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金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状
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作者 张绍城 汪德强 罗淼 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1172-1174,共3页
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中Sdr E蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现Sdr E蛋白质的表达几乎不受环境因素(包括温度、金属离子)的影响,并且可能与S.aur... 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中Sdr E蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现Sdr E蛋白质的表达几乎不受环境因素(包括温度、金属离子)的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现Sdr E蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,Sdr E蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现Sdr E蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了Sdr E蛋白质的生物学功能,为基于Sdr E蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 表面蛋白质SdrE 生物学功能 抗菌药物
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GRP78重组表达腺病毒的构建及在HepG2细胞的表达及其相关功能研究
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作者 吴爽 张祥 +2 位作者 魏杰 汪德强 罗淼 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期384-388,共5页
目的:构建葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)重组表达腺病毒pAd-GRP78,并感染HepG2细胞建立能够高表达GRP78的细胞模型,同时在HepG2细胞中研究重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖能力的影响。方法:利用腺病毒穿梭质粒pA... 目的:构建葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)重组表达腺病毒pAd-GRP78,并感染HepG2细胞建立能够高表达GRP78的细胞模型,同时在HepG2细胞中研究重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖能力的影响。方法:利用腺病毒穿梭质粒pAd Track-TO4构建载有GRP78基因的穿梭质粒pAd Track-TO4-GRP78载体,并通过基因测序鉴定载体序列正确。将载体用PmeⅠ酶切线性化,与Ad Easy-BJ5183感受态细胞进行基因同源重组。将重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,转染到HEK293细胞中进行包裹,根据增强绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达判断重组腺病毒的包装情况。通过反复离心和低温裂解细胞提取GRP78重组表达腺病毒。以人肝癌HepG2细胞为目标,进行病毒感染。通过qRT-PCR检测GRP78基因表达情况,使用Western blot检测GRP78蛋白的表达。最后感染HepG2细胞,通过MTS比色法检测重组表达GRP78腺病毒对细胞增殖的影响。结果:测序验证pAd Track-TO4-GRP78构建成功,酶切验证重组腺病毒载体pAd-GRP78构建成功。在HEK293细胞中将pAd-GRP78包裹,GPF荧光检测结果表示病毒包装成功。使用pAd-GRP78感染人肝癌HepG2细胞,qRT-PCR检测到细胞中GRP78基因的过表达,Western blot方法检测到GRP78蛋白的高表达。MTS检测结果显示重组表达GRP78腺病毒对HepG2肝癌细胞有促增殖作用。结论:实验成功构建了GRP78重组表达腺病毒,并验证了构建的腺病毒载体可以收集并感染HepG2细胞表达GRP78蛋白。证明了重组表达GRP78腺病毒能够促进肝癌细胞的增殖。为进一步研究GRP78的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒 葡萄糖调节蛋白78 HEPG2细胞 MTS
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肺炎链球菌热休克蛋白Grp E的表达、纯化及热稳定性研究
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作者 张宏鹏 赵沙沙 +5 位作者 龙小滨 吴爽 白垒 罗淼 黄爱龙 汪德强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1448-1451,共4页
目的:肺炎链球菌可引起细菌性肺炎和脑膜炎、发热性菌血症等多种疾病。对肺炎链球菌热休克蛋白Grp E进行克隆表达,纯化及热稳定性测定,以便于进一步分析肺炎链球菌感染的分子机制。方法:利用PCR技术扩增Grp E基因,构建重组质粒p W28-Grp... 目的:肺炎链球菌可引起细菌性肺炎和脑膜炎、发热性菌血症等多种疾病。对肺炎链球菌热休克蛋白Grp E进行克隆表达,纯化及热稳定性测定,以便于进一步分析肺炎链球菌感染的分子机制。方法:利用PCR技术扩增Grp E基因,构建重组质粒p W28-Grp E,并在大肠杆菌(escherichia coli,E.coli)B834中表达,Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化Grp E蛋白,Hiload Superdex 75凝胶层析柱分析在溶液中的聚集状态,热稳定性(thermal shift assay,TSA)法测定热稳定性。结果:1成功构建重组质粒p W28-Grp E,在表达菌E.coli B834中可溶性表达。2获得高纯度(95.0%以上)Grp E蛋白,发现该蛋白在溶液中以二聚体形式存在。3测定Grp E蛋白在p H 6.0、20 mmol/L盐浓度缓冲液中有较高热稳定性。结论:利用经典的蛋白质克隆表达纯化技术,获得了高表达量高纯度的Grp E蛋白,并初步测定其热稳定性为下一步蛋白晶体培养、三维结构解析及感染机制研究提供重要基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 热休克蛋白Grp E 蛋白质表达纯化 热稳定性
