量收支

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河川沙塘鳢胚胎发育过程中可溶性蛋白组成及含量的变化 被引量：6

9

作者 胡先成 罗颖 +1 位作者 赵云龙 周忠良 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第1期20-22,共3页

利用显微镜观察了河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)胚胎的发育过程,并采用生物化学方法测定、分析了河川沙塘鳢胚胎发育过程中可溶性蛋白的组成及含量。结果显示,可溶性蛋白组成及含量变化与其胚胎发育的过程密切相关。在受精卵期,... 利用显微镜观察了河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)胚胎的发育过程,并采用生物化学方法测定、分析了河川沙塘鳢胚胎发育过程中可溶性蛋白的组成及含量。结果显示,可溶性蛋白组成及含量变化与其胚胎发育的过程密切相关。在受精卵期,可溶性蛋白主要是相对分子质量为116 000、100 500的卵黄蛋白。随着胚胎发育的进行,可溶性蛋白的组成由高分子的蛋白向低分子的蛋白转化,其相对分子质量为97 250、86 000、68 000、38 000、26 000等。在胚胎发育后期,高分子的蛋白进一步减少,而低分子的蛋白进一步增加。可溶性蛋白的含量随着胚胎的发育总体呈下降的趋势。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila) 胚胎发育 可溶性蛋白

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河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中脂类含量及脂肪酸组成的变化 被引量：15

10

作者 胡先成 赵云龙 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第3期46-50,共5页

采用生物化学方法测定和分析了河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)胚胎、仔鱼发育过程中脂类的含量及脂肪酸的组成。结果显示,随着胚胎和仔鱼的发育,其总脂的含量呈下降趋势,饱和脂肪酸(SFA)的含量亦呈现出下降趋势,单不饱和脂肪酸(MU... 采用生物化学方法测定和分析了河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)胚胎、仔鱼发育过程中脂类的含量及脂肪酸的组成。结果显示,随着胚胎和仔鱼的发育,其总脂的含量呈下降趋势,饱和脂肪酸(SFA)的含量亦呈现出下降趋势,单不饱和脂肪酸(MUFA)的含量在胚胎期保持稳定、在仔鱼期下降,而多不饱和脂肪酸(PUFA)却呈现出不断增长的趋势。在整个胚胎和仔鱼发育过程中,平均含量最高的脂肪酸依次是C16∶0、C18∶1n-9、C18∶0、C16∶1、C22∶6n-3(DHA)和C20∶5n-3(EPA)。结果表明:河川沙塘鳢在胚胎和仔鱼发育过程中有消耗饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸,而保存n-3系列和n-6系列的高度不饱和脂肪酸的趋势,饱和脂肪酸被作为胚胎期能量代谢的主要来源,单不饱和脂肪酸被作为仔鱼期能量代谢的主要来源,而C18∶3n-3(亚麻酸)和C18∶2n-6(亚油酸)被用于合成DHA、EPA和C20∶4n-6(AA)。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila) 胚胎发育 仔鱼发育 脂类 脂肪酸

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多涅茨尾孢虫（Henneguya doneci） 4个种群遗传多样性的RAPD分析 被引量：6

11

作者 孙春燕 赵元莙 陈子桂 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1097-1100,共4页

利用RAPD技术研究了多涅茨尾孢虫4个种群的遗传多样性.多涅茨尾孢虫的3个采样点是重庆市沙坪坝区、江津县和大足县;选取一种碘泡虫为外群,采自大足县.用筛选出的3个随机引物扩增基因组DNA.实验结果表明,种群间存在一定的变异,遗传距离在... 利用RAPD技术研究了多涅茨尾孢虫4个种群的遗传多样性.多涅茨尾孢虫的3个采样点是重庆市沙坪坝区、江津县和大足县;选取一种碘泡虫为外群,采自大足县.用筛选出的3个随机引物扩增基因组DNA.实验结果表明,种群间存在一定的变异,遗传距离在0.24～0.40之间,而与异种的一种碘泡虫的遗传距离可达0.51.通过对多涅茨尾孢虫4个种群的RAPD结果分析,认为RAPD技术可用于粘孢子虫近缘属间的系统发育关系分析. 展开更多

关键词 粘孢子虫 多涅茨尾孢虫 随机扩增多态DNA

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青岛近岸海洋鱼类4种寄生薄壳虫属粘孢子虫,包括1新种的研究(粘体门,双壳目) 被引量：3

