肠道类器官在活性物质吸收代谢研究中的应用进展

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作者 郑兰艳 余远迪 +1 位作者 付利芝 朱买勋 《动物营养学报》 北大核心 2025年第8期5022-5032,共11页

肠道的吸收过程是营养物质与药物进入血液循环的主要途径,涉及上皮屏障通透性、转运蛋白活性和肠道代谢等多个复杂过程。为研究活性物质在肠道的吸收代谢机制,开发一个高效、安全、便捷且可靠的体外吸收预测模型一直是研究中的挑战和热... 肠道的吸收过程是营养物质与药物进入血液循环的主要途径,涉及上皮屏障通透性、转运蛋白活性和肠道代谢等多个复杂过程。为研究活性物质在肠道的吸收代谢机制,开发一个高效、安全、便捷且可靠的体外吸收预测模型一直是研究中的挑战和热点。肠道类器官,作为一种重要的肠吸收模型,由多种肠细胞构成,能够表达多种转运载体,并形成具有吸收代谢功能的肠道结构,已成为预测活性物质吸收代谢的理想工具。本文综述了肠道吸收机能及其细胞组成,肠道类器官的生物学特性、构建方法及其在活性物质吸收代谢研究中的应用,旨在为开发高效、低毒且促进动物生长的活性物质提供参考。 展开更多

关键词 肠道类器官 活性物质 吸收代谢

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重庆市部分地区规模化猪场圆环病毒3型流行情况调查 被引量：4

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作者 张邑帆 郑华 +1 位作者 张素辉 翟少钦 《畜禽业》 2021年第8期3-4,共2页

为了调查重庆地区规模化猪场圆环病毒3型流行情况,研究应用PCR方法,对重庆市部分地区2020年采集的814份全血样品进行检测。结果显示,PCV3的总样品阳性率为3.1%(25/814),其中石柱样品阳性率为16.7%(20/120),南川样品阳性率为1.4%(3/210)... 为了调查重庆地区规模化猪场圆环病毒3型流行情况,研究应用PCR方法,对重庆市部分地区2020年采集的814份全血样品进行检测。结果显示,PCV3的总样品阳性率为3.1%(25/814),其中石柱样品阳性率为16.7%(20/120),南川样品阳性率为1.4%(3/210),彭水样品阳性率为2.2%(2/90);在荣昌、丰都和长寿等地区皆未发现PCV3感染。试验结果为重庆地区的PCV3防控工作提供了科学依据。 展开更多

关键词 重庆地区 猪圆环病毒3型(PCV3) 流行情况 调查

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羊口疮病毒重庆分离株008基因的原核表达及生物信息学分析

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作者 余远迪 许国洋 +3 位作者 张素辉 郑华 付利芝 杨柳 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期1309-1313,共5页

【目的】研究羊口疮病毒008蛋白的功能,用原核表达系统表达008基因,并对其进行生物信息学分析。【方法】通过重庆临床分离株扩增得到008基因片段,将其连接到pET-28a(+)载体上,构建重组表达质粒,诱导表达该蛋白;对008蛋白利用ProtScale... 【目的】研究羊口疮病毒008蛋白的功能,用原核表达系统表达008基因,并对其进行生物信息学分析。【方法】通过重庆临床分离株扩增得到008基因片段,将其连接到pET-28a(+)载体上,构建重组表达质粒,诱导表达该蛋白;对008蛋白利用ProtScale程序分析疏水性,TMHMM server v.2.0分析跨膜区,SignalP 5.0 server预测信号肽以及通过Protean进行B细胞抗原表位预测分析。【结果】羊口疮008基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子量大小约为56 kd,主要以包涵体形式表达且与阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。生物信息学研究显示,008蛋白属于疏水性蛋白,无跨膜区及信号肽区域,其中B细胞表位可能存在11个。【结论】构建的pET-28a(+)-008质粒在IPTG诱导下成功表达008蛋白,008蛋白具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 008基因 原核表达 生物信息学

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禽流感致病机理及防控技术研究进展 被引量：3

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作者 吉雅图 许国洋 《畜禽业》 2022年第3期14-16,共3页

