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缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞中钠氢交换体-1的表达及活性影响 被引量:3
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作者 莫显刚 陈庆伟 +2 位作者 王丽 李兴升 蒋金 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期489-492,共4页
目的探讨缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(rat myocardial microvascular endothelial cells,RMMEVCs)中缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)表达以及钠氢交换体-1(hydrogen exchanger-1,NHE1)的表达及活性的影响。方... 目的探讨缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(rat myocardial microvascular endothelial cells,RMMEVCs)中缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)表达以及钠氢交换体-1(hydrogen exchanger-1,NHE1)的表达及活性的影响。方法蛋白印迹检测缺氧培养的RMMVECs的HIF-1、NHE1蛋白水平表达,并用氯化钴模拟缺氧进行验证。进而BCECF/AM法检测细胞内pH值、酸负荷后pH回复率及对NHE1特异阻断剂DMA的反应。复氧0、24、48 h后检测缺氧影响作用的回复情况。结果缺氧导致RMMVECs中HIF-1、NHE1蛋白表达水平升高,氯化钴模拟缺氧证实NHE1表达亦升高。但缺氧致细胞内pH值下降[0 h(7.42±0.06);12 h(7.17±0.05);24 h(7.04±0.04);P<0.01],酸负荷后细胞内pH值回复率减小[(U/min)0 h(0.106±0.007);12 h(0.059±0.005);24 h(0.044±0.004);P<0.01];相对于DMA未处理组,不同缺氧时间点DMA处理组的酸负荷后pH回复率均降低[(U/min)0 h,-0.063;12 h,-0.028;24 h,-0.020]。复氧后NHE1蛋白水平逐渐下降,但复氧24 h酸负荷后细胞内pH值回复率最高(0.119 U/min),DMA抑制幅度最明显(-0.076 U/min),与0、48 h比较差异显著(P<0.01)。结论在缺氧中HIF-1升高可能导致NHE1蛋白表达升高,但NHE1活性降低,而复氧后NHE1活性升高。NHE1表达与活性改变可能是RMMVECs缺氧中pH调节的重要机制。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 钠氢交换体-1 缺氧诱导因子-1 缺氧
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NHE1 siRNA对VEGF诱导HUVECs细胞迁移与Matrigel小管形成的影响 被引量:1
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作者 莫显刚 陈庆伟 +1 位作者 李兴升 蒋金 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期68-70,共3页
目的:本文探讨用小干扰RNA(siRNA)抑制钠氢交换体-1(NHE1)能否抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的体外血管生成。方法:用阳离子脂质体方法将靶向抑制NHEl的小分子RNA(NHE1 siRNA)及阴性对照的寡核苷酸片段(NHE1 siNC)转染到人脐静脉内皮... 目的:本文探讨用小干扰RNA(siRNA)抑制钠氢交换体-1(NHE1)能否抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的体外血管生成。方法:用阳离子脂质体方法将靶向抑制NHEl的小分子RNA(NHE1 siRNA)及阴性对照的寡核苷酸片段(NHE1 siNC)转染到人脐静脉内皮细胞(HUVECs),荧光显微照相检测转染效率,RT-PCT及Western blot检测转染48h后mRNA的蛋白及NHE1的表达水平,BCECF/AM法检测细胞内pH(phi)反映NHEl活性,进而转染后检测细胞总数及死亡细胞数量改变,Transwell法检测VEGF诱导HUVECs迁移能力及Matrigel小管形成的影响。结果:转染效率在95%以上。转染48h,NHE1 siRNA转染组与NHE1 siNC转染组比较,在mRNA及蛋白水平表达分别减低90.82%与74.42%(P<0.05,P<0.01),细胞内pH值降低(7.224±0.231vs 7.405±0.163;P<0.05)。NHE1 siRNA组细胞总数较NHEl siNC组少,而细胞死亡比例增加。相对NHE1 siNC,NHE1 siRNA抑制细胞迁移为33.14%及抑制Matrigel小管形成达29.47%。结论:抑制NHEl表达和活性可能抑制VEGF诱导血管生成,NHE1可能是控制各种病理的血管生成的潜在靶点。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 钠氢交换体-1 小干扰RNA 血管内皮生长因子 血管生成
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