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体外诱导脐血造血细胞定向分化的研究
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作者 张伶 李维 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期540-542,共3页
目的 探讨造血生长因子体外诱导脐血造血细胞向粒系细胞分化的能力。方法 从新鲜的脐血标本中分离的单个核细胞接种于含脐血血清和造血生长因子的IMDM培养液中悬浮培养 5周 ,采用有核细胞计数、免疫荧光染色计数和祖细胞集落测定对有... 目的 探讨造血生长因子体外诱导脐血造血细胞向粒系细胞分化的能力。方法 从新鲜的脐血标本中分离的单个核细胞接种于含脐血血清和造血生长因子的IMDM培养液中悬浮培养 5周 ,采用有核细胞计数、免疫荧光染色计数和祖细胞集落测定对有核细胞总数、CD3 4+ 细胞和粒单系祖细胞进行动态检测。结果 用粒系集落刺激因子、粒单系集落刺激因子、干细胞因子、白介素 3和白介素 6培养脐血单个核细胞 3周 ,可以显著扩增有核细胞总数和CFU GM ,扩增倍数分别为培养前的 5 8 3倍和 12 2倍 ,且培养后的细胞以中性粒细胞为主。而CD3 4+ 细胞占细胞总数的比例则从 0 97%下降到 0 0 5 %。按照此培养条件 ,可以使单份新鲜脐血样本中有核细胞总数增加 ( 5 1± 2 3 )倍 ,CFU GM增加 ( 2 2± 0 95 )倍。结论 本培养体系在体外可以诱导脐血造血细胞向粒系定向诱导分化 。 展开更多
关键词 胎血 造血细胞 细胞因子 诱导分化
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血管内皮生长因子及其Flt-1受体在白血病细胞中的表达 被引量:8
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作者 张伶 陈辉 +3 位作者 李维 涂植光 冯文莉 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期678-681,共4页
目的 探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子 (VEGF)及其Flt 1受体的表达 ,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制。方法 以人脐静脉血管内皮细胞系ECV3 0 4作为对照 ,采用RT PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病... 目的 探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子 (VEGF)及其Flt 1受体的表达 ,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制。方法 以人脐静脉血管内皮细胞系ECV3 0 4作为对照 ,采用RT PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病细胞系K5 62和HL 60中VEGF及Flt 1的表达。采用MTT试验观察VEGF反义寡核苷酸 (VEGF AS)对白血病细胞体外增殖的影响。结果 K5 62和HL 60细胞同时表达VEGF和Flt 1mRNA和蛋白。VEGF AS能够抑制白血病细胞体外增殖。结论 在白血病细胞异常增殖中自分泌VEGF可能起着重要作用。 展开更多
关键词 VEGF Flt-1受体 K562细胞 HL-60细胞
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VEGF对白血病树突状细胞抗原提呈能力的影响 被引量:5
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作者 张伶 李维 +1 位作者 涂植光 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1587-1590,共4页
目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)对白血病源树突状细胞(dendrit-ic cell,DC)抗原提呈能力的影响及其分子机制。方法K562细胞经5μmol/LVEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)处理24h,ELISA和免疫组化检测V... 目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)对白血病源树突状细胞(dendrit-ic cell,DC)抗原提呈能力的影响及其分子机制。方法K562细胞经5μmol/LVEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)处理24h,ELISA和免疫组化检测VEGF蛋白水平。以正常K562细胞诱生的白血病DC作为对照组,利用流式细胞术和混合淋巴细胞反应,观察AS-ODN处理的白血病DC的免疫表型及其刺激T细胞增殖的能力。采用荧光素酶检测系统和RT-PCR分析培养12h时白血病DC内NF-κB转录活性和Flt-1mRNA水平。结果AS-ODN处理使K562细胞VEGF蛋白分泌量较K562细胞组显著下降(P<0.05)。与K562-DC比较,AS-ODN处理的免疫表型(CD40、CD86、CD83、HLA-DR)表达明显上调。在不同DC/T值(1:10~1:40)时,MLR实验中AS-K562-DC组刺激指数(SI)明显高于对照组(P<0.05)。此外,培养12h时AS-K562-DCNF-κB转录活性较K562-DC明显增高(P<0.05),而Flt-1mRNA水平未见明显改变。结论反义寡核苷酸可抑制白血病细胞VEGF表达,下调VEGF能够增强白血病DC免疫表型的表达,提高DC抗原提呈能力。 展开更多
关键词 白血病 血管内皮生长因子 反义寡核苷酸 树突状细胞 核因子ΚB
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冰冻机采血小板超微结构回收率以及CD62P,PAC-Ⅰ的改变 被引量:5
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作者 李维 余梅贵 府伟灵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1067-1069,共3页
目的 研究以终浓度 5 %二甲亚砜 (DMSO)为主的冷冻保存剂加入机采血小板冻存 1周、4周后血小板超微结构 ,体外回收率 (RR)以及CD62P和PAC Ⅰ的改变。方法 跟踪 3 0例机采血小板产品 ,采用全自动血细胞分析仪 ,透射电镜 (TEM)技术和流... 目的 研究以终浓度 5 %二甲亚砜 (DMSO)为主的冷冻保存剂加入机采血小板冻存 1周、4周后血小板超微结构 ,体外回收率 (RR)以及CD62P和PAC Ⅰ的改变。方法 跟踪 3 0例机采血小板产品 ,采用全自动血细胞分析仪 ,透射电镜 (TEM)技术和流式细胞术 (FCM)等分析并比较加入以DMSO为主的冷冻保存剂在 -12 0℃冻存 1周 ,4周后血小板的超微结构 ,RR值及CD62P和PAC Ⅰ的改变。结果  3 0例冷冻保存 1周及 4周后的血小板仍然具有相对完整的超微结构。冻存 1周及 4周后血小板的RR分别为冻前的 79 49%± 6 14 %和 74 0 7%± 5 3 9%。新鲜机采血小板的CD62P及PAC Ⅰ的值分别为 5 0 72 %± 14 3 1% ,5 3 2 3 %±2 0 2 6% ;冻存一周及四周后CD62P和PAC Ⅰ的值分别为 3 0 96%± 11 0 2 % ,2 2 96%± 9 90 % ;3 2 0 7%± 9 2 1% ,19 5 5 %± 10 3 3 %。结论 与新鲜机采血小板相比 ,冰冻血小板仍然具有较高的回收率和相对完整的超微结构 ,但也显示了不同程度的激活。与较高的回收率相对应 ,冷冻保存 1周及 4周后的机采血小板产品仍然具有较高的CD62P及PAC Ⅰ活性 ,其CD62P及PAC Ⅰ值无显著性差异 (P >0 0 5 )。 展开更多
关键词 冰冻机 血小板 超微结构 回收率 CD62P PAC-I
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