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出生后早期代谢型谷氨酸受体4在小鼠耳蜗毛细胞中的表达特征
1
作者
陈知己
刘雪莱
+5 位作者
周小清
佘雨婷
冯梦龙
邝韶景
方红雁
袁伟
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第11期1227-1234,共8页
目的探究代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠耳蜗基底膜的表达定位,及其从出生后至毛细胞突触成熟的表达变化。方法10只健康的3月龄C57BJ/6L野生型小鼠(5只雄鼠,5只雌鼠,体质量25~35 g)配对繁殖,分别...
目的探究代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠耳蜗基底膜的表达定位,及其从出生后至毛细胞突触成熟的表达变化。方法10只健康的3月龄C57BJ/6L野生型小鼠(5只雄鼠,5只雌鼠,体质量25~35 g)配对繁殖,分别选取出生后P1~P30不同日龄的小鼠,采用分频听觉脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测P12、P14、P16、P21、P30日龄小鼠在45.2、32.0、22.6、16.0、11.3、8.0、5.6和4.0 kHz的听反应阈,用免疫荧光标记联合激光共聚焦显微镜扫描耳蜗基底膜铺片。观察mGluR4与突触相关蛋白Ctbp2和Snap25的表达定位关系,以及统计随突触成熟发生的荧光斑数量变化。结果在小鼠ABR检测中发现,P12日龄小鼠在所有频率最大刺激声强度下均未能诱发出分化良好的波形,70%的P14日龄小鼠能够被至少1个频率的刺激声诱发出分化良好的Ⅰ波。在P14、P16、P21、P30日龄小鼠ABR测试中,50%的小鼠无法被45.2 kHz刺激声诱发出ABR波形,87.5%的小鼠无法被32.0 kHz刺激声诱发出ABR波形,其他频率的听反应阈随小鼠日龄增加逐步降低。在基底膜铺片免疫荧光染色检测中发现,mGluR4表达于出生后的小鼠耳蜗基底膜,其荧光强度在内毛细胞(inner hair cell,IHC)强于外毛细胞(outer hair cell,OHC)。在P11小鼠的IHC中即能够检测到清晰明显的mGluR4荧光斑点,其存在于细胞表达Snap25的突触囊泡胞吐活性区,但与突触蛋白Ctbp2无明显共标。在突触区mGluR4的荧光斑点信号统计中,P30小鼠荧光斑点数量多于P14小鼠(P<0.05)。结论在小鼠出生后早期,mGluR4在IHC突触区表达逐渐增加。随着突触功能成熟其可能参与囊泡胞吐调控,并可能通过自身药理特性抑制谷氨酸递质释放,影响突触可塑性。
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关键词
代谢型谷氨酸受体4
内毛细胞
耳蜗
突触
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职称材料
GenX通过System Xc^(-)-Gpx4-Fsp1铁死亡轴诱导耳蜗毛细胞损伤
2
作者
梁正薇
洪慧慧
袁伟
《陆军军医大学学报》
2025年第21期2652-2662,共11页
目的探讨铁死亡在2,3,3,3-四氟-2-(七氟丙氧基)丙酸铵[ammonium 2,3,3,3-tetrafluoro-2-(heptafluoropropoxy)-propanoate,GenX]暴露诱导耳蜗毛细胞损伤中的作用与机制。方法体外培养HEI-OC1细胞,分为对照组、GenX组、铁死亡抑制剂(ferr...