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a-L- 岩藻糖苷酶对诊断原发性肝癌的临床意义 被引量:3
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作者 陈鸣放 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期440-442,共3页
目的:探讨a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase,AFU)对诊断原发性肝癌(primaryhepaticcarcinoma,PHC)的临床意义。方法:对80例正常人、33例肝癌患者、37例肝炎患者、42例肝硬化患者、10例转移性肝癌患者和37例其它恶性肿瘤患者所测的血清检测... 目的:探讨a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase,AFU)对诊断原发性肝癌(primaryhepaticcarcinoma,PHC)的临床意义。方法:对80例正常人、33例肝癌患者、37例肝炎患者、42例肝硬化患者、10例转移性肝癌患者和37例其它恶性肿瘤患者所测的血清检测AFU活性值并进行统计后,比较各组AFU水平差异。结果:血清AFU水平,PHC组(41.2±14.1U/L)明显高于正常对照组(20.5±7.2U/L)、转移性肝癌组(22.2±13.6U/L)、其它恶性肿瘤组(22.0±7.1U/L),P<0.01和肝硬化组(25.5±13.0U/L)(0.01<P<0.05)。结论:a-L-岩藻糖苷酶是PHC的特异性标志物,可用于PHC的早期诊断。 展开更多
关键词 A-L-岩藻糖苷酶 原发性肝癌 肿瘤标志物
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白细胞介素10基因-819C/T多态性与结核病易感性的Meta分析 被引量:1
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作者 李艳林 黎亮 唐秀芳 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第7期732-739,共8页
目的 评价白细胞介素(IL)10基因-819C/T多态性与结核病易感性的关系.方法 分别以关键词“IL-10”、“Cytokine”、“Interleukine-10”、“TB”、“Tuberculosis”和“Polymorphism”依次组合,检索1990年1月至2016年6月在Medline、Pub... 目的 评价白细胞介素(IL)10基因-819C/T多态性与结核病易感性的关系.方法 分别以关键词“IL-10”、“Cytokine”、“Interleukine-10”、“TB”、“Tuberculosis”和“Polymorphism”依次组合,检索1990年1月至2016年6月在Medline、PubMed、EMBase等数据库公开发表的英文文献;以“结核”、“单核苷酸多态性”、“白细胞介素10”、“细胞因子”和“易感性”依次组合,检索1990年1月至2016年6月在万方数据库、中国知网(CNKI)和维普数据库等公开发表的中文文献.确定文献的纳入和排除标准,筛选文献并进行质量评价.共纳入20篇文献.应用Stata 12.0软件对各研究原始数据进行Meta分析,分析文献资料的异质性,计算合并OR(95%CI)值,评估发表偏倚.结果 纳入研究的20篇文献累计结核病患者(病例组)5579例,健康体检者(对照组)6848名.Meta分析结果显示,在各个遗传模型中,IL-10基因-819C/T多态性与结核病总体患病风险关系不大.对纳入的所有研究以地区进行分层,发现亚洲人群中携带等位基因T者结核病患病风险高于携带等位基因C者[OR(95%CI)值:1.17(1.07~1.29),P=0.001];携带纯合子基因型TT者结核病患病风险高于携带纯合子基因型CC者[OR(95%CI)值:1.34(1.10~1.65),P=0.004];携带IT+ TC基因型者结核病患病风险高于携带纯合子基因型CC者[OR(95%CI)值:1.22(1.03~1.46),P=0.024];携带纯合子基因型TT者结核病患病风险高于携带TC+ CC基因型者[OR(95%CI)值:1.24(1.02~1.51),P=0.030].经Begg和Egger检验,纳入的所有研究未见明显发表偏倚.结论 IL-10基因-819C/T位点等位基因T可能与亚洲人群结核病易感性风险增高有关. 展开更多
关键词 结核 白细胞介素10 多态性 单核苷酸 疾病易感性 META分析 INTERLEUKIN-10
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白细胞介素2基因-330T/G和白细胞介素6基因-174G/C多态性与结核病易感性的Meta分析
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作者 李艳林 黎亮 +1 位作者 唐秀芳 吴秀娟 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第3期263-268,共6页
目的分析白细胞介素2(IL-2)基因-330T/G和IL-6基因-174G/C多态性与结核病易感性的关系。方法在Medline、PubMed、EMBase、Web of Science、Elsevier Science Direct、万方数据库、中国知网(CNKI)和维普数据库中检索从1990年1月至2... 目的分析白细胞介素2(IL-2)基因-330T/G和IL-6基因-174G/C多态性与结核病易感性的关系。方法在Medline、PubMed、EMBase、Web of Science、Elsevier Science Direct、万方数据库、中国知网(CNKI)和维普数据库中检索从1990年1月至2017年6月公开发表的关于IL-2和IL-6基因多态性与结核病易感性关系的中文和英文文献。初筛获得相关文献573篇,根据文献纳入和排除标准最终纳入文献12篇。应用Stata12.0软件对各研究原始数据进行Meta分析。结果IL-2基因-330T/G位点研究纳入文献共8篇,病例组971例,对照组1519名。Meta分析结果显示,欧洲人群中携带IL-2基因-330T等位基因者较携带-330G等位基因者患结核病风险低45%(T对G:OR=0.55;95%CI=0.31-0.98;P=0.042)。IL-6基因-174G/c位点纳入研究共9篇,病例组1445例,对照组1955名。Meta分析结果显示,美洲人群中携带IL-6基因-174G等位基因者患结核病风险是携带-174C等位基因者的1.65倍(G对C:OR=1.65;95%CI=1.28~2.13;P〈0.01);亚洲人群中携带IL-6基因-174G等位基因者患结核病风险是携带-174C等位基因者的1.4倍(G对C:OR=1.40;95%CI=1.13~1.72;P=0.002)。结论IL2基因-330T/G位点等位基因T可能与欧洲人群结核病易感性风险降低相关;IL-6基因-174G/C位点等位基因G可能与美国人群和亚洲人群结核病易感性风险增加相关。 展开更多
关键词 结核 白细胞介素2 白细胞介素6 多态性 单核苷酸 疾病易感性 META分析
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