DDIT4介导的自噬在毛乳头细胞氧化应激损伤中的保护作用 被引量：2

1

作者 高媛媛 赵恒光 +1 位作者 杨桂红 雷霞 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第21期2397-2406,共10页

目的探索DNA损伤诱导转录因子4(DNA damage induced transcription factor 4,DDIT4)在毛乳头细胞氧化应激损伤中的保护作用及其机制。方法使用长波紫外线(ultraviolet radiation A,UVA)和过氧化氢(H 2 O 2)建立毛乳头细胞氧化应激模型;C... 目的探索DNA损伤诱导转录因子4(DNA damage induced transcription factor 4,DDIT4)在毛乳头细胞氧化应激损伤中的保护作用及其机制。方法使用长波紫外线(ultraviolet radiation A,UVA)和过氧化氢(H 2 O 2)建立毛乳头细胞氧化应激模型;CCK-8检测不同处理条件下的细胞活力,利用2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)试剂检测细胞内活性氧(ROS)的变化;电镜观察自噬小体;Western blot观察DDIT4及自噬相关指标微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、泛素结合蛋白(ubiquitin-binding protein P62,P62)、雷帕霉素哺乳动物靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR的表达情况。结果UVA和H 2 O 2导致毛乳头细胞内ROS升高,活力下降(P<0.05);氧化应激环境下毛乳头细胞内的DDIT4表达增加(P<0.05),而抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)可有效抑制此效应(P<0.05);UVA或H 2 O 2处理后毛乳头细胞内自噬水平升高,表现为自噬体数量增多,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高(P<0.05),P62表达下降(P<0.05),3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)阻断自噬可观察到细胞活力进一步降低(P<0.05),细胞内ROS增多(P<0.05),反之,雷帕霉素(rapamycin,RAPA)可增加自噬水平提升氧化条件下毛乳头细胞活力,减少细胞内ROS生成(P<0.05);下调DDIT4表达可使氧化应激环境下毛乳头细胞自噬减弱,LC3Ⅱ/Ⅰ减少(P<0.05),p-mTOR/mTOR、P62增加(P<0.05),细胞活力下降(P<0.05),细胞内ROS增多(P<0.05)。结论DDIT4可能通过自噬缓解毛乳头细胞氧化应激损伤。 展开更多

关键词 DNA损伤诱导转录因子4 自噬 氧化应激 毛乳头细胞

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PI3K/AKT/mTOR信号通路介导黄芩苷抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖 被引量：16

2

作者 吴登艳 邓娅 +1 位作者 郝进 徐祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期60-67,共8页

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（... 黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（2．24×10^-2～2．24×10^2mmol／L）对体外培养的增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的抑制作用．发现浓度为2．24×10^0～2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理组明显抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖（P〈0．05）．转染后的荧光素酶报告基因活性检测、RT—PCR及Western印迹分析技术检测其mRNA水平及细胞的帽状依赖翻译的表达．2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理后，黄芩苷作用组的mRNA水平并无明显差异（P〉0．05）；增生性瘢痕成纤维细胞的帽状依赖结构的翻译明显被黄芩苷所抑制．采用Western印迹分析检测被黄芩苷干预的增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖相关的蛋白的表达；m^7GTP琼脂糖殊沉淀结合蛋白4E—BPl与elF4E的变化．发现增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、4EBPl、elF4E及其上游的AKT表达明显下调（P〈0．05），而PTEN表达明显上调．p-AKT（Ser473）、p-mTOR（Ser2448）、p．S6（Ser235／236）、p4EBPl（Thr37／46）、p-PTEN（T380／S382／383）磷酸化水平下降（P〈0．05）．在黄芩苷作用下的增生性成纤维细胞中的游离的4E。BPl明显减少（P〈0．05），而与eIF4E结合的4E．BPl明显增加（P〈0．05）黄芩苷诱导游离的4E—BP1与eIF4E结合，从而抑制帽状依赖蛋白翻译．以上结果说明，黄芩苷可通过抑制P13K／AKT／mTOR信号通路抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖． 展开更多

关键词 黄芩苷 人增生性瘢痕组织成纤维细胞 增殖 P13K AKT mTOR信号通路

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mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖 被引量：5

3

作者 吴登艳 宋娇 +4 位作者 董海良 邢伟 徐祥 黄宏 郝进 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期2399-2402,共4页

