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猪小肠黏膜下层作为组织修复材料的研究进展 被引量:4
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作者 粟香 葛良鹏 李前勇 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期122-128,共7页
小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)是经脱细胞技术处理的一种天然细胞外基质材料,免疫原性低,生物相容性好,因此广泛用于组织再生修复。然而,只有准确的理解SIS各种生物学特性,才能更好的实现SIS在再生医学领域的转化应用。... 小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)是经脱细胞技术处理的一种天然细胞外基质材料,免疫原性低,生物相容性好,因此广泛用于组织再生修复。然而,只有准确的理解SIS各种生物学特性,才能更好的实现SIS在再生医学领域的转化应用。SIS作为组织修复材料的功能,很大程度上依赖于SIS的组成结构、力学特性以及植入体内后降解产生的小分子及其产生的各种特性功能。因此本文就SIS的理化组成、特性、加工方式及应用相关进展进行综述,以助理解SIS的结构与功能,促进SIS的转化应用。 展开更多
关键词 小肠黏膜下层 细胞外基质 组织修复
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环境空气暴露对猪粪悬液中菌群及代谢物的影响 被引量:1
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作者 孙静 陈奕龄 +1 位作者 丁玉春 葛良鹏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期606-617,共12页
目的研究环境空气暴露对制备的粪悬液中微生物及代谢物的影响。方法收集无特定病原体级巴马小型猪粪便:(1)未处理组(C组);(2)有氧暴露处理组(T1组);(3)厌氧暴露处理组(T2组)。利用扩增子测序技术和非靶向代谢组比较各组粪样的微生物群... 目的研究环境空气暴露对制备的粪悬液中微生物及代谢物的影响。方法收集无特定病原体级巴马小型猪粪便:(1)未处理组(C组);(2)有氧暴露处理组(T1组);(3)厌氧暴露处理组(T2组)。利用扩增子测序技术和非靶向代谢组比较各组粪样的微生物群落组成及代谢产物。结果(1)T1和T2组粪悬液制备操作均保存了新鲜粪便中(C组)的全部细菌门,仍以厚壁菌门和拟杆菌门细菌为主,但显著降低了密螺旋体属细菌的丰度;(2)猪粪便中以子囊菌门、担子菌门真菌为主,粪悬液制备显著提高了猪粪便中子囊菌门真菌的丰度;有氧暴露处理去除了猪粪便中节单菌属真菌。(3)LC-MS结果显示:正负离子模式下各识别出402、195种代谢物,其中T1∶C代谢集、T2:C代谢集的差异代谢物分别为155和201个。结论猪粪悬液制备时间虽然不长,但有氧暴露对样本中真菌群落丰度的影响高于厌氧暴露,都显著地降低Treponema和Spirochaetes等有害菌群和相关代谢产物的丰度,提高了FMT的安全性。 展开更多
关键词 有氧暴露 厌氧暴露 粪悬液制备 SPF猪 粪便菌群 代谢物图谱
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肠道微生物对仔猪胆汁酸谱及胆汁酸代谢的影响 被引量:5
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作者 李梦颖 周华 +3 位作者 丁玉春 刘作华 孙静 李周权 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期49-61,共13页
旨在研究肠道微生物对仔猪肝脏、空肠内容物和粪便胆汁酸谱及仔猪胆汁酸代谢的影响。随机选择无菌剖腹产所得仔猪11头,分为无菌猪组(GF组,5头)和粪菌移植组(FMT组,6头)。GF组始终保持无菌状态,FMT组在7日龄时口服植入健康猪源粪菌。42... 旨在研究肠道微生物对仔猪肝脏、空肠内容物和粪便胆汁酸谱及仔猪胆汁酸代谢的影响。随机选择无菌剖腹产所得仔猪11头,分为无菌猪组(GF组,5头)和粪菌移植组(FMT组,6头)。GF组始终保持无菌状态,FMT组在7日龄时口服植入健康猪源粪菌。42日龄时,采集肝脏组织、空肠内容物、新鲜粪便用于胆汁酸定量,肝脏组织与空肠组织进行胆汁酸代谢相关基因定量。结果表明:相比于GF组,FMT组仔猪粪便中的总胆汁酸水平显著高于GF组(P<0.01);FMT仔猪空肠内容物和粪便中次级胆汁酸占总胆汁酸的比例显著高于GF仔猪(P<0.05),肝脏中也发现同样的趋势(P<0.05);相比于GF仔猪,FMT仔猪肝脏中CYP7A1、BAT、FXR等与胆汁酸合成、结合与转运相关基因的下调,肠道中转运蛋白MRP2基因表达上调。由此可见,肠道微生物的转入与定植不仅能够增加仔猪胆汁酸的排泄,提高次级胆汁酸占比,改变仔猪胆汁酸谱,而且还影响胆汁酸的肝肠循环过程。 展开更多
关键词 无菌猪 胆汁酸谱 胆汁酸代谢
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以肠道菌群为靶向的粪菌移植法及其在畜牧业的应用潜能 被引量:9
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作者 李晓蕾 李地艳 孙静 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期124-128,共5页
