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题名肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价
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作者
胥文春
单幼兰
许颂宵
王虹
陈淑惠
尹一兵
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机构
重庆医科大学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室、重庆市重点实验室
重庆医科大学附属第二医院传染病实验室
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出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
2008年第12期1409-1413,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(30471838,30400376)
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文摘
目的:构建一个可高效报告基因表达的绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)报告质粒,为采用差异荧光诱导(Differential fluorescence induction,DFI)技术筛选肺炎链球菌(Streptoccus pneumoniae,S.pn)体内诱导的毒力基因奠定基础。方法:酶切质粒pGreenTIR的SD-ENH-GFP片段,将其插入含氯霉素抗性基因的自杀质粒pEVP3中,构建以绿色荧光蛋白为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP。再将肺炎链球菌的溶血素基因(Pneumolysin,ply)上游约500bp片段插入到该质粒报告基因上游的多克隆位点中,得到质粒pEVP3-SDGFP-Ply,将其转化入肺炎链球菌TIGR4中,比较新建质粒pEVP3-SDGFP与同样处理质粒pEGFP-1(报告基因gfp前无SD及ENH序列)报告上游基因表达的情况。结果:通过体内、外实验证实新建质粒pEVP3-SDGFP不但可以报告肺炎链球菌溶血素基因的表达,并且其报告上游基因表达的能力明显强于质粒pEGFP-1。结论:所构建的质粒pEVP3-SDGFP可用于DFI筛选肺炎链球菌体内诱导基因所需启动子诱捕文库的构建。
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关键词
肺炎链球菌
绿色荧光蛋白
报告质粒
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Keywords
Streptococcus pneumonia
Green fluorescence protein
Reporter plasmid
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分类号
R392.1
[医药卫生—免疫学]
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