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沉默PeroxiredoxinⅠ基因对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响 被引量:7
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作者 郭启帅 黄曦 李少林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1119-1123,共5页
目的探讨PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)沉默后对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及其作用机制。方法将稳定表达PrxⅠshRNA的pGPU6-PrxⅠ和阴性对照pGPU6-HK细胞接种于裸鼠皮下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型。实验共分为4组:pGPU6-HK组、pGPU6-... 目的探讨PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)沉默后对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及其作用机制。方法将稳定表达PrxⅠshRNA的pGPU6-PrxⅠ和阴性对照pGPU6-HK细胞接种于裸鼠皮下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型。实验共分为4组:pGPU6-HK组、pGPU6-PrxⅠ组、pGPU6-HK+照射(ionizing radiation,IR)组、pGPU6-PrxⅠ+IR组。用6MVX线照射裸鼠瘤组织,测量肿瘤体积,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;免疫组化检测肿瘤组织中PrxⅠ和Caspase3蛋白表达;电镜观察肿瘤细胞超微结构,Western blot测定肿瘤组织中γ-H2AX和Rad51蛋白表达。结果成功构建了裸鼠移植瘤模型,pGPU6-PrxⅠ+IR组裸鼠移植瘤生长肿瘤明显迟缓,体积较小,抑瘤率为79.76%,与pGPU6-PrxⅠ(34.92%)和pGPU6-HK+IR(56.94%)比较差异具有显著性(P<0.05);给予pGPU6-PrxⅠ及IR处理后,肿瘤细胞凋亡和坏死增多,PrxⅠ和Rad51蛋白表达减少,而Caspase3和γ-H2AX蛋白表达增加,以pGPU6-PrxⅠ+IR组更为显著,其Rad51蛋白下降了84.8%,γ-H2AX蛋白表达升高5.6倍(P<0.05)。结论沉默PrxⅠ表达可提高乳腺癌移植瘤的放射敏感性,其作用机制与DNA双链断裂增加、DNA损伤后修复能力降低有关。PrxⅠ可能是一个理想的乳腺癌放射增敏分子靶点。 展开更多
关键词 PEROXIREDOXIN 放射敏感性 DNA双链断裂 DNA损伤修复 乳腺癌
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阿苯达唑抑制P-糖蛋白表达对耐顺铂卵巢癌细胞耐药性的影响 被引量:4
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作者 何迎盈 刘娜娜 +1 位作者 罗治彬 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1762-1765,共4页
目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)通过抑制人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达对细胞耐药性的影响。方法在体外,用溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对SKOV-3/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率... 目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)通过抑制人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达对细胞耐药性的影响。方法在体外,用溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对SKOV-3/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率为0%、25%、50%、75%所对应的ABZ浓度,并按抑制率将实验分为对照组,25%抑制浓度(IC25)组、半数抑制浓度(IC50)组和75%抑制浓度(IC75)组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并按作用时间再将每组分为12、24、36 h亚组。分别用流式细胞仪检测各组细胞表面P-gp的表达。将不同浓度的顺铂(cisplatin,DDP)、表阿霉素(epirubicin,EPI)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)按照分组,联合和序贯ABZ处理细胞后,采用MTT比色法检测SKOV-3/DDP细胞体外增殖情况。结果 ABZ作用SKOV3/DDP细胞后使P-gp表达下降,呈浓度和时间依赖性。联合和序贯ABZ均能降低DDP、EPI和5-Fu对SKOV-3/DDP细胞的作用浓度,有浓度和时间依赖性,且联合作用优于序贯作用。结论在体外ABZ通过抑制SKOV-3/DDP细胞P-gp表达提高细胞对DDP、EPI、5-Fu的敏感性,并能逆转细胞的耐药性。 展开更多
关键词 阿苯达唑 P-糖蛋白 耐药性
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阿苯达唑对耐药卵巢癌细胞糖酵解的影响 被引量:2
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作者 何迎盈 刘娜娜 +1 位作者 罗治彬 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期1426-1429,共4页