禽流感(Avian Influenza,AI)是由正黏膜病毒科,多形螺旋对称的A型流感病毒引起的一种传染性疾病综合征,该病毒属于RNA病毒[1]。被世界动物卫生组织(OIE)认定为A类传染病。禽流感病毒致病性的强弱与多个因素有关,致病机理较为复杂,而禽... 禽流感(Avian Influenza,AI)是由正黏膜病毒科,多形螺旋对称的A型流感病毒引起的一种传染性疾病综合征,该病毒属于RNA病毒[1]。被世界动物卫生组织(OIE)认定为A类传染病。禽流感病毒致病性的强弱与多个因素有关,致病机理较为复杂,而禽流感的防治原理也因方法的选择而有所差异,作用效果也各不相同。对禽流感致病机理和疫病防控进行综合分析,为禽流感的科学防控和机制探索提供理论基础。 展开更多

关键词 禽流感 病毒类型 治病机理 防控技术

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女黄扶正提取液体外抗羊痘病毒活性及对小鼠免疫功能的影响

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作者 牟豪 周建方 +4 位作者 余远迪 朱买勋 许国洋 闫志强 伍涛 《甘肃农业大学学报》 北大核心 2025年第1期19-26,共8页

【目的】研究女黄扶正提取液体外对羊痘病毒(goat pox virus,GTPV)的抑制作用及其机制,以及调节小鼠免疫功能的作用。【方法】测定女黄扶正提取液对羊肾细胞的毒性、确定最佳的用药浓度,分别测定病毒感染12、24、36、48 h后病毒拷贝数和... 【目的】研究女黄扶正提取液体外对羊痘病毒(goat pox virus,GTPV)的抑制作用及其机制,以及调节小鼠免疫功能的作用。【方法】测定女黄扶正提取液对羊肾细胞的毒性、确定最佳的用药浓度,分别测定病毒感染12、24、36、48 h后病毒拷贝数和TCID50。通过qPCR分析药物处理组、对照组、空白组的细胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IFN-β表达量。检测给药后免疫抑制小鼠血清中免疫指标及脾T淋巴细胞转化能力。【结果】女黄扶正提取液对羊肾细胞存在一定细胞毒性,在添加量为1 mg/mL时对细胞毒性最小,感染羊痘病毒12、24、36、48 h后,病毒拷贝数低于对照组,在48 h呈现显著性差异(P<0.05);病毒TCID50低于对照组,在24、48 h呈现显著性差异(P<0.05、P<0.01)。感染病毒后的药物处理组与对照组的细胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的表达量无显著性差异。给药后,女黄扶正提取液中剂量组小鼠脾T淋巴细胞转化能力明显升高,与模型组相比,差异极显著(P<0.01);免疫抑制小鼠血清中IFN-γ、IL-2升高,与模型组相比,差异极显著(P<0.01)。【结论】女黄扶正提取液可以体外抑制羊肾细胞中GTPV的增殖,提高小鼠IFN-γ、IL-2水平,调节机体免疫功能,为提高机体免疫及未来抗病毒药物的研发提供参考。 展开更多

关键词 女黄扶正提取液 GTPV 抗病毒活性 免疫调节

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重庆部分地区山羊场蓝舌病流行情况调查 被引量：1

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作者 张邑帆 郑华 张素辉 《四川畜牧兽医》 2023年第11期25-27,共3页

为了调查重庆地区山羊场蓝舌病(BT)的流行情况,本研究应用RT-nested PCR检测方法,对2020~2023年重庆市6个区县的1771份山羊全血样品进行检测,结果显示:BTV的总样品阳性率为6.2%(109/1771),酉阳的样品阳性率为11.1%(36/325),荣昌的样品... 为了调查重庆地区山羊场蓝舌病(BT)的流行情况,本研究应用RT-nested PCR检测方法,对2020~2023年重庆市6个区县的1771份山羊全血样品进行检测,结果显示:BTV的总样品阳性率为6.2%(109/1771),酉阳的样品阳性率为11.1%(36/325),荣昌的样品阳性率为9.6%(29/303),武隆的样品阳性率为1.1%(2/183),石柱的样品阳性率为3.8%(13/344),彭水的样品阳性率为2.9%(9/310),长寿的样品阳性率为6.5%(20/306)。本调查结果为重庆地区山羊场的BTV防控工作提供了科学依据。 展开更多

关键词 重庆地区 蓝舌病病毒(BTV) 山羊场 流行情况

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山羊痘病毒在不同日龄山羊睾丸细胞中的生长特性研究 被引量：1