12

作者 赵元莙 宋微波 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期61-66,共6页

作为中国海洋鱼类寄生粘孢子虫的系列研究内容之一,本文报道了自青岛沿海多种鱼类体内寄生的薄壳虫属1新种并重描述了3个已知种:似短薄壳虫,新种Leptotheca brevoides sp.n.;云雾薄壳虫L.nebulifera Zhao & Song,2003;豆粒薄壳虫L.f... 作为中国海洋鱼类寄生粘孢子虫的系列研究内容之一,本文报道了自青岛沿海多种鱼类体内寄生的薄壳虫属1新种并重描述了3个已知种:似短薄壳虫,新种Leptotheca brevoides sp.n.;云雾薄壳虫L.nebulifera Zhao & Song,2003;豆粒薄壳虫L.faba(Meglitsch,1960)Zhao & Song,2003和大孢薄壳虫L.macrospora Auerbach,1909。 展开更多

关键词 粘体门 角形虫科 薄壳虫属 新种 海洋鱼类 黄海

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车轮虫干银染色方法的改进 被引量：2

13

作者 何根林 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第12期74-75,F0003,共3页

关键词 银染色法 染色方法 轮虫 种类鉴别 活体观察 寄生虫 纤毛虫 分类

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鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养与鉴定

14

作者 赵瑛 唐安科 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第5期743-745,F0003,共4页

目的探讨大鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的分离培养鉴定的方法。方法Percoll(1.077g/ml)分离液分离大鼠骨髓单个核细胞,血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factors,VEGF)和碱性成纤维细胞生长... 目的探讨大鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的分离培养鉴定的方法。方法Percoll(1.077g/ml)分离液分离大鼠骨髓单个核细胞,血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factors,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factors,bFGF),对其进行诱导培养,光镜观察EPCs形态,免疫荧光检测血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙粘蛋白(VEcadherin/CD144)、荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的表达和摄取Dil荧光标记的乙酰化-低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)。结果诱导培养7d后,可见集落和铺路石样结构,激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)显示表型为CD31+VE-cadherin+双阳性细胞以及具有内皮细胞功能的Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双染色细胞。结论采用Percoll(1.077g/ml)密度梯度离心结合VEGF、bFGF诱导培养可以获得EPCs,说明该培养方法可行。 展开更多

关键词 大鼠 内皮祖细胞 分离 培养 鉴定

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生殖季节河川沙塘鳢雌鱼亲鱼卵巢的脂类含量及脂肪酸组成变化

15

作者 朱嘉洁 李加敏 +1 位作者 杨崴 胡先成 《河北农业科学》 2012年第8期47-50,共4页

以Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期3个发育时期的河川沙塘鳢雌鱼亲鱼为研究对象,采用氯仿-甲醇溶液抽提法和气相色谱法,测定了其卵巢脂类含量及其脂肪酸组成。结果表明:Ⅲ～Ⅴ期卵巢的脂类含量呈上升趋势;在卵巢中共检测出27种脂肪酸,平均含量占总脂肪酸... 以Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期3个发育时期的河川沙塘鳢雌鱼亲鱼为研究对象,采用氯仿-甲醇溶液抽提法和气相色谱法,测定了其卵巢脂类含量及其脂肪酸组成。结果表明:Ⅲ～Ⅴ期卵巢的脂类含量呈上升趋势;在卵巢中共检测出27种脂肪酸,平均含量占总脂肪酸含量较高的脂肪酸种类是c18∶1n9c、c16∶0、c16∶1、c18∶2n6c、EPA和DHA;不饱和脂肪酸含量极为丰富,Ⅲ～Ⅴ期的含量分别占总脂肪酸含量依次为71.93%、74.77%和73.13%;n-3系列脂肪酸含量与n-6系列脂肪酸含量的比值均>1。因此,在人工繁殖过程中,为了提高河川沙塘鳢雌鱼亲鱼的培养质量,可考虑投喂含有n-3系列脂肪酸和其他UFA含量高的饲料。 展开更多

关键词 河川沙塘鳢 脂类含量 脂肪酸组分 生殖季节 雌鱼 亲鱼

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中华蜜蜂NPC1蛋白AcNPC1的原核表达、多克隆抗体制备及功能鉴定 被引量：2

16

作者 刘永梅 史红霞 +5 位作者 李颜 马振刚 王林玲 许金山 周泽扬 党晓群 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1314-1324,共11页

