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大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究 被引量:10
1
作者 蒲晓姝 果磊 +3 位作者 张敏珠 陈文海 王灿 汪燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期235-239,共5页
目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的... 目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征,MTT法绘制生长曲线,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物。用80 ng/ml aFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs分化,镜下观察细胞形态特征,免疫荧光染色方法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的表达。结果:大鼠BMSCs贴壁生长,呈梭形,多角形。第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形,活性无明显差异。细胞周期显示94.34%BMSCs处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性。诱导6 h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin表达阳性,继续诱导发现双极和多极细胞增多,诱导6 d后相互连接成网状,成典型的神经元样细胞,NSE表达阳性。结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的BMSCs,细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性。经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能,NSCs能进一步分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁培养法 诱导分化 神经干细胞 酸性成纤维细胞生长因子
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欧亚旋覆花总黄酮通过抗氧化作用降低衰老大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡 被引量:6
2
作者 龙媛媛 陈慧 +1 位作者 刘露 果磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期649-655,共7页
目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的改善效果及其机制。方法用D-半乳糖(D-galactose)诱导大鼠BMSC建立衰老细胞模型,采用(12.5、25、50)μg/m L IBFTF处理BMSC。CCK-8法检测细胞增殖,试剂盒测定过氧化... 目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的改善效果及其机制。方法用D-半乳糖(D-galactose)诱导大鼠BMSC建立衰老细胞模型,采用(12.5、25、50)μg/m L IBFTF处理BMSC。CCK-8法检测细胞增殖,试剂盒测定过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测BAX、Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平。结果衰老组细胞的增殖率、SOD和CAT活性较对照组明显降低,而不同剂量的IBFTF促进D-Gal诱导的衰老细胞的增殖、增加SOD和CAT活性。衰老组的凋亡细胞比例、ROS含量、MDA水平、BAX/Bcl-2比值和c-caspase-3的蛋白表达量增加,而用不同浓度IBFTF治疗可显著降低衰老大鼠BMSC的凋亡、ROS的生成、MDA水平、BAX/Bcl2比值和c-caspase-3的蛋白水平。结论 IBFTF通过增强抗氧化作用减少衰老大鼠BMSC的凋亡。 展开更多
关键词 欧亚旋覆花总黄酮 骨髓间充质干细胞 衰老 氧化应激 凋亡
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YQ400A/B增强型激光美容仪治疗面部色素性皮肤病的疗效观察 被引量:8
3
作者 匡永琴 沈为民 谭子明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期953-954,共2页
目的:观察YQ400A/B增强型激光美容仪对几种常见面部色素性皮肤病的临床疗效。方法:回顾性分析色素增加性皮肤病采用YQ400A/B增强型激光美容仪治疗效果,共治疗568例患者,其中追踪随访6月~2年479例。结果:本组479例患者经治疗后雀斑273例... 目的:观察YQ400A/B增强型激光美容仪对几种常见面部色素性皮肤病的临床疗效。方法:回顾性分析色素增加性皮肤病采用YQ400A/B增强型激光美容仪治疗效果,共治疗568例患者,其中追踪随访6月~2年479例。结果:本组479例患者经治疗后雀斑273例,总有效率达100%;咖啡斑23例,总有效率100%;老年斑51例,总有效率90.20%;黄褐斑67例,总有效率76.12%;太田痣65例,总有效率98.46%;所有患者无明显并发症产生。结论:YQ400A/B增强型激光美容仪在治疗面部色素性皮肤病方面疗效肯定,患者满意,是一种很好的治疗方法。 展开更多
关键词 激光 色素斑 皮肤病
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欧亚旋覆花总黄酮对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用 被引量:8
4
