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阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化
被引量：
3
1
作者
罗静
叶兴伟
+4 位作者
蒋文
周洪静
杨泽松
刘林
王利
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第15期1492-1495,共4页
目的探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制。方法将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c+62.5μmol/L ALA组。用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制...
目的探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制。方法将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c+62.5μmol/L ALA组。用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制率的影响,用Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst33258荧光染色观察阿糖胞苷对各组细胞凋亡的影响,并用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。运用二氢二氯荧光素(DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧水平的变化。结果 MTT结果提示,阿糖胞苷处理组细胞增殖抑制率高于阴性对照组,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪结果提示,不同浓度的阿糖胞苷作用MUTZ-8细胞后,凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪及荧光显微镜检测均显示,阿糖胞苷作用后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)明显上升。而加入抗氧化剂α-硫辛酸后细胞内ROS表达水平下降。结论阿糖胞苷明显抑制了人MDS细胞株MUTZ-8的生长并诱导其凋亡,可能与阿糖胞苷影响了细胞内ROS水平有关。
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关键词
细胞凋亡
阿糖胞苷
MUTZ-8
骨髓增生异常综合征
活性氧
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职称材料
SPARC基因RNAi慢病毒载体的构建及其在SKM-1细胞中的表达
被引量：
1
2
作者
罗静
叶兴伟
+5 位作者
蒋文
周洪静
肖青
杨泽松
刘林
王利
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期466-469,共4页
目的:构建SPARC基因RNAi慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞的转染效率及其对SPARC基因的抑制效率。方法:针对已经筛选确定的SPARC基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和Eco...
目的:构建SPARC基因RNAi慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞的转染效率及其对SPARC基因的抑制效率。方法:针对已经筛选确定的SPARC基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生GC-shSPARC慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用GC-shSPARC、pHelper1.0和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒GC-shSPARC转染SKM-1细胞,通过荧光显微镜检测转染后GFP表达情况,测定转染效率;RT-PCR和Western blot分别验证转染后SKM-1细胞SPARC mRNA及蛋白的表达。结果:经测序证实,构建出了SPARC shRNA的慢病毒载体GC-sh SPARC。包装、浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/mL。荧光显微镜下能直接观察到转染组细胞的GFP表达,转染效率为70%,RT-PCR、Western blot技术分别检测到GC-shSPARC慢病毒转染SKM-1细胞SPARC mRNA、SPARC蛋白表达水平较空白组明显降低(P<0.05)。结论:成功构建SPARC基因RNAi慢病毒载体,其能高效干扰SKM-1细胞SPARC基因的表达。
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关键词
SPARC
RNA干扰
慢病毒
SKM-1
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职称材料
题名
阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化
被引量：
3
1
作者
罗静
叶兴伟
蒋文
周洪静
杨泽松
刘林
王利
机构
重庆医科大学
附属
第一
医院
血液
科
重庆医科大学附属第一医院第一分院超声科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第15期1492-1495,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(30971277)
重庆市自然科学基金(2009JJ0424)~~
文摘
目的探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制。方法将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c+62.5μmol/L ALA组。用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制率的影响,用Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst33258荧光染色观察阿糖胞苷对各组细胞凋亡的影响,并用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。运用二氢二氯荧光素(DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧水平的变化。结果 MTT结果提示,阿糖胞苷处理组细胞增殖抑制率高于阴性对照组,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪结果提示,不同浓度的阿糖胞苷作用MUTZ-8细胞后,凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪及荧光显微镜检测均显示,阿糖胞苷作用后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)明显上升。而加入抗氧化剂α-硫辛酸后细胞内ROS表达水平下降。结论阿糖胞苷明显抑制了人MDS细胞株MUTZ-8的生长并诱导其凋亡,可能与阿糖胞苷影响了细胞内ROS水平有关。
关键词
细胞凋亡
阿糖胞苷
MUTZ-8
骨髓增生异常综合征
活性氧
Keywords
apoptosis
cytarabine
MUTZ-8 cells
myelodysplastic syndrome
reactive oxygen species
分类号
R73-361 [医药卫生—肿瘤]
R979.12 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
SPARC基因RNAi慢病毒载体的构建及其在SKM-1细胞中的表达
被引量：
1
2
作者
罗静
叶兴伟
蒋文
周洪静
肖青
杨泽松
刘林
王利
机构
重庆医科大学
附属
第一
医院
重庆医科大学
附属
第一
医院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期466-469,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(30971277)
重庆市自然科学基金(2009JJ0424)
教育部留学回国人员启动基金(2009年)
文摘
目的:构建SPARC基因RNAi慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞的转染效率及其对SPARC基因的抑制效率。方法:针对已经筛选确定的SPARC基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生GC-shSPARC慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用GC-shSPARC、pHelper1.0和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒GC-shSPARC转染SKM-1细胞,通过荧光显微镜检测转染后GFP表达情况,测定转染效率;RT-PCR和Western blot分别验证转染后SKM-1细胞SPARC mRNA及蛋白的表达。结果:经测序证实,构建出了SPARC shRNA的慢病毒载体GC-sh SPARC。包装、浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/mL。荧光显微镜下能直接观察到转染组细胞的GFP表达,转染效率为70%,RT-PCR、Western blot技术分别检测到GC-shSPARC慢病毒转染SKM-1细胞SPARC mRNA、SPARC蛋白表达水平较空白组明显降低(P<0.05)。结论:成功构建SPARC基因RNAi慢病毒载体,其能高效干扰SKM-1细胞SPARC基因的表达。
关键词
SPARC
RNA干扰
慢病毒
SKM-1
Keywords
SPARC
RNA interference
lentivirus
SKM-1
分类号
R511.3 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化
罗静
叶兴伟
蒋文
周洪静
杨泽松
刘林
王利
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
SPARC基因RNAi慢病毒载体的构建及其在SKM-1细胞中的表达
罗静
叶兴伟
蒋文
周洪静
肖青
杨泽松
刘林
王利
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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