目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)对人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞糖酵解的影响。方法通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,求得抑制率分别为0%、25%、50%、75%时所对应的ABZ的浓度,... 目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)对人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞糖酵解的影响。方法通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,求得抑制率分别为0%、25%、50%、75%时所对应的ABZ的浓度,实验分为对照组、IC25组、IC50组和IC75组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并且按照ABZ作用时间再将每组分为12、24、36 h亚组。按照分组,在设定的时间点,分别用比色法测定己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性,用酶标仪法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性,用RT-PCR法测定Akt mRNA和Myc mRNA的表达。结果经过不同浓度的ABZ处理SKOV-3/DDP细胞发现,ABZ能抑制SKOV-3/DDP细胞体外生长(P<0.05),呈剂量依赖性,抑制率为0%所对应的ABZ浓度为0μmol/L,抑制率25%的浓度(IC25)为(1.43±0.21)μmol/L,抑制率50%的浓度(IC50)为(8.64±0.74)μmol/L,抑制率75%的浓度(IC75)为(52.48±3.99)μmol/L。与对照组相比,经过ABZ处理的SKOV-3/DDP细胞的HK、PK、LDH活性明显降低(P<0.05),且Akt基因和Myc基因的表达下调(P<0.05)。结论 ABZ能够抑制SKOV-3/DDP细胞糖酵解酶活性,并能下调糖酵解相关基因的表达。 展开更多
关键词 耐药卵巢癌细胞 阿苯达唑 糖酵解
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沉默PeroxiredoxinⅠ基因增强乳腺癌细胞放射敏感性及其作用机制的实验研究 被引量:1
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作者 郭启帅 黄曦 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第16期1682-1686,共5页
目的采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ(peroxiredoxinⅠ,PrxⅠ)基因,观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制。方法将PrxⅠshRNA真核表达载体pGPU6-PrxⅠ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中,经G418稳定筛选后RT... 目的采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ(peroxiredoxinⅠ,PrxⅠ)基因,观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制。方法将PrxⅠshRNA真核表达载体pGPU6-PrxⅠ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中,经G418稳定筛选后RT-PCR和Western blot检测PrxⅠ表达变化。6 MV X线照射6 Gy后48 h,流式细胞术检测细胞的活性氧水平、细胞周期和细胞凋亡;MTT法测定细胞增殖能力;克隆形成实验观察克隆形成率,计算Do、N、Dq、SF2及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER)等放射生物学参数,Western blot法检测Rad51及γ-H2AX蛋白变化。结果获得2个稳定转染细胞株:pGPU6-HK和pGPU6-PrxⅠ。RT-PCR和Western bolt检测显示pGPU6-PrxⅠ组中PrxⅠmRNA和蛋白表达均明显抑制。6 Gy的X线照射48 h后,pGPU6-PrxⅠ及联合照射(ionizing radiation,IR)组细胞中的活性氧水平、G1期细胞和细胞凋亡明显增加,而细胞增殖能力和S期细胞明显降低,Western blot分析表明Rad51蛋白表达降低,而γ-H2AX蛋白表达升高(P<0.05),以pGPU6-PrxⅠ+IR组变化最显著,其Rad51蛋白表达下降了79.3%,而γ-H2AX蛋白表达升高了3.7倍。pGPU6-PrxⅠ组细胞的Do、N、Dq和SF2值分别为1.354、3.106、1.547和0.504,均低于pG-PU6-HK组,SF2时的SER为1.353。结论下调PrxⅠ基因表达可提高乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性,其作用机制与细胞内活性氧清除能力减弱、DNA双链断裂增加及DNA损伤后修复能力降低有关。PrxⅠ可能是1个理想的肿瘤放射增敏分子靶点。 展开更多
关键词 PeroxiredoxinⅠ 放射敏感性 活性氧 基因沉默
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4种肾素-血管紧张素系统调节剂对人白血病HEL细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 徐诣芝 汪云 +1 位作者 何代英 张亮 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期42-46,共5页
目的:探讨4种肾素-血管紧张素系统(RAS)调节剂氯沙坦、替米沙坦、阿利吉仑和血管紧张素-(1-7)(Ang-(1-7))对具有JAK2突变的人白血病HEL细胞增殖的影响。方法:用氯沙坦、替米沙坦、阿利吉仑和Ang-(1-7)分别处理HEL细胞12 d,用CCK-8法检... 目的:探讨4种肾素-血管紧张素系统(RAS)调节剂氯沙坦、替米沙坦、阿利吉仑和血管紧张素-(1-7)(Ang-(1-7))对具有JAK2突变的人白血病HEL细胞增殖的影响。方法:用氯沙坦、替米沙坦、阿利吉仑和Ang-(1-7)分别处理HEL细胞12 d,用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果:10^(-7) mol/L Ang-(1-7)可抑制HEL细胞增殖,将细胞阻滞在G_0/G_1期,诱导细胞晚期凋亡(P<0.001);10^(-5)mol/L氯沙坦及替米沙坦、10^(-4)mol/L阿利吉仑对HEL细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡均无明显影响(P>0.05)。结论:RAS抑制剂Ang-(1-7)能明显抑制HEL细胞增殖并促进其凋亡,有望成为治疗具有JAK2突变的真性红细胞增多症的潜在药物。 展开更多
关键词 肾素-血管紧张素系统 HEL细胞 血管紧张素-(1-7) 真性红细胞增多症
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