目的探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～100μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达。... 目的探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～100μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达。结果与对照组比较,浓度为1～100μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P<0.05)。用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P<0.05),4E-BP1表达明显上调。p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P<0.05)。结论黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖。 展开更多

关键词 黄芩苷 人结直肠癌HCT116细胞 增殖 MTOR信号通路

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雷公藤内酯醇通过p38MAPK信号通路诱导Hut102细胞凋亡 被引量：2

4

作者 谢会霞 郝进 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期2109-2111,共3页

目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤蕈样肉芽肿细胞株Hut102的凋亡及其机制。方法体外培养的Hut102细胞与12.5、25、50、100nmol/L雷公藤内酯醇共同孵育,分别在24、48、72h用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Anne... 目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤蕈样肉芽肿细胞株Hut102的凋亡及其机制。方法体外培养的Hut102细胞与12.5、25、50、100nmol/L雷公藤内酯醇共同孵育,分别在24、48、72h用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)、caspase-3蛋白的表达水平。结果不同浓度雷公藤内酯醇(12.5、25、50、100nmol/L)作用Hut102细胞24h后的增殖抑制率分别为8.67%、30.02%、52.54%、59.62%。AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测经25、50、100nmol/L雷公藤内酯醇处理24h后Hut102细胞凋亡率分别为9.19%、21.49%、26.34%,当50nmol/L雷公藤内酯醇组预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,Hut102细胞凋亡率下降为14.35%。不同浓度雷公藤内酯醇(50、100nmol/L)处理Hut102细胞后p38、caspase-3蛋白的表达被激活,同样50nmol/L雷公藤内酯醇组也预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预,结果p-p38的表达降低,caspase-3激活被抑制。结论雷公藤内酯醇可以抑制Hut102细胞的增殖,其作用机制可能是通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡。 展开更多

关键词 雷公藤内酯醇 蕈样肉芽肿 Hut102 P38MAPK 细胞凋亡

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C型淋巴瘤样丘疹病 被引量：2

5

作者 郝进 刘文 邓娅 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期99-101,共3页

报告1例C型淋巴瘤样丘疹病。患者男,52岁。躯干、手腕出现丘疹及溃疡2年,反复发作,并能自愈。皮损组织病理检查:真皮全层有结节或弥漫单一异形大细胞浸润,间有少量嗜酸性粒细胞。免疫组化染色结果显示肿瘤细胞CD3、CD4、CD5、CD45RO、C... 报告1例C型淋巴瘤样丘疹病。患者男,52岁。躯干、手腕出现丘疹及溃疡2年,反复发作,并能自愈。皮损组织病理检查:真皮全层有结节或弥漫单一异形大细胞浸润,间有少量嗜酸性粒细胞。免疫组化染色结果显示肿瘤细胞CD3、CD4、CD5、CD45RO、CD30阳性,CD19、CD79a、CD68、CD15阴性。根据患者临床表现、组织病理检查结果和免疫表型,诊断为C型淋巴瘤样丘疹病。 展开更多

关键词 淋巴瘤样丘疹病 C型

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雷公藤内酯醇通过介导热休克蛋白27的表达诱导Hut78细胞凋亡 被引量：1

6

作者 谢会霞 郝进 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期66-68,共3页

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤Se’zary综合征Hut78的凋亡及机制。方法:采用MTT法检测Hut78细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut78细胞的凋亡率,Westernblot检测Hut78细胞中小分子热... 目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤Se’zary综合征Hut78的凋亡及机制。方法:采用MTT法检测Hut78细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut78细胞的凋亡率,Westernblot检测Hut78细胞中小分子热休克蛋白27(HSP27)的表达。结果:雷公藤内酯醇可诱导Hut78细胞凋亡(P<0.01),雷公藤内酯醇干预组,HSP27的表达被抑制。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,雷公藤内酯醇诱导Hut78细胞凋亡率下降,HSP27的表达被抑制效应减弱。结论:雷公藤内酯醇可诱导Se’zary综合征细胞Hut78凋亡,该作用与抑制HSP27的表达密切有关,同时该作用可被p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制,提示p38MAPK信号通路也参与雷公藤内酯醇介导的Se’zary综合征细胞株Hut78中HSP27的表达。 展开更多

关键词 雷公藤内酯醇 Se’zary综合征 Hut78 热休克蛋白27 细胞凋亡

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雷公藤内酯醇协同地塞米松诱导蕈样肉芽肿hut-102细胞凋亡及其机制