【目的】人类C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)主要是由NPC1基因突变引起的一类遗传疾病。NPC1蛋白主要负责胞内胆固醇运输,同时也作为病毒侵染宿主细胞的重要受体之一近年来备受关注。本研究旨在探究NPC1蛋白与中华蜜... 【目的】人类C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)主要是由NPC1基因突变引起的一类遗传疾病。NPC1蛋白主要负责胞内胆固醇运输,同时也作为病毒侵染宿主细胞的重要受体之一近年来备受关注。本研究旨在探究NPC1蛋白与中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)感染的关系。【方法】通过PCR扩增中华蜜蜂Apis cerana cerana AcNPC1基因;将其克隆至pET-30a原核表达载体,转化至大肠杆菌Escherichia coli Rosetta TM(DE3)进行IPTG诱导表达,采用镍柱纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体。设计并合成AcNPC 1 siRNA,添食中华蜜蜂幼虫;运用RT-qPCR检测和分析中华蜜蜂CSBV添毒幼虫中AcNPC1的表达量,以及RNAi干扰后不同时间AcNPC1基因和CSBV病毒衣壳蛋白VP1基因在感染CSBV的中华蜜蜂幼虫中的表达水平。【结果】成功构建重组表达质粒pET-30a-AcNPC 1,在大肠杆菌中获得高效表达的重组蛋白,目的蛋白大小约为36 kD,经亲和纯化获得了纯度较高的重组蛋白,免疫小鼠成功制备了多克隆抗体,免疫印迹分析发现AcNPC1抗体能杂交到两条带,有可能是在提取膜蛋白过程中该蛋白发生了部分降解。中华蜜蜂CSBV添毒幼虫中AcNPC1表达与正常幼虫中的相比,在12,24和48 h并无显著变化,在72 h出现显著上调。RNAi实验结果表明,中华蜜蜂正常幼虫添食24 h后AcNPC1的3个干涉片段(siRNA1,siRNA2 and siRNA3)均对AcNPC 1具有显著性下调作用,AcNPC1表达分别下调了73.20%,72.81%和54.78%;给CSBV添毒幼虫分别添食3个干涉片段,AcNPC1表达分别下调了43.90%,59.85%和57.67%。CSBV VP1基因在干扰AcNPC1基因72 h后表达下调了67.65%。【结论】利用原核表达系统能有效地在体外表达中华蜜蜂AcNPC1,并制备了其多克隆抗体。利用体外合成的siRNA对中华蜜蜂幼虫中AcNPC1的表达进行干扰,表明在蜜蜂中通过饲喂的方式进行RNAi可以成功下调靶标基因表达水平。不过,RNAi实验结果提示AcNPC1表达下调后可能并不直接影响CSBV的感染。本研究为进一步阐明AcNPC1的潜在功能打下了基础。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 NPC1蛋白 原核表达 表达谱 RNA干扰 SIRNA

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石斑角形虫(黏体门, 角形虫科)的分子证据及其在不同宿主中的遗传变异 被引量：6

17

作者 黄艳梅 赵元莙 +1 位作者 周杨 杨承忠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1263-1269,共7页

研究从中国东海的青石斑鱼Epinephelus awoara Temminck&Schlegel 1842和褐带石斑鱼E.bruneus Bloch 1793的胆囊中检获了石斑角形虫Ceratomyxa epinephela Wu,Wu et hua,1993,首次提供了其SSU rDNA和ITS1 rDNA序列,并基于形态学和... 研究从中国东海的青石斑鱼Epinephelus awoara Temminck&Schlegel 1842和褐带石斑鱼E.bruneus Bloch 1793的胆囊中检获了石斑角形虫Ceratomyxa epinephela Wu,Wu et hua,1993,首次提供了其SSU rDNA和ITS1 rDNA序列,并基于形态学和分子数据进行了重新描述。石斑角形虫成熟孢子的孢子长(4.8±0.5)μm(3.6—5.6μm),孢子厚(31.8±4.8)μm(23.3—37.5μm);孢子壳瓣光滑且等大,由垂直的缝线连接;极囊长(2.9±0.2)μm(2.4—3.7μm),极囊宽(2.6±0.2)μm(2.2—3.1μm);孢子夹角处稍微凹陷,延伸至两端逐渐变平坦,夹角为(175.9±3.7)°(165.5°—179.7°)。基于SSU rDNA序列构建的系统发育树显示石斑角形虫与诺兰角形虫C.nolani Gunter&Adlard 2009,卡特莫尔角形虫C.cutmorei Gunter&Adlard 2009和横山角形虫C.yokoyamai Gunter&Adlard 2009有很近的亲缘关系,且其宿主均为石斑鱼属物种。结果表明,类群关系较近的宿主其寄生的同属黏孢子虫可能具有更近的系统发育关系。基于SSU rDNA和ITS1 rDNA的遗传分析显示,石斑角形虫的4个分离株已发生了明显的遗传分化(形成了4个基因型),形成了不同的种群,但在不同宿主种类间并未形成特有的分化。 展开更多

关键词 石斑角形虫 重描述 SSU rDNA ITS1 rDNA 遗传变异

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东方蜜蜂微孢子虫一新型孢壁蛋白的基因克隆、表达及亚细胞定位 被引量：2

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作者 熊亮 敖塘堰 +2 位作者 张真 马振刚 周泽扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1070-1079,共10页