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作者 牟豪 余远迪 +1 位作者 许国洋 杨柳 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期799-803,共5页

【目的】明确山羊痘病毒(GTPV)AV41弱毒疫苗株在不同日龄山羊原代睾丸细胞中的增殖效率,为选择病毒或疫苗株的培养细胞提供数据支撑。【方法】通过传统方式对7日龄和60日龄山羊睾丸细胞分离培养,利用长时间动态细胞成像及数据分析系统比... 【目的】明确山羊痘病毒(GTPV)AV41弱毒疫苗株在不同日龄山羊原代睾丸细胞中的增殖效率,为选择病毒或疫苗株的培养细胞提供数据支撑。【方法】通过传统方式对7日龄和60日龄山羊睾丸细胞分离培养,利用长时间动态细胞成像及数据分析系统比较2个日龄细胞的生长效率;接种GTPV,观察2个日龄细胞在感染病毒后的形态特征;通过间接免疫荧光和荧光定量PCR比较GTPV的增殖效率。【结果】7日龄和60日龄山羊睾丸细胞的形态特征和生长速率无明显差异;接种GTPV后,2个日龄的原代山羊睾丸细胞均能产生细胞病变,但是出现细胞病变的时间以及病变特征存在差别。间接免疫荧光和荧光定量PCR结果表明:GPTV在60日龄山羊睾丸细胞中的增殖效率高于7日龄。【结论】GTPV在7日龄和60日龄山羊原代睾丸细胞中均能发生病毒增殖,且2种细胞均能发生明显的细胞病变,但60日龄细胞的增殖效率高于7日龄细胞。研究结果对采用山羊睾丸细胞培养GTPV弱毒株有一定的指导作用。 展开更多

关键词 山羊原代睾丸细胞 山羊痘病毒 细胞病变 增殖效率

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化脓隐秘杆菌动物模型的研究进展

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作者 黄艳爽 胡惠铭 +4 位作者 慕依林 沈克飞 徐登峰 王孝友 张素辉 《四川畜牧兽医》 2023年第12期28-30,34,共4页

化脓隐秘杆菌是一种重要的条件致病菌,可引起动物发生各类型皮肤、内脏器官和关节的非特异性化脓性感染。动物模型的构建对于揭示致病机制、筛选敏感药物及研制疫苗具有重要意义。本文总结国内外构建的化脓隐秘杆菌动物模型,包括小鼠、... 化脓隐秘杆菌是一种重要的条件致病菌,可引起动物发生各类型皮肤、内脏器官和关节的非特异性化脓性感染。动物模型的构建对于揭示致病机制、筛选敏感药物及研制疫苗具有重要意义。本文总结国内外构建的化脓隐秘杆菌动物模型,包括小鼠、大鼠、家兔、山羊、妊娠母猪、荷斯坦母牛等,对现有模型的应用及优缺点作了分析。 展开更多

关键词 化脓隐秘杆菌 动物模型 致病机制 药物筛选

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不同消毒药物对断奶羔羊舍空气中大肠杆菌的杀菌效果研究

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作者 许国洋 付利芝 +1 位作者 徐登峰 张素辉 《四川畜牧兽医》 2020年第12期27-29,共3页

本试验旨在研究不同消毒药物对断奶羔羊舍内空气中大肠杆菌含量的影响,以筛选最佳消毒药物。选取聚维酮碘、戊二醛、苯扎溴铵3种常用消毒药物,利用药敏纸片法测定不同药物对大肠杆菌的抑菌效果;同时,利用自然沉降法对消毒前后羊舍空气... 本试验旨在研究不同消毒药物对断奶羔羊舍内空气中大肠杆菌含量的影响,以筛选最佳消毒药物。选取聚维酮碘、戊二醛、苯扎溴铵3种常用消毒药物,利用药敏纸片法测定不同药物对大肠杆菌的抑菌效果;同时,利用自然沉降法对消毒前后羊舍空气中的大肠杆菌取样,通过菌落计数法统计消毒前后的大肠杆菌数量,分析不同药物的杀菌效果。试验结果显示:大肠杆菌对苯扎溴铵高度敏感,与聚维酮碘和戊二醛差异极显著(P<0.01);苯扎溴铵对大肠杆菌的杀菌效果极显著高于戊二醛组和对照组(P<0.01)。 展开更多