作者 陈慧 龙媛媛 果磊 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1010-1015,共6页
目的:探讨欧亚旋覆花总黄酮(Inula britannica flower total flavonoids,IBFTF)对D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法:随机将昆明小鼠分为6组(每组10只):空白对照组,模型组,维生素E(vitamin E,VE)组,欧亚旋覆花总黄酮... 目的:探讨欧亚旋覆花总黄酮(Inula britannica flower total flavonoids,IBFTF)对D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法:随机将昆明小鼠分为6组(每组10只):空白对照组,模型组,维生素E(vitamin E,VE)组,欧亚旋覆花总黄酮低、中、高剂量组。空白对照组给予颈背部皮下注射0.3 m L生理盐水,其余组均给予等体积500 mg/kg D-半乳糖,每日1次,连续8周。造模第3周,低、中、高剂量组分别灌服0.5 m L欧亚旋覆花总黄酮100、200和400 mg/kg,VE组灌服等体积维生素E 100 mg/kg,空白对照组和模型组灌服等体积生理盐水,每日1次,连续6周。检测小鼠体质量、胸腺指数和脾指数,同时测定血清中抗氧化酶活性如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)等衰老指标。β半乳糖苷酶染色试剂盒检测小鼠海马组织中衰老相关的β半乳糖苷酶含量。结果:低、中、高剂量组小鼠体质量明显高于模型组,差异具有统计学意义(P=0.053、P=0.001、P=0.000);低、中、高剂量组小鼠胸腺指数和脾指数明显高于模型组(均P=0.000);低、中、高剂量组小鼠血清中SOD、CAT和GSHPx活力明显高于模型组,其MDA含量低于模型组(均P=0.000);低、中、高剂量组小鼠海马组织β半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-gal)阳性率明显低于模型组,差异有统计学意义(P=0.001、P=0.000、P=0.000)。结论:欧亚旋覆花总黄酮是一种天然抗氧化剂,可延缓D-半乳糖诱导的模型小鼠的机体衰老。 展开更多
关键词 欧亚旋覆花 总黄酮 D-半乳糖 抗衰老
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腋臭微创刮除术并发症原因分析及预防与处理 被引量:19
5
作者 沈为民 但洋 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期118-119,共2页
目的:研究腋臭微创刮除术后常见并发症的原因,并提出预防与处理方法。方法:对284例568侧腋臭微创刮除术中59例75侧常见并发症进行回顾性分析,并对其发生并发症的原因、类型进行总结。结果:本组并发症发生率为13%,其中包括出血血肿、局... 目的:研究腋臭微创刮除术后常见并发症的原因,并提出预防与处理方法。方法:对284例568侧腋臭微创刮除术中59例75侧常见并发症进行回顾性分析,并对其发生并发症的原因、类型进行总结。结果:本组并发症发生率为13%,其中包括出血血肿、局部皮肤坏死、局部瘢痕形成、腋臭复发及神经损伤。结论:腋臭微创刮除术是一种新型的美容外科手术,医生手术的操作熟练与否直接关系到手术的成败,因此医生必须经过严格训练,方能减少并发症的发生,达到美容效果。 展开更多
关键词 腋臭 微创 并发症
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整合素α9在人脂肪源性间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化过程中的表达变化 被引量:3
6
作者 蒋娟 薛斌 李晶 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期674-678,共5页
目的:从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),诱导其向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)分化,同时探讨分化过程中整合素α9(integrinα9)表达的变化,旨在寻找淋巴水肿分... 目的:从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),诱导其向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)分化,同时探讨分化过程中整合素α9(integrinα9)表达的变化,旨在寻找淋巴水肿分子治疗靶点,为ADSCs应用于淋巴水肿的分子治疗奠定实验基础。方法:①从吸脂术后废弃的人体脂肪组织中分离培养出ADSCs,倒置相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征。②流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测第3代ADSCs表面特征性抗原CD90、CD29、CD34及CD45的表达;MTT法绘制生长曲线。③用人血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)C、人VEGF-A、血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导其向LECs方向分化,同时以人LECs作为阳性对照组。④Western blot检测各组细胞LECs表面特征性抗原淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)、血管内皮细胞特征性抗原CD34及integrinα9的表达。⑤FCM检测各组细胞周期,使用SPSS17.0对实验数据进行统计分析。结果:①ADSCs贴壁生长,呈长梭形,第1、3、5代ADSCs的生长曲线均呈S形;细胞表面抗原为CD90+、CD29+、CD34-、CD45-。②实验组及阳性对照组LYVE-1表达阳性、CD34表达均阴性,integrinα9的表达趋势与LYVE-1一致,且二者在实验组的表达水平低于阳性对照组;三者在阴性对照组中的表达均为阴性。③各组G0/G1期细胞比例有明显统计学差异(P<0.01),实验组与阳性对照组G0/G1期细胞比例显著小于阴性对照组(P<0.01),实验组与阳性对照组之间无明显统计学差异(P=0.083)。结论:ADSCs离体培养,具有向LECs分化的潜能。使用VEGF-C、VEGF-A、PDGF-BB可诱导部分人ADSCs向LECs分化。在人ADSCs向LECs分化过程中integrinα9的表达增强,分化前后细胞的周期发生了改变。该分子在LECs的形成过程中可能发挥着极为重要的作用,将有望在淋巴水肿的再生治疗中成为重要的分子靶点之一。 展开更多
