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携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定
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作者 朱冰 杨建茹 +5 位作者 江跃全 陈诗奉 付新平 张力平 汪天虎 程波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1471-1474,共4页
目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV... 目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1。方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒。重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法。Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达。结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml1,×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml。受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。 展开更多
关键词 I型单纯疱疹病毒 长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白 基因重组
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GALV致融性糖蛋白转导肺腺癌细胞的抗肿瘤实验研究
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作者 朱冰 杨建茹 +1 位作者 付新平 江跃全 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1737-1741,共5页
目的探讨特异性启动子控制下嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的抗肿瘤作用。方法将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-... 目的探讨特异性启动子控制下嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的抗肿瘤作用。方法将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-Ⅰ病毒,用来转染肺腺癌细胞(A549)和正常人胚胎成纤维细胞(HFL-ⅠGNHu5)及裸鼠皮下肺癌转移模型,观察其体外及体内抗肿瘤作用及细胞毒性作用。统计学方法采用t检验。结果成功包装重组HSV-Ⅰ病毒,BALB/c裸鼠皮下接种A549细胞2周后均有肿瘤生长,成瘤率为100%。重组单纯疱疹病毒能特异性转染A549细胞,治疗组及对照组细胞存活率分别为20%及70%,病毒对A549细胞有明显的杀灭作用且对裸鼠皮下肺癌转移灶抑制明显。结论GALV.fus基因对肺癌细胞有强效的抗肿瘤作用,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法。 展开更多
关键词 Ⅰ型嗜肿瘤单纯疱疹病毒 肺腺癌 长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白
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耐药表型P-gp,GST-π,及TOPOⅡ的表达与Ki67在肺癌中的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 彭乐 江跃全 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期384-387,共4页
目的:检测P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67在肺癌中的表达,探讨其在肺癌中的表达水平及其临床相关性。方法:用免疫组化方法检测52例术前未进行化疗的肺癌组织中P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67的表达。结果:P-gp,GST-π,TOPOП和Ki67在肺癌中的阳性... 目的:检测P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67在肺癌中的表达,探讨其在肺癌中的表达水平及其临床相关性。方法:用免疫组化方法检测52例术前未进行化疗的肺癌组织中P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67的表达。结果:P-gp,GST-π,TOPOП和Ki67在肺癌中的阳性表达率分别是73%,80.5%,62.5%,23.7%.P-gp,GST-π的表达与病理组织学分型,分化程度有显著相关性(P<0.05);TOPOП在腺癌中的表达明显低于其他类型的肺癌(P<0.05);P-gp,GST-π,TOPOП的共表达率明显高于其单一表达率(P<0.05);P-gp,GST-π,TOPOП的表达与Ki67之间无显著相关性。结论:P-gp,GST-π,TOPOП在不同类型的肺癌中均可表达,且表达水平不同,但它们均与肺癌的耐药相关,且呈共同表达,所以以上指标可以作为临床判断预后和指导化疗的综合指标。 展开更多
关键词 肺癌 多药耐药 免疫组化
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超声微泡介导尼卡地平对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响 被引量:1
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作者 钟原 江跃全 王志刚 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2007年第11期1589-1592,共4页
目的探讨超声破坏微泡介导尼卡地平对大鼠急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2,Bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分空白对照、假手术、缺血再灌注、尼卡地平、超声微泡、超声微泡介导尼卡地平六组。阻断左冠状动脉前降支40min... 目的探讨超声破坏微泡介导尼卡地平对大鼠急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2,Bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分空白对照、假手术、缺血再灌注、尼卡地平、超声微泡、超声微泡介导尼卡地平六组。阻断左冠状动脉前降支40min,再灌注120min,建立在体急性心肌缺血再灌注模型。TUNEL法检测凋亡心肌细胞,SABC免疫组化法检测Bcl-2、Bax基因表达。结果缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,尼卡地平可减少其发生,上调Bcl-2基因表达,下调Bax基因表达,超声微泡介导可进一步减少凋亡发生。结论尼卡地平可上调Bcl-2并下调Bax基因表达,升高Bcl-2/Bax比值,显著减少缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,通过超声微泡介导,可增强尼卡地平抗凋亡作用。 展开更多
关键词 凋亡 超声微泡 缺血再灌注 心肌细胞 钙通道阻滞剂
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