肠道微生物与宿主机体健康息息相关。粪便微生物移植(又称为粪菌移植,fecal microbiota transplantation,FMT)通过将健康供体粪便中的完整肠道菌群移入肠道微生态失衡的患者胃肠道内,经肠道菌群重构、恢复至正常状态。用FMT治疗某些肠... 肠道微生物与宿主机体健康息息相关。粪便微生物移植(又称为粪菌移植,fecal microbiota transplantation,FMT)通过将健康供体粪便中的完整肠道菌群移入肠道微生态失衡的患者胃肠道内,经肠道菌群重构、恢复至正常状态。用FMT治疗某些肠道疾病如复发性艰难梭菌感染、溃疡性结肠炎、肠易激综合症、克罗恩病效果显著,且可能对因肠道菌群紊乱引起的肠道外疾病的治疗有潜在价值。本文主要对FMT技术的发展进程、在疾病上的研究以及在畜牧业上的应用潜能进行综述,并分析其应用的制约因素。 展开更多
关键词 粪便微生物移植 肠道菌群平衡 畜牧业
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CD3E蛋白真核表达及全人源CD3单克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 杨希 郎巧利 +3 位作者 黄楠 余琳 吴梦(指导) 葛良鹏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期971-976,共6页
目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体。方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白。选取人源化抗体转基因小鼠CAMouse-HG76进行免疫,通过细胞融合的方法获得杂交瘤细胞... 目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体。方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白。选取人源化抗体转基因小鼠CAMouse-HG76进行免疫,通过细胞融合的方法获得杂交瘤细胞,再利用ELISA法和流式细胞分析法筛选CD3特异性单克隆抗体。结果:成功构建重组表达载体pcDNA3.4-CD3E-mFc,真核细胞表达并纯化获得纯度为85%的融合蛋白。免疫小鼠后效价高达1∶102400。杂交瘤细胞筛选获得3株CD3特异性单克隆抗体。结论:本研究成功获得了CD3E融合蛋白和CD3单克隆抗体,为后续建立ELISA检测方法、全人源治疗性抗体药物及相关研究提供基础。 展开更多
关键词 人CD3E 293F悬浮细胞 真核表达 单克隆抗体
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猪的免疫球蛋白基因鉴定和注释
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作者 张璞 林育 +1 位作者 游斌杰 孙静 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期208-215,共8页
目的本研究旨在鉴定猪的免疫球蛋白基因,为研究猪对疾病的抗性奠定坚实的基础,同时对生猪养殖及其作为医学模式动物都有一定意义。方法使用Blast+,R,DNAstar,WebLogo等软件通过人免疫球蛋白基因信息对猪的免疫球蛋白基因进行预测分类。... 目的本研究旨在鉴定猪的免疫球蛋白基因,为研究猪对疾病的抗性奠定坚实的基础,同时对生猪养殖及其作为医学模式动物都有一定意义。方法使用Blast+,R,DNAstar,WebLogo等软件通过人免疫球蛋白基因信息对猪的免疫球蛋白基因进行预测分类。结果共鉴定到猪的免疫球蛋白重链(IGH)基因43个,分为7个基因家族;免疫球蛋白κ轻链(IGK)基因27个,分为6个基因家族;免疫球蛋白λ轻链(IGL)基因25个,分为9个基因家族。结论我们发现了43个猪免疫球蛋白重链基因,其中可能存在假基因。同时猪免疫球蛋白两种轻链基因比例接近,这可能与其免疫特性有关,但仍需要相关的试验数据来开展研究。 展开更多
关键词 免疫球蛋白 基因组
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稳定高表达人GPC3的SK-Hep-1细胞系的构建
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作者 何琦琳 郎巧利 +3 位作者 余琳 黄楠 杨希 葛良鹏 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期59-63,共5页
目的获得稳定高表达人GPC3的SK-Hep-1细胞系。方法构建人GPC3真核表达载体pc DNA3.1-GPC3,通过电穿孔的方法转染至SK-Hep-1细胞,利用G418进行细胞筛选,获得稳定高表达GPC3的细胞系。再利用Western blot和流式细胞术进行鉴定,分析稳定转... 目的获得稳定高表达人GPC3的SK-Hep-1细胞系。方法构建人GPC3真核表达载体pc DNA3.1-GPC3,通过电穿孔的方法转染至SK-Hep-1细胞,利用G418进行细胞筛选,获得稳定高表达GPC3的细胞系。再利用Western blot和流式细胞术进行鉴定,分析稳定转染细胞表面GPC3蛋白的表达情况。结果成功构建的真核表达质粒pc DNA3.1-GPC3,检测发现SK-Hep-1细胞G418最佳筛选浓度为700μg/m L,利用该浓度G418筛选转染SK-Hep-1细胞,获得了细胞表面能够稳定高表达人GPC3蛋白的SK-Hep-1细胞系。结论建立高表达人GPC3蛋白的SK-Hep-1稳定细胞系,为研究靶向GPC3肝癌抗体提供了物质基础。 展开更多
关键词 人GPC3 SK-Hep-1 稳定转染 电穿孔法
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