文摘目的:获取结合于不同亚型乳腺癌组织细胞的DNA适配子。方法:采用PCR法建立随机双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库获取单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)文库;以消减细胞-指数富集的配体进化系统(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术为基础,将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231交替作为靶标进行正筛选,以相同组织来源的乳腺上皮细胞MCF-10A进行负筛选,琼脂糖电泳法检测PCR扩增和适配子回收、温度梯度实验优化PCR条件、流式细胞术监测适配子与靶细胞的亲和力,采用常规分子生物学技术完成适配子的克隆和测序,通过序列分析初步筛选适配子;综合采用流式细胞术、激光共聚焦和免疫荧光染色等实验优选DNA适配子。结果:成功建立ssDNA文库,优化了SELEX筛选条件,通过20轮交叉串联的细胞-SELEX筛选获取了特异性结合乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的DNA适配子,随机挑选100个阳性克隆测序,鉴定出72个DNA适配子,采用Blastn程序进行精确比对未发现相似序列。通过序列分析初步筛选出适配子5个,经优选实验获取了可结合乳腺癌亚型组织细胞的适配子2个。结论:采用交叉串联的细胞-SELEX技术,可在较短时间获取结合不同临床乳腺癌亚型组织细胞的DNA适配子,为乳腺癌靶向递药系统的探索研究提供了可能。