关键词 羊舍 大肠杆菌 杀菌效果 苯扎溴铵

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不同药物对山羊圈舍空气中微生物含量的影响

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作者 许国洋 付利芝 +4 位作者 徐登峰 周俊 向博 邓小龙 张素辉 《畜禽业》 2020年第12期6-8,共3页

目的旨在研究常用消毒药物对羊舍内空气中细菌总数、真菌总数和大肠杆菌总数的影响,分析不同药物的消毒效果。方法利用二氯异氰尿酸钠、戊二醛、百毒杀双链季铵盐、二氧化氯对不同圈舍进行消毒处理,采用自然沉降法检测羊舍消毒前后舍内... 目的旨在研究常用消毒药物对羊舍内空气中细菌总数、真菌总数和大肠杆菌总数的影响,分析不同药物的消毒效果。方法利用二氯异氰尿酸钠、戊二醛、百毒杀双链季铵盐、二氧化氯对不同圈舍进行消毒处理,采用自然沉降法检测羊舍消毒前后舍内空气中细菌总数、真菌总数和大肠杆菌总数的变化,分析消毒效果。结果戊二醛对舍内空气中大肠杆菌消毒效果较好,百毒杀双链季铵盐对真菌的消毒效果较好,且可以有效控制圈舍空气中细菌总数。 展开更多

关键词 不同药物 山羊 圈舍 微生物含量 消毒效果评价

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弗氏柠檬酸杆菌的鉴定及其药敏试验 被引量：1

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作者 许国洋 付文贵 +6 位作者 付利芝 闫志强 高广亮 邓娟 戴玉娇 庞丽霞 翟少钦 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期92-96,共5页

为进一步明确分离自仔猪腹泻肛拭子样本的弗氏柠檬酸杆菌病原特性、耐药情况及其对小鼠的致病性,试验通过5%兔鲜血TSA培养基培养、生化指标测定、敏感药物和耐药基因筛选对其进行鉴定,并用其腹腔注射攻毒小白鼠,分析其对小鼠的致病性。... 为进一步明确分离自仔猪腹泻肛拭子样本的弗氏柠檬酸杆菌病原特性、耐药情况及其对小鼠的致病性,试验通过5%兔鲜血TSA培养基培养、生化指标测定、敏感药物和耐药基因筛选对其进行鉴定,并用其腹腔注射攻毒小白鼠,分析其对小鼠的致病性。结果显示,分离到的弗氏柠檬酸杆菌在血平板上生长时导致溶血现象。生化试验中,硝酸盐还原、山梨醇和葡萄糖发酵等9个检测指标为阳性;且该菌对氧氟沙星、诺氧沙星、万古霉素、青霉素和链霉素耐药,并携带aacA-aphD、ileS和vanA3种耐药基因。该菌对小鼠的致死率为60%,剖检发现小鼠肝脏、肺脏、肠道、肾脏和脾脏组织发生不同程度病理变化,其中,小鼠肝脏和肺脏组织的出血症状最为明显;组织病理学观察发现,肝脏组织可见多量中央静脉淤血,肝窦内可见淤血;肺脏组织可见大量血管淤血,大面积肺泡壁间质淤血;肠绒毛黏膜上皮与固有层轻度分离。试验结果可为弗氏柠檬酸杆菌致病机理的进一步研究提供参考,也可为仔猪潜在细菌性疫病防治提供了数据支撑。 展开更多

关键词 猪 弗氏柠檬酸杆菌 分离鉴定 耐药基因 致病性

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鸡常见细菌性疾病及防治措施 被引量：1

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作者 郑华 闫志强 +1 位作者 许国洋 余远迪 《现代畜牧科技》 2024年第1期58-60,共3页

鸡是人类重要的食用禽类之一,其肉类和蛋类是人类的重要食品来源。由于鸡的生长环境和生活习性容易受到各种细菌的感染,导致鸡细菌性疾病是鸡养殖业中常见的疾病之一。该文通过对鸡常见细菌性疾病及其传播途径、药物和生物安全防治等方... 鸡是人类重要的食用禽类之一,其肉类和蛋类是人类的重要食品来源。由于鸡的生长环境和生活习性容易受到各种细菌的感染,导致鸡细菌性疾病是鸡养殖业中常见的疾病之一。该文通过对鸡常见细菌性疾病及其传播途径、药物和生物安全防治等方面进行综述,旨在喂养鸡业提供科学依据和参考,促进鸡养殖业的健康发展。 展开更多