目的探讨铁死亡在2,3,3,3-四氟-2-(七氟丙氧基)丙酸铵[ammonium 2,3,3,3-tetrafluoro-2-(heptafluoropropoxy)-propanoate,GenX]暴露诱导耳蜗毛细胞损伤中的作用与机制。方法体外培养HEI-OC1细胞,分为对照组、GenX组、铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)组、GenX+Fer-1组,CCK-8检测GenX对耳蜗毛细胞的毒性作用,CCK-8检测GenX+Fer-1共处理后观察有无铁死亡的发生,Western blot和qRT-PCR检测铁死亡标志物、耳蜗分化功能指标、耳血迷路屏障标志物和听力相关铁死亡通路蛋白和基因的表达,使用FerroOrange、Bodipy(C11)、线粒体膜电位荧光探针(mitochondrial membrane potential assay kit,JC-1)和ATP探针分别检测Fe^(2+)蓄积、脂质过氧化水平、线粒体膜损伤和ATP情况。结果200μmol/L GenX暴露12 h后显著降低HEI-OC1细胞活力(P<0.01)。GenX暴露12 h后引起磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase,Gpx4)、溶质载体家族7成员11和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,Fsp1)蛋白表达下调(P<0.05),酰基辅酶A合成酶长链家族成员4蛋白表达上调(P<0.01),耳蜗毛细胞分化功能基因和耳血迷路屏障基因表达降低(P<0.05),同时伴随Fe^(2+)蓄积、脂质过氧化水平升高和线粒体膜损伤及降低ATP生成(P<0.001)。GenX+Fer-1组可显著恢复细胞活力(P<0.05),逆转铁死亡蛋白的表达(P<0.05),并改善部分耳蜗分化功能基因和耳血迷路屏障基因的表达(P<0.05)。同时GenX+Fer-1组可减少Fe^(2+)蓄积、降低脂质过氧化水平、抑制线粒体膜损伤和升高ATP水平(P<0.001)。结论GenX通过诱导铁代谢紊乱、脂质过氧化蓄积,并依赖System Xc^(-)-Gpx4-Fsp1铁死亡轴途径损伤耳蜗毛细胞的分化和屏障功能。
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关键词
铁死亡
2
3
3
3-四氟-2-(七氟丙氧基)丙酸铵
磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶
铁死亡抑制蛋白1
耳蜗毛细胞
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职称材料
题名
出生后早期代谢型谷氨酸受体4在小鼠耳蜗毛细胞中的表达特征
1
作者
陈知己
刘雪莱
周小清
佘雨婷
冯梦龙
邝韶景
方红雁
袁伟
机构
重庆市
人民医院
(
重庆大学
附属
人民医院
)
耳
鼻
咽喉
头颈
外科
出处
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第11期1227-1234,共8页
基金
国家耳鼻咽喉疾病临床医学研究中心开放课题(2024KF008)
重庆市自然科学基金博士后项目(CSTB2023NSCQ-BHX0196)
+1 种基金
重庆市科卫联合医学科研项目面上项目(2024MSXM101)
重庆市技术创新与应用发展重点专项项目(CSTB2023TIAD-KPX0059)。
文摘
目的探究代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠耳蜗基底膜的表达定位,及其从出生后至毛细胞突触成熟的表达变化。方法10只健康的3月龄C57BJ/6L野生型小鼠(5只雄鼠,5只雌鼠,体质量25~35 g)配对繁殖,分别选取出生后P1~P30不同日龄的小鼠,采用分频听觉脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测P12、P14、P16、P21、P30日龄小鼠在45.2、32.0、22.6、16.0、11.3、8.0、5.6和4.0 kHz的听反应阈,用免疫荧光标记联合激光共聚焦显微镜扫描耳蜗基底膜铺片。观察mGluR4与突触相关蛋白Ctbp2和Snap25的表达定位关系,以及统计随突触成熟发生的荧光斑数量变化。结果在小鼠ABR检测中发现,P12日龄小鼠在所有频率最大刺激声强度下均未能诱发出分化良好的波形,70%的P14日龄小鼠能够被至少1个频率的刺激声诱发出分化良好的Ⅰ波。在P14、P16、P21、P30日龄小鼠ABR测试中,50%的小鼠无法被45.2 kHz刺激声诱发出ABR波形,87.5%的小鼠无法被32.0 kHz刺激声诱发出ABR波形,其他频率的听反应阈随小鼠日龄增加逐步降低。在基底膜铺片免疫荧光染色检测中发现,mGluR4表达于出生后的小鼠耳蜗基底膜,其荧光强度在内毛细胞(inner hair cell,IHC)强于外毛细胞(outer hair cell,OHC)。在P11小鼠的IHC中即能够检测到清晰明显的mGluR4荧光斑点,其存在于细胞表达Snap25的突触囊泡胞吐活性区,但与突触蛋白Ctbp2无明显共标。在突触区mGluR4的荧光斑点信号统计中,P30小鼠荧光斑点数量多于P14小鼠(P<0.05)。结论在小鼠出生后早期,mGluR4在IHC突触区表达逐渐增加。随着突触功能成熟其可能参与囊泡胞吐调控,并可能通过自身药理特性抑制谷氨酸递质释放,影响突触可塑性。