关键词 脂肪源性间充质干细胞 淋巴管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子C 淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1 整合素α9
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自体皮片游离植皮术在难愈性创面治疗中的疗效观察 被引量:3
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作者 肖亮 贺光照 +2 位作者 李晶 王灿 任玉涵 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期90-93,共4页
目的:观察自体皮片游离植皮术在难愈性创面中的应用效果和价值。方法:选择难愈性创面患者352例,经创面处理,基础病治疗,全身支持治疗,创面肉芽新鲜后,视创面部位行自体表层皮片联合中厚皮片游离植皮术,用烧伤敷料加压包扎。结果:352... 目的:观察自体皮片游离植皮术在难愈性创面中的应用效果和价值。方法:选择难愈性创面患者352例,经创面处理,基础病治疗,全身支持治疗,创面肉芽新鲜后,视创面部位行自体表层皮片联合中厚皮片游离植皮术,用烧伤敷料加压包扎。结果:352例患者,322例行一期清创植皮,30例行一期清创、二期植皮,其中340例植皮后超过90%皮片存活,创面愈合或接近愈合后出院,12例植皮后有小于1/3~1/2皮片未成活,经换药或补植后,创面愈合出院,平均住院时间(16±2)d,术后平均愈合时间(19±3)d。结论:自体皮片游离植皮术有助于难愈性创面愈合或提高存活率。 展开更多
关键词 难愈性创面 自体皮片游离植皮术 回顾性分析
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SiRNA-Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad3对纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响 被引量:6
8
作者 刘波 果磊 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期522-526,共5页
目的:探讨SiRNA-Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblast,KFB)内Smad3基因后,对KFB细胞内纤维接蛋白及Ⅰ型胶原表达水平的影响。方法:分别用针对人Smad3 mRNA基因的特异性干扰片段和无关干扰片段转染体外原培养的人KFB,经RT-... 目的:探讨SiRNA-Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblast,KFB)内Smad3基因后,对KFB细胞内纤维接蛋白及Ⅰ型胶原表达水平的影响。方法:分别用针对人Smad3 mRNA基因的特异性干扰片段和无关干扰片段转染体外原培养的人KFB,经RT-PCR、Western blot、免疫组化、免疫荧光方法检测纤维连接蛋白(fibronectin)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,Col等KFB细胞外基质的合成和分泌情况。结果:75nmol/L Smad3-siRNA特异性干扰片段转染KFB48h后KFB细胞内ColⅠ及合成和分泌较非特异性对照组及空白对照组明显降低。结论:Smad3-siRNA可特异性抑制KFB细胞中Smad3基因表达,并效抑制体外培养的人原代KFB合成和分泌ColⅠ及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)。 展开更多
关键词 RNA干扰 SMAD3 瘢痕疙瘩 成纤维细胞
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非剥脱性Lux1540nm点阵激光在浅表瘢痕治疗中的护理 被引量:2
9
作者 向英 匡永琴 +2 位作者 邹静 刘先群 杜雪梅 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期68-69,共2页
目的:探讨非剥脱性lux1540点阵激光治疗浅表性瘢痕的护理。方法:对86例浅表性瘢痕患者进行lux1540点阵激光治疗,同时给予全方位护理(治疗前、后护理、治疗配合)等措施,探讨本护理方案对提高治疗效果,减少治疗后不良反应及并发症,提高患... 目的:探讨非剥脱性lux1540点阵激光治疗浅表性瘢痕的护理。方法:对86例浅表性瘢痕患者进行lux1540点阵激光治疗,同时给予全方位护理(治疗前、后护理、治疗配合)等措施,探讨本护理方案对提高治疗效果,减少治疗后不良反应及并发症,提高患者舒适度和满意度的重要性。结果:经过6次疗程的治疗和护理,86例患者瘢痕皮肤的外观、质地、色泽等有明显改善,色素沉着低。结论:非剥脱性lux1540nm激光治疗浅表性瘢痕无创、安全、疗效较好。实施全方位护理,可以提高治疗效率;减少治疗后不良反应及并发症;提高患者的舒适度和满意度。 展开更多
关键词 非剥脱性lux1540nm激光 浅表性瘢痕 护理
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5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响 被引量:3