关键词 鸡 细菌性疾病 传播途径 防治

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猪流行性腹泻病的流行特点及防控概述 被引量：3

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作者 李波 尹乐子 +3 位作者 余远迪 王瑶 王苗利 杨晓雪 《现代畜牧科技》 2024年第4期115-117,共3页

猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(PorcineEpidemicDiarrheaVirus,PEDV)引起的一种急性接触性肠道传染病。该病毒主要通过粪-口途径传播,猪感染后会引起严重的腹泻、呕吐和脱水,致死率极高,可达100... 猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(PorcineEpidemicDiarrheaVirus,PEDV)引起的一种急性接触性肠道传染病。该病毒主要通过粪-口途径传播,猪感染后会引起严重的腹泻、呕吐和脱水,致死率极高,可达100%。即使有仔猪能够侥幸存活,相比健康仔猪,幸存仔猪的日增重等生长性能远远达不到生猪养殖生产指标,只能淘汰处理,给养猪业造成了巨大的经济损失。自20世纪80年代初在欧洲首次发现以来,猪流行性腹泻已经成为全球猪业面临的重要问题之一。该文旨在综述猪流行性腹泻的病原特征、流行特征、致病机制、疫苗研发等方面进行综述,以期为养猪业提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 传播途径 感染机制 防控措施

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基于PLO基因的山羊化脓隐秘杆菌PCR检测方法的建立与应用 被引量：7

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作者 沈克飞 杨柳 +3 位作者 付利芝 徐登峰 许国洋 张素辉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期330-334,共5页

为建立特异的化脓隐秘杆菌PCR检测方法,基于化脓隐秘杆菌PLO基因设计4对引物,对12种细菌进行常规PCR扩增,以评价方法的特异性,并运用建立的PCR方法检测临床样本。结果显示只有使用F1/R1引物对的PCR方法能鉴别化脓隐秘杆菌,并能用于临床... 为建立特异的化脓隐秘杆菌PCR检测方法,基于化脓隐秘杆菌PLO基因设计4对引物,对12种细菌进行常规PCR扩增,以评价方法的特异性,并运用建立的PCR方法检测临床样本。结果显示只有使用F1/R1引物对的PCR方法能鉴别化脓隐秘杆菌,并能用于临床样本检测。 展开更多

关键词 化脓隐秘杆菌 PLO基因 PCR 特异性

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化脓隐秘杆菌候选抗原的免疫保护效果测试 被引量：5

15

作者 徐登峰 余远迪 +4 位作者 张素辉 付利芝 许国洋 赵扬扬 沈克飞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期347-353,共7页

为鉴定化脓隐秘杆菌的新抗原,对被抗血清识别的化脓隐秘杆菌膜蛋白进行质谱分析,采用免疫印迹分析抗原性,ELISA方法测试被免疫小鼠的抗体水平,通过化脓隐秘杆菌攻毒测试免疫保护率。结果显示,铁ABC(ATP结合盒,ATP binding cassette)转... 为鉴定化脓隐秘杆菌的新抗原,对被抗血清识别的化脓隐秘杆菌膜蛋白进行质谱分析,采用免疫印迹分析抗原性,ELISA方法测试被免疫小鼠的抗体水平,通过化脓隐秘杆菌攻毒测试免疫保护率。结果显示,铁ABC(ATP结合盒,ATP binding cassette)转运体的底物结合蛋白是化脓隐秘杆菌的1个新保护性抗原,具有良好的抗原性和免疫原性。 展开更多

关键词 化脓隐秘杆菌 抗原 抗原性 免疫原性 保护率

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化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白的提取及铁结合蛋白的黏附特性分析 被引量：2

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作者 沈克飞 许国洋 +3 位作者 付利芝 杨柳 牟豪 张素辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期241-249,共9页