关键词
代谢型谷氨酸受体4
内毛细胞
耳蜗
突触
Keywords
metabotropic glutamate receptor 4
inner hair cell
cochlea
synapse
分类号
R322.922 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R339.16 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
GenX通过System Xc^(-)-Gpx4-Fsp1铁死亡轴诱导耳蜗毛细胞损伤
2
作者
梁正薇
洪慧慧
袁伟
机构
西南医科
大学
附属
医院
耳
鼻
咽喉
头颈
外科
出处
《陆军军医大学学报》
2025年第21期2652-2662,共11页
基金
国家自然基金面上项目(81873702)
国家耳鼻咽喉疾病临床医学研究中心开放课题(2024KF008)
+1 种基金
重庆市科技局重点项目(CSTB2023TIAD-KPX0059)
重庆市卫健委重大课题(2022DBXM006)。
文摘
目的探讨铁死亡在2,3,3,3-四氟-2-(七氟丙氧基)丙酸铵[ammonium 2,3,3,3-tetrafluoro-2-(heptafluoropropoxy)-propanoate,GenX]暴露诱导耳蜗毛细胞损伤中的作用与机制。方法体外培养HEI-OC1细胞,分为对照组、GenX组、铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)组、GenX+Fer-1组,CCK-8检测GenX对耳蜗毛细胞的毒性作用,CCK-8检测GenX+Fer-1共处理后观察有无铁死亡的发生,Western blot和qRT-PCR检测铁死亡标志物、耳蜗分化功能指标、耳血迷路屏障标志物和听力相关铁死亡通路蛋白和基因的表达,使用FerroOrange、Bodipy(C11)、线粒体膜电位荧光探针(mitochondrial membrane potential assay kit,JC-1)和ATP探针分别检测Fe^(2+)蓄积、脂质过氧化水平、线粒体膜损伤和ATP情况。结果200μmol/L GenX暴露12 h后显著降低HEI-OC1细胞活力(P<0.01)。GenX暴露12 h后引起磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase,Gpx4)、溶质载体家族7成员11和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,Fsp1)蛋白表达下调(P<0.05),酰基辅酶A合成酶长链家族成员4蛋白表达上调(P<0.01),耳蜗毛细胞分化功能基因和耳血迷路屏障基因表达降低(P<0.05),同时伴随Fe^(2+)蓄积、脂质过氧化水平升高和线粒体膜损伤及降低ATP生成(P<0.001)。GenX+Fer-1组可显著恢复细胞活力(P<0.05),逆转铁死亡蛋白的表达(P<0.05),并改善部分耳蜗分化功能基因和耳血迷路屏障基因的表达(P<0.05)。同时GenX+Fer-1组可减少Fe^(2+)蓄积、降低脂质过氧化水平、抑制线粒体膜损伤和升高ATP水平(P<0.001)。结论GenX通过诱导铁代谢紊乱、脂质过氧化蓄积,并依赖System Xc^(-)-Gpx4-Fsp1铁死亡轴途径损伤耳蜗毛细胞的分化和屏障功能。
关键词
铁死亡
2
3
3
3-四氟-2-(七氟丙氧基)丙酸铵
磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶
铁死亡抑制蛋白1
耳蜗毛细胞
Keywords
ferroptosis
ammonium 2,3,3,3-tetrafluoro-2-(heptafluoropropoxy)-propanoate
phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase
ferroptosis suppressor protein 1
cochlear hair cells
分类号
R334.16 [医药卫生]
R363.21 [医药卫生—人体生理学]
R994.6 [医药卫生—基础医学]
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出生后早期代谢型谷氨酸受体4在小鼠耳蜗毛细胞中的表达特征
陈知己
刘雪莱
周小清
佘雨婷
冯梦龙
邝韶景
方红雁
袁伟
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025
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2
GenX通过System Xc^(-)-Gpx4-Fsp1铁死亡轴诱导耳蜗毛细胞损伤
梁正薇
洪慧慧
袁伟
《陆军军医大学学报》
2025
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