7

作者 张波 郝进 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1010-1013,共4页

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TP)与地塞米松联合对蕈样肉芽肿(Mycosis fungoides,MF)hut-102细胞体外增殖、凋亡是否具有协同作用及其机制。方法:MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法检测糖皮质激素受体(Glu... 目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TP)与地塞米松联合对蕈样肉芽肿(Mycosis fungoides,MF)hut-102细胞体外增殖、凋亡是否具有协同作用及其机制。方法:MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法检测糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)和凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果:①不同浓度TP(6.25、12.5、25nmol/L)和地塞米松(10-7、10-6、10-5mol/L)对hut-102细胞均有增殖抑制作用,与时间、浓度相关;12.5nmol/LTP与不同浓度地塞米松联合,细胞抑制率随地塞米松浓度升高呈现协同作用。②TP和地塞米松均能诱导hut-102细胞凋亡,联合用药凋亡率明显高于单药,具有交互效应。③10-5mol/L地塞米松作用hut-102细胞后,GR表达降低(P<0.05),联合用药(12.5nmol/LTP+10-5mol/L地塞米松)GR表达上调、Caspase-3激活增强(P<0.05)。结论:TP联合地塞米松可明显抑制hut-102细胞增殖,增强诱导凋亡,具有协同效应,其作用机制可能与GR表达上调、Caspase-3激活增强有关。 展开更多

关键词 蕈样肉芽肿hut-102 雷公藤内酯醇 地塞米松 糖皮质激素受体 CASPASE-3 凋亡

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PPAR-γ配体罗格列酮对人黑素瘤细胞体外趋化功能的影响及相关机制

8

作者 牛李莉 郝进 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期212-215,共4页

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对人黑素瘤A375细胞株体外趋化功能的影响及机制。方法:体外培养人黑素瘤A375细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RGZ对A375细胞的增殖抑制率;RT-PCR、West... 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对人黑素瘤A375细胞株体外趋化功能的影响及机制。方法:体外培养人黑素瘤A375细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RGZ对A375细胞的增殖抑制率;RT-PCR、Western-blot分别检测RGZ对A375细胞的趋化因子受体CXCR4 mRNA及CXCR4蛋白表达的影响;用Boyden小室研究RGZ对A375细胞体外趋化功能的影响。结果:MTT法检测结果显示在24 h干预点,浓度为10、25μmol/L时,RGZ的细胞毒性作用不明显(P>0.05);且RT-PCR、Western-Blot检测结果分别显示,RGZ能下调CXCR4mRNA及CXCR4蛋白的表达(P<0.01)。趋化实验显示,随着RGZ浓度的升高,穿过Boyden小室膜的A375细胞数显著减少(P<0.01)。结论:PPAR-γ配体RGZ能抑制人黑素瘤细胞的趋化功能,其机制可能与下调肿瘤细胞的CXCR4基因表达有关。 展开更多

关键词 黑素瘤 PPARΓ配体 趋化作用

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槲皮素活化mTOR信号通路对L929成纤维细胞增殖的影响 被引量：4

9

作者 董海良 张颖 +5 位作者 黄谢梅 黄宏 郭韡 邢伟 郝进 徐祥 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期707-710,共4页

目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU对mTOR介导的蛋白质翻译... 目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU对mTOR介导的蛋白质翻译调控通路关键基因mTOR、P-4E-BP1(翻译起始因子4E的结合蛋白)的磷酸化,细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达及mTOR通路阻断实验。结果:MTT法检测结果显示在36 h干预点,浓度为1×10-4、1.5×10-42、×10-4、2.5×10-4 mol/L时,QU可明显促进L929细胞增殖(P<0.01);荧光素酶报告基因检测系统结果显示:在36 h干预点,2.5×10-4 mol/L QU与对照组相比,RLU(相对光单位)值明显增加(P<0.001);Western blot法检测结果显示,mTORc、yclin、D1和P-4E-BP1的表达明显增加。100ng/ml的雷帕霉素作用36 h后,与对照组相比,QU组P-4E-BP1、mTORc、yclin D1蛋白表达明显增加,雷帕霉素组明显减少,雷帕霉素+QU组蛋白表达明显增加,但较QU组有所减少。结论:QU可通过诱导mTOR信号通路活化,进而促进细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达,诱导L929细胞的增殖。 展开更多