10
作者 杨娥 张恒术 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期244-247,共4页
目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药... 目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞的周期及凋亡。结果:人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高(P=0.001),Smad7mRNA表达降低(P=0.001),细胞周期停滞于G0/G1期(P=0.035)及细胞凋亡(P=0.006)比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低(P=0.003),Smad7mRNA回升(P=0.000),FCM显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加(P=0.000)并且细胞凋亡率增加(P=0.047),而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化(P均>0.05)。结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 5-氮杂-2-脱氧胞苷 转化生长因子-Β1 SMAD7
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shRNA抑制Smad3基因的表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7表达的影响 被引量:1
11
作者 但洋 沈为民 果磊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1172-1176,共5页
目的构建抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFB Smad7表达的影响。方法用前期实验筛选出的1对最有效siRNA重组构建Smad3 shRNA表达质粒。通过脂质体介导的方法,将Smad... 目的构建抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFB Smad7表达的影响。方法用前期实验筛选出的1对最有效siRNA重组构建Smad3 shRNA表达质粒。通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、Smad7在不同时间点(0~9d)表达的变化。结果①RT-PCR和Western blot的结果证实Smad3 shRNA载体构建成功。②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72h作用最强。光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Smad7的mRNA与蛋白表达都明显升高(P<0.05)。结论体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFB Smad3的表达。Smad3可能对Smad7起反向调节的作用。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 SMAD3 SMAD7 RNA干扰 SHRNA
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电穿孔法转染原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的条件优化 被引量:1
12
作者 果磊 刘波 +1 位作者 魏东山 任国胜 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期92-93,共2页
目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP—N1质粒,... 目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP—N1质粒,选择不同的电压梯度、脉冲长度及DNA剂量,采用电转仪将pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,用荧光显微镜观察转染后不同时间pEGFP-N1瞬时表达情况及细胞存活情况,流式细胞仪检测其转染效率。结果:在电压为250v、脉冲数1、脉冲长度150μs、DNA质粒6μg时,电穿孔法将pEGFP-N1质粒导入瘢痕疙瘩成纤维细胞转染率最高,细胞存活率最高,转染后24h明显表达,48h后表达最强。结论:在适当的电压、脉冲长度下,选择适当的DNA用量,在转染后一定的时间范围内,电穿孔法转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少。电穿孔法是研究原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为较为理想的转染方法。 展开更多
关键词 电穿孔法 绿色荧光蛋白 转染 成纤维细胞
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增强型绿色荧光蛋白基因转染对原代培养的人成纤维细胞细胞周期的影响 被引量:1
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作者 果磊 刘波 +1 位作者 张恒术 任国胜 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期93-94,共2页