肝素可剂量依赖性地抑制化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)黏附宿主细胞。本研究旨在认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其黏附特性,采用肝素琼脂糖凝胶从化脓隐秘杆菌裂解物中提取蛋白,运用蛋白质质谱和免疫印迹对所提取的蛋白质进行鉴... 肝素可剂量依赖性地抑制化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)黏附宿主细胞。本研究旨在认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其黏附特性,采用肝素琼脂糖凝胶从化脓隐秘杆菌裂解物中提取蛋白,运用蛋白质质谱和免疫印迹对所提取的蛋白质进行鉴定。采用免疫印迹检测所提取蛋白质与自然感染化脓隐秘杆菌山羊血清的反应原性。制备重组蛋白,对重组蛋白的的肝素结合活性及肝素、抗血清对肝素结合活性的抑制作用进行了分析,对重组蛋白细胞黏附活性和抗血清抑制化脓隐秘杆菌黏附宿主细胞活性进行了分析。结果表明,提取到包含铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)在内的多种ATP结合盒(ATP binding cassette)转运体的底物结合蛋白(substrate binding proteins)。在自然感染山羊血清中检测到抗IBP的IgG抗体,表明IBP在化脓隐秘杆菌感染过程中表达。SDS-PAGE结果显示,rIBP能结合肝素琼脂糖凝胶,生理浓度的NaCl能部分解离与肝素琼脂糖凝胶结合的rIBP。免疫印迹结果显示肝素能剂量依赖性地抑制rIBP结合肝素琼脂糖凝胶,表明rIBP特异性结合肝素。rIBP能黏附MDBK细胞。免疫印迹显示rIBP抗血清不能明显抑制rIBP结合肝素,但活菌计数结果显示能抑制化脓隐秘杆菌黏附MDBK细胞。本研究为深入认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其在化脓隐秘杆菌黏附宿主细胞过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 化脓隐秘杆菌 肝素结合蛋白 铁结合蛋白 黏附 肝素

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羊口疮病毒F1L蛋白对山羊痘病毒黏附BHK21细胞的影响 被引量：2

17

作者 杨柳 许国洋 +2 位作者 牟豪 白运川 余远迪 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期95-102,共8页

以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板,用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列,并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析;优化合成059基因编码序列,连接载体pET42a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱... 以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板,用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列,并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析;优化合成059基因编码序列,连接载体pET42a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌,采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白,并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度;将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层,分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育,利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0 h的细胞黏附GTPV的量,研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明:成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列,其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域,显示出肝素结合活性;该蛋白羧基端有2个跨膜区,不利于蛋白质的表达,但优化DNA序列构建的重组质粒菌,经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达;免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性;Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06 mg/mL;荧光定量PCR检测数据显示,不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同,表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用,能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 F1L蛋白 山羊痘病毒 BHK21细胞 黏附

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不同饲料添加剂对妊娠母羊和初生羔羊的影响 被引量：4

18

作者 许国洋 付利芝 +2 位作者 徐登峰 王孝友 张素辉 《安徽农业科学》 CAS 2019年第23期118-120,共3页

为研究微生态制剂、抗菌肽制剂及中药作为饲料添加剂对妊娠母羊及羔羊的影响,试验选用40只妊娠期母羊,随机分为福邦酵母组、态康利保组、扶正解毒散组和对照组4组,每组10只。分别在日粮中添加福邦酵母、态康利保、扶正解毒散,对照组不... 为研究微生态制剂、抗菌肽制剂及中药作为饲料添加剂对妊娠母羊及羔羊的影响,试验选用40只妊娠期母羊,随机分为福邦酵母组、态康利保组、扶正解毒散组和对照组4组,每组10只。分别在日粮中添加福邦酵母、态康利保、扶正解毒散,对照组不添加药物,连续饲喂30 d后,测定母羊平均产羔数及血清生化指标,同时统计羔羊出生30 d后的死亡率及平均日增重,分析不同添加剂对母羊生产性能及羔羊生长性能的影响。结果表明,各组母羊平均产羔数差异不显著(P>0.05);血清生化指标检测发现,福邦酵母组总蛋白(TP)含量高于对照组,且差异显著(P<0.05),而甘油三酯(TG)含量与对照组差异极显著(P<0.01);福邦酵母组葡萄糖(GLU)含量与态康利保组差异显著(P<0.05),与扶正解毒散组和对照组差异极显著(P<0.01);对照组羔羊的死亡率最高,福邦酵母组最低,且福邦酵母组羔羊平均日增重最高,与对照组差异显著(P<0.05)。综上所述,福邦酵母可以有效改善母羊的生产性能和羔羊的生长水平。 展开更多

关键词 妊娠母羊 添加剂 羔羊 生长

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ORFV感染羔羊后的组织定位及其病毒载量分析 被引量：1