关键词 槲皮素 L929成纤维细胞 MTOR信号通路 细胞增殖

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三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成骨分化的影响 被引量：2

10

作者 张维 谭燃景 +6 位作者 唐辉 邱伟明 杨桂红 温旭红 闫洪涛 杨亚东 伍津津 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1416-1421,共6页

目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment ... 目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment group,LFV组)和高流速处理组(high flow velocity treatment group,HFV组)与三维静态培养的对照组(control group)进行比较。第3、6天和9天对各实验组进行HE染色并计数细胞;全程每隔3天测1次培养基中葡萄糖的消耗量;第21天行茜素红染色观察各组诱导矿化情况,同时采用FQ-PCR定量测定ALP和BMP-2基因的表达。结果 3组细胞均增殖明显,第6、9天LFV组细胞增殖最多,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验周期内各组培养基的葡萄糖含量均呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义;第21天茜素红染色3组均呈阳性,矿化结节面积大小统计显示HFV组最大,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);ALP和BMP-2基因表达量分别为LFV组:(1.780±0.233)/(2.788±0.241);HFV组:(2.262±0.306)/(4.576±0.253);对照组:(1.147±0.215)/(0.354±0.063),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论流体剪切力能促进人真皮成纤维细胞的增殖和成骨分化,且流体剪切力较小时有利于细胞增殖,而较大时会在一定程度抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 人真皮成纤维细胞 灌注培养 流体剪切力 三维支架 成骨分化

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丙酸氯倍他索脂质体的药效和安全性评价 被引量：2

11

作者 谭敏 胡敢 王昆 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期463-465,共3页

目的:考察丙酸氯倍他索(Clobetasol propionate liposomes,CP)脂质体对豚鼠慢性湿疹模型的疗效,并进行安全性评价。方法:采用小剂量二硝基氯苯(Dinitrochlorobenzene)反复刺激豚鼠右耳建立豚鼠慢性皮炎湿疹模型;外用CP脂质体、CP乳膏、... 目的:考察丙酸氯倍他索(Clobetasol propionate liposomes,CP)脂质体对豚鼠慢性湿疹模型的疗效,并进行安全性评价。方法:采用小剂量二硝基氯苯(Dinitrochlorobenzene)反复刺激豚鼠右耳建立豚鼠慢性皮炎湿疹模型;外用CP脂质体、CP乳膏、空白脂质体和生理盐水,2次/d,连用14d,以真皮炎症细胞计数和两耳肿胀度差值为指标,反映CP脂质体对湿疹模型的疗效。豚鼠右侧腹分别给予CP脂质体和CP乳膏,1次/d,连续8周,计算并比较各组表皮细胞层数,评价其安全性。结果:脂质体能有效减少真皮内浸润的炎细胞数量和耳朵肿胀度。该制剂连续应用8周,不引起表皮细胞层数减少。结论:CP脂质体较传统CP乳膏疗效更好,安全性更高。 展开更多

关键词 丙酸氯倍他索 脂质体 慢性皮炎-湿疹

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碘化钾体外抗申克孢子丝菌能力的实验研究 被引量：1

12

作者 武彦何 郝进 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期91-92,共2页

目的:探讨KI治疗孢子丝菌病的机理。方法:通过CFU计数观察不同组抗菌能力的差异。用DCFH-DA标记被申克孢子丝菌刺激后的PMNs,激光共聚焦检测PMNs内ROS的水平。结果:单独的PMNs组的CFU计数明显少于单独的Lym组或MNC组(P<0.01),而同时... 目的:探讨KI治疗孢子丝菌病的机理。方法:通过CFU计数观察不同组抗菌能力的差异。用DCFH-DA标记被申克孢子丝菌刺激后的PMNs,激光共聚焦检测PMNs内ROS的水平。结果:单独的PMNs组的CFU计数明显少于单独的Lym组或MNC组(P<0.01),而同时含有PMNs和Lym的实验组的CFU又明显少于其他组,差异有显著性(P<0.01)。在有无Lym参与作用下,其PMNs内的ROS水平都无明显差异(P>0.05)。结论:KI可以通过活化Lym后表达某些细胞因子来促进PMNs杀菌,但其杀菌机制与ROS无关。 展开更多

关键词 申克孢子丝菌 碘化钾(KI) 活性氧(ROS) 菌落形成单位(CFU)

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