目的:观察转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因后对原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的变化,建立原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞的示踪方法。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,采用电转仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人瘢痕疙... 目的:观察转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因后对原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的变化,建立原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞的示踪方法。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,采用电转仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用荧光显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞仪检测其转染效率和细胞周期的变化。结果:增强型绿色荧光蛋白基因在转染24h后得到了明显表达,48h后流式细胞仪检测其表达率为32.6%,细胞周期无明显的变化,且未影响成纤维细胞的贴壁过程。结论:经pEGFP -N1质粒转染的原代培养的人癜痕疙瘩成纤维细胞仍能在体外存活,对成纤维细胞的生长没有明显的影响。pEGFP-N1是转染原代培养的人成纤维细胞较为理想的瞬时表达载体,是研究成纤维细胞生物学行为的良好示踪剂。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 转染 人成纤维细胞 细胞周期
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shRNA对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3及Ⅰ型胶原表达的影响 被引量:2
14
作者 但洋 沈为民 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期78-80,共3页
目的:构建抑制瘢痕成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFBSmad3及I型胶原(type I collagen,COL1A2)表达的影响。方法:用前期实验筛选出的1对最有效SiRNA重组构建Smad3shRNA表达质... 目的:构建抑制瘢痕成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFBSmad3及I型胶原(type I collagen,COL1A2)表达的影响。方法:用前期实验筛选出的1对最有效SiRNA重组构建Smad3shRNA表达质粒。通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、COLlA2在不同时间点(0d至9d)表达的变化。结果:①重组质粒经酶切鉴定和测序、RT-PCR和Western blot的结果均证实Smad3 shRNA载体构建成功。②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72h作用最强。光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。COLlA2的mRNA与蛋白表达都明显下降(P<0.05)。结论:体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFBSmad3的表达。并使其I型胶原mRNA和蛋白水平表达出现相同的变化,提示Smad3 shRNA可能是改善皮肤创面愈合和抑制瘢痕增生一个新的治疗方向。 展开更多
关键词 瘢痕成纤维细胞 SMAD3 Ⅰ型胶原 RNA干扰 SHRNA
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SPRY1基因与角质形成细胞衰老的相关性研究 被引量:1
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作者 赵娟 黎丹 +1 位作者 杨娥 张恒术 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期783-787,共5页
目的:探讨软脂酰化磷蛋白Sprouty1(SPRY1)基因在不同年龄段人体皮肤角质形成细胞和人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)衰老中的表达及意义。方法:收集不同年龄段正常皮肤标本120例,分为少年儿童组(<18岁)、青年组(18~44岁)、中年组(45... 目的:探讨软脂酰化磷蛋白Sprouty1(SPRY1)基因在不同年龄段人体皮肤角质形成细胞和人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)衰老中的表达及意义。方法:收集不同年龄段正常皮肤标本120例,分为少年儿童组(<18岁)、青年组(18~44岁)、中年组(45~59岁)、老年组(≥60岁),各30例。通过免疫组化、Real-time PCR、Western blot技术检测SPRY1在各年龄段皮肤角质形成细胞中的定位及表达差异。用200μmol/L H2O2处理HaCaT细胞构建细胞老化组模型。Real-time PCR技术和Western blot技术检测SPRY1在正常组和衰老组HaCaT细胞中的表达。结果:SPRY1的表达主要分布在皮肤角质形成细胞的棘层及颗粒层,呈细胞质分布;SPRY1 mRNA及蛋白在人皮肤角质形成细胞中的表达随着年龄段的增长呈逐渐增高的趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。HaCaT细胞经H2O2处理后发生了老化。SPRY1 m RNA及蛋白在老化后的HaCaT细胞中表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:SPRY1基因在人体衰老的皮肤角质形成细胞及老化HaCaT细胞中表达增加,提示SPRY1基因参与角质形成细胞衰老调控。 展开更多