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作者 许国洋 高广亮 +5 位作者 余远迪 牟豪 付利芝 沈克飞 白运川 杨柳 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第10期2393-2397,共5页

【目的】研究山羊传染性脓疱病毒的组织定位及病毒载量情况。【方法】选取健康断奶羔羊,通过口唇部和尾根部划线的方法接种山羊传染性脓疱病毒液,正常饲喂,观察记录其发病情况,待出现典型临床症状时,放血处死,采集不同组织,进行羊传染... 【目的】研究山羊传染性脓疱病毒的组织定位及病毒载量情况。【方法】选取健康断奶羔羊,通过口唇部和尾根部划线的方法接种山羊传染性脓疱病毒液,正常饲喂,观察记录其发病情况,待出现典型临床症状时,放血处死,采集不同组织,进行羊传染性脓疱常规PCR检测,并对阳性组织进行免疫组织化学分析;同时,利用F1L基因片段与GAPDH内参基因建立相对荧光定量PCR检测方法,测定分析阳性组织的病毒载量;制备病毒载量较高的组织病毒悬液,分析其在OFTu中的增殖情况。【结果】断奶羔羊在攻毒后10 d出现典型疱疹症状;唇部、上颚、鼻甲骨、颈前淋巴结、肠系膜淋巴结和尾根部组织经过PCR鉴定后,均扩增出大小为1023 bp的目的条带;病毒载量结果表明,山羊传染性脓疱病毒在鼻甲骨中的含量最高,其更易在鼻甲骨细胞中增殖。【结论】首次明确了山羊传染性脓疱病毒可在在患病羔羊的多个组织中定殖,且其在鼻甲骨中含量最高,为山羊传染性脓疱疫苗候选毒株的分离纯化及其致病机制的深入研究提供数据支撑。 展开更多

关键词 山羊传染性脓疱 组织定位 病毒载量 免疫组化 相对荧光定量PCR

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135位点表达ORFVF1L基因的重组山羊痘病毒的构建 被引量：1

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作者 余远迪 牟豪 +3 位作者 张阳 郑华 李幸 付利芝 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第8期1808-1813,共6页

【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统,在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L,同时引入标记基因,从而构建重组山羊痘病毒,为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础,135基因编码区两侧500 bp左右的片... 【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统,在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L,同时引入标记基因,从而构建重组山羊痘病毒,为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础,135基因编码区两侧500 bp左右的片段作为上下重组同源臂,中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区及标记基因gpt、EGFP、痘病毒早晚期启动子p7.5、p11,并且含有loxp位点,构建同源重组供体质粒命名为pGTPV(135)-ORFV-F1L;并对阳性克隆菌液进行PCR鉴定并测序,经测序正确的菌液接种氨苄LB液体培养基培养过夜,提取去内毒素的质粒并进行双酶切鉴定。山羊痘病毒弱毒株感染永生化山羊睾丸细胞2 h后,重组质粒经脂质体法转染永生化山羊睾丸细胞,观察细胞病变及EGFP标记基因的表达情况;48 h后收获病毒液,反复冻融后离心,盲传3代,通过PCR鉴定目标基因的整合情况,以羊口疮病毒阳性血清为一抗,驴抗山羊IgG为二抗,通过蛋白免疫印迹分析目标基因的表达情况来对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经PCR筛选,成功获得表达羊口疮病毒F1L基因的同源重组供体质粒。经过测序并与目标序列进行比对,结果正确,表明重组质粒成功构建。重组质粒经去内毒素提取后测定浓度并进行双酶切鉴定,结果与预期相符,经鉴定的重组质粒转染山羊睾丸细胞,在48 h后观察到细胞病变及绿色荧光,PCR鉴定结果表明F1L基因整合到重组病毒上。蛋白免疫印迹分析显示,检测到目标蛋白条带,说明重组山羊痘病毒插入的外源基因F1L基因成功表达。【结论】本研究成功构建了一种在135基因位点表达羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒,并在永生化山羊睾丸细胞中,该重组病毒展现出目的基因的稳定表达。以羊痘病毒弱毒株135基因位点插入羊口疮病毒F1L外源基因,该重组病毒在永生化山羊睾丸细胞中获得,目的基因能稳定表达,成功构建135基因位点插入羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒方法。 展开更多

关键词 羊痘病毒 羊口疮病毒 F1L基因 重组病毒

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