【目的】微孢子虫(Microsporidia)孢壁在孢子构成及孢子侵染宿主过程中扮演重要的角色。本研究旨在鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae新型孢壁蛋白,并进行基因克隆和原核表达,明确其亚细胞定位。【方法】通过在线软件对东方蜜... 【目的】微孢子虫(Microsporidia)孢壁在孢子构成及孢子侵染宿主过程中扮演重要的角色。本研究旨在鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae新型孢壁蛋白,并进行基因克隆和原核表达,明确其亚细胞定位。【方法】通过在线软件对东方蜜蜂微孢子虫新型孢壁蛋白AAJ76_1400036761序列进行生物信息学分析。利用PCR法获取目的片段并将其克隆至原核表达载体pCold II中,利用IPTG诱导表达重组蛋白并通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以获得的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光技术和免疫胶体金定位技术对该蛋白进行亚细胞定位分析;利用蛋白质免疫印迹法检测该蛋白与东方蜜蜂微孢子虫几丁质壳的互作。【结果】在MicrosporidiaDB数据库中获得AAJ76_1400036761基因序列,基因全长681 bp,编码226个氨基酸;预测等电点为6.84,分子量为26.19 kD。SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明AAJ76_1400036761重组蛋白能够在大肠杆菌Eescherichia coli Rosetta中高量表达。Western blot结果表明,制备的多克隆抗体能够特异地识别东方蜜蜂微孢子虫总蛋白中的AAJ76_1400036761,说明其在成熟东方蜜蜂微孢子虫中有表达。亚细胞定位结果显示,AAJ76_1400036761定位于东方蜜蜂微孢子虫孢壁上。重组蛋白AAJ76_1400036761能够与蜜蜂微孢子虫的几丁质壳结合。【结论】AAJ76_1400036761蛋白在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中有表达;该蛋白定位于东方蜜蜂微孢子虫孢壁上,为东方蜜蜂微孢子虫新的孢壁蛋白。本研究为深入研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 东方蜜蜂微孢子虫 孢壁蛋白 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位

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HSP70研究进展及其在粘孢子虫分类学与病害学中的应用 被引量：2

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作者 鄢彦杰 赵元莙 《河北农业科学》 2010年第10期68-72,103,共6页

热休克蛋白(HSPs)是生物细胞在受热、生物应激、理化因素等应激原刺激后所产生的一类在生物进化过程中最保守的蛋白,在原核生物和真核生物中普遍存在。其中HSP70是最受关注、研究最为深入的一种,也是含量最丰富的HSPs家族。HSP70具有高... 热休克蛋白(HSPs)是生物细胞在受热、生物应激、理化因素等应激原刺激后所产生的一类在生物进化过程中最保守的蛋白,在原核生物和真核生物中普遍存在。其中HSP70是最受关注、研究最为深入的一种,也是含量最丰富的HSPs家族。HSP70具有高度保守的序列,常作为分子伴侣在协助新生多肽链折叠、蛋白质复合体的装配、调节、修复和降解变性方面起着重要作用。对近年来国内外HSP70的研究概况、生物学特性、生物学功能及在粘孢子虫中的应用研究现状进行了综述,并对HSP70在粘孢子虫中的研究前景进行了讨论。 展开更多

关键词 HSP70 生物学功能 应用 粘孢子虫

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四种de novo组装软件对柞蚕微孢子虫全基因组组装结果的比较 被引量：1

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作者 刘宗林 许金山 周泽扬 《蚕学通讯》 2012年第3期1-5,共5页

柞蚕是一类以柞树叶为食料的经济类吐丝结茧昆虫,柞蚕微孢子是寄生在柞蚕体内的一种微孢子虫,是柞蚕微粒子病的病原,其主要通过食下传染或者母体传染来感染柞蚕。目前在分子水平上对柞蚕微孢子虫的研究还很少,本研究通过比较分析四种常... 柞蚕是一类以柞树叶为食料的经济类吐丝结茧昆虫,柞蚕微孢子是寄生在柞蚕体内的一种微孢子虫,是柞蚕微粒子病的病原,其主要通过食下传染或者母体传染来感染柞蚕。目前在分子水平上对柞蚕微孢子虫的研究还很少,本研究通过比较分析四种常见的de novo组装软件对柞蚕微孢子虫全基因组的组装,结果显示不同的软件组装的结果相差甚远,由此表明由于柞蚕基因组本身结构的特殊性及组装软件的针对性,导致了组装质量的差异性。本研究对于今后昆虫微孢子虫基因组的组装软件的选择优化提供了重要的参考。 展开更多

关键词 微粒子病 柞蚕微孢子虫 DE novo组装 基因组

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