关键词 SPRY1 皮肤角质形成细胞 HACAT细胞 衰老
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鱼腥草素钠对大鼠脊髓损伤神经元的影响 被引量:1
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作者 唐维 夏永智 +2 位作者 刘敬贤 刘露 晏怡 《上海交通大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2017年第12期1594-1600,共7页
目的·探究鱼腥草素钠(SH)对大鼠脊髓外伤(TSCI)早期神经元的影响及其机制。方法·随机将40只成年雌性大鼠分为假手术组(n=8)、对照组(n=8)和实验组(n=24)。假手术组仅打开椎板,但不做脊髓钳夹;其余2组均做脊髓钳夹。实验组于术... 目的·探究鱼腥草素钠(SH)对大鼠脊髓外伤(TSCI)早期神经元的影响及其机制。方法·随机将40只成年雌性大鼠分为假手术组(n=8)、对照组(n=8)和实验组(n=24)。假手术组仅打开椎板,但不做脊髓钳夹;其余2组均做脊髓钳夹。实验组于术后1 h用SH干预,根据剂量不同分为低[0.06 g/(kg·d)]、中[0.12 g/(kg·d)]、高[0.24 g/(kg·d)]剂量组,假手术组及对照组给予等量生理盐水,连续3 d灌胃给药。以大鼠BBB评分及尼氏染色作为标准,筛选SH的最佳治疗剂量。为探讨SH神经元保护的可能机制,随机将72只大鼠分为假手术组、对照组、SH最佳剂量组,各24只,术后干预同前;免疫荧光和免疫组织化学分别检测前角运动神经元及cleaved-caspase3阳性神经元,Western blotting检测Neu N、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3的表达。结果·术后5 d和7 d,SH低剂量组BBB评分均低于中、高剂量组(均P<0.01),但高于对照组(均P<0.01);中、高剂量组BBB评分无显著差异。术后7 d,低剂量组及对照组尼氏体较中、高剂量组崩解破裂增多,数量减少,着色淡;但中、高剂量组尼氏染色结果无差异。综合BBB评分及尼氏染色结果,判定本实验SH的最佳治疗剂量为0.12 g/(kg·d)。在最佳剂量干预下,术后3 d和7 d,前角运动神经元数量、Neu N及Bcl-2的表达量均多于对照组(均P<0.01);前角cleaved-caspase3阳性神经元数目、Bax及cleaved-caspase3的表达则相反(均P<0.01)。结论·SH对TSCI后神经元具有一定保护作用,其机制可能是上调Bcl-2/Bax的比值,减少神经元的凋亡。 展开更多
关键词 脊髓损伤 鱼腥草素钠 神经元 凋亡
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DNMT1在不同年龄组人群角质形成细胞中的表达及意义 被引量:1
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作者 刘朝东 桂万里 张恒术 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1055-1059,共5页
目的:检测不同年龄组非曝光部位表皮组织的角质形成细胞中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白和m RNA的表达水平,初步探讨DNMT1在人表皮年龄衰老过程中的意义。方法:收集40例手术患者非曝光部位的表皮标本,根据... 目的:检测不同年龄组非曝光部位表皮组织的角质形成细胞中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白和m RNA的表达水平,初步探讨DNMT1在人表皮年龄衰老过程中的意义。方法:收集40例手术患者非曝光部位的表皮标本,根据年龄分为4组:儿童组(0~14岁)、青年组(15~39岁)、中年组(40~59岁)和老年组(60岁及以上),用免疫组织化学、RTPCR及Western blot检测每例表皮组织中DNMT1蛋白和DNMT1 m RNA表达量,分析不同年龄组之间DNMT1表达水平的差异。结果:DNMT1主要表达于各组人表皮角质形成细胞的细胞核内,角质形成细胞DNMT1蛋白及m RNA表达依次在儿童组、青年组、中年组和老年组中呈下降趋势。儿童组、青年组、中年组和老年组角质形成细胞DNMT1阳性表达率分别为84.7%、69.4%、51.1%、12.3%,表达率得分分别为:23.10分、19.30分、14.40分和3.80分,采用LSD检验法对4组间进行两两比较,表明角质形成细胞DNMT1阳性表达率随年龄的增长呈递减趋势(均P〈0.05)。DNMT1 m RNA相对表达量为1.347、0.817、0.567和0.202,DNMT1蛋白的相对表达量为1.102、0.494、0.320和0.088,统计学分析DNMT1随着年龄的增长表达量降低(两两对比,均P〈0.05)。结论:随着年龄的增长,DNMT1的表达水平下降,推测人表皮衰老可能与DNMT1的表达下调有一定的关联。 展开更多
关键词 DNMT1 表皮衰老 角质形成细胞 甲基化
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糖基化终末产物对小鼠皮肤成纤维细胞衰老的影响 被引量:1
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作者 刘露 龙媛媛 +2 位作者 郭宗雨 唐维 果磊 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1540-1546,共7页
目的:建立糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞(NCTC clone 929,L929)衰老模型,并探讨其相关生物学变化机制。方法:实验选用L929细胞株为实验对象,随机分为5组:空白对照组(L929+完全培养基)、... 目的:建立糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞(NCTC clone 929,L929)衰老模型,并探讨其相关生物学变化机制。方法:实验选用L929细胞株为实验对象,随机分为5组:空白对照组(L929+完全培养基)、实验组A(L929+0.05 g/L AGEs)、实验组B(L929+0.1 g/L AGEs)、实验组C(L929+0.2 g/L AGEs)、阳性对照组(L929+10 g/L D-半乳糖)。通过CCK-8检测24、48、72 h各组细胞增殖情况;作用48 h后检测β-半乳糖苷酶染色、细胞周期分析及衰老相关蛋白p16、CyclinD1表达水平验证L929衰老模型成立;活性氧和超氧化物歧化酶(superoxide dismutate,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)检测细胞内氧化应激水平。结果:CCK-8提示AGEs可抑制细胞增殖,刺激48 h细胞活力明显下降。与空白对照组相比,AGEs呈浓度梯度性增高β-半乳糖苷酶活性(B:24±3.4,C:43±10.0,均P=0.000)和G1期阻滞率(A:69.90±2.13,B:74.74±1.49,C:79.29±3.38,均P=0.000),p16蛋白表达上调(B:0.53±0.20,C:0.63±0.11,P=0.001,P=0.000),CyclinD1蛋白表达下调(B:1.07±0.14,C:0.63±0.11,P=0.01,P=0.000),SOD及CAT活性降低(B:29.19±6.67,C:15.13±5.21,P=0.001,P=0.000;A:3.73±0.42,B:1.59±0.16,C:1.20±0.20,均P=0.000),MDA和活性氧水平增高(A:1.19±0.08,B:2.02±0.12,C:2.49±0.03,均P=0.000;A:1.49±0.04,B:1.81±0.34,C:1.92±0.04,P=0.006,P=0.000,P=0.000);与阳性对照组相比,实验组Aβ-半乳糖苷酶阳染细胞数和G1期细胞数降低[(12.0±3.6)vs.(45.0±8.2),P=0.004;(69.90±2.13)vs.(76.59±0.61),P=0.001],p16蛋白表达下调[(0.34±0.12)vs.(0.64±0.04),P=0.001],CyclinD1蛋白表达上调[(1.32±0.09)vs.(0.51±0.16),P=0.000],SOD及CAT活性增高[(39.53±4.24)vs.(27.09±6.25),P=0.018;(3.73±0.42)vs.(1.64±0.09),P=0.000],MDA和活性氧水平降低[(1.19±0.08)vs.(2.39±0.07),P=0.000;(1.47±0.04)vs.(1.84±0.09),P=0.020];上述实验结果提示实验组B、C与阳性对照组比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:0.1 g/L和0.2 g/L AGEs作用48 h均可建立L929体外衰老模型,这可能与细胞发生氧化应激及胞内衰老相关蛋白p16、CyclinD1表达改变有关。 展开更多
关键词 D-半乳糖 晚期糖基化终末产物 衰老 氧化应激
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He-Ne激光对愈合延迟创面修复的促进作用 被引量:3
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作者 果磊 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期84-84,共1页
目的 :观察He -Ne激光对整形手术愈合延迟创面的修复作用及可能发生的不良反应。方法 :选择整形术后创面愈合延迟患者 42例为受试对象 ,A组 ( 2 2例 )为治疗组 ,用He -Ne激光照射联合常规换药方法处理 ,B组 ( 2 0例 )为对照组 ,单纯采... 目的 :观察He -Ne激光对整形手术愈合延迟创面的修复作用及可能发生的不良反应。方法 :选择整形术后创面愈合延迟患者 42例为受试对象 ,A组 ( 2 2例 )为治疗组 ,用He -Ne激光照射联合常规换药方法处理 ,B组 ( 2 0例 )为对照组 ,单纯采用常规换药方法处理 (观察激光对坏死或感染创面有无促进愈合作用及是否可减少再手术植皮率 ,并观察其不良反应 )。结果 :A组患者创面 3周内愈合率为 86 .82 % ,B组患者创面 3周内愈合率为 5 5 % ;A组患者再手术植皮率明显低于B组。 (P <0 .0 5 )A组创面分泌物及创周炎明显轻于B组 ;两组患者创面均未发现明显不良反应。结论 :He -Ne激光可促进整形术后愈合延迟创面愈合 ,缩短愈合时间 ,减少再手术植皮率 。 展开更多
关键词 HE-NE激光 整形手术 愈合延迟创面 修复
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气压治疗在压疮病人中的应用 被引量:2
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作者 向英 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期187-189,共3页
目的:观察气压治疗对骶尾部压疮(Pressure ulcer,PU)治疗的疗效及安全性。方法:选择骶尾部PU患者66例,按随机分组的原则分为试验组(33例)和对照组(33例),对照组采用常规治疗,试验组采用常规治疗加气压治疗,动态观察PU评分及平均住院日... 目的:观察气压治疗对骶尾部压疮(Pressure ulcer,PU)治疗的疗效及安全性。方法:选择骶尾部PU患者66例,按随机分组的原则分为试验组(33例)和对照组(33例),对照组采用常规治疗,试验组采用常规治疗加气压治疗,动态观察PU评分及平均住院日。结果:试验组骶尾部PU,(Pressure ulcer scale for healing,PUSH)评分有效率为93.3%,创面愈合时间为(28.0±4.5)d。对照组PUSH评分有效率为57.5%,创面愈合时间为(46.0±7.6)d,2组比较试验组显著优于对照组(P<0.05)。2组均未发现明显不良反应。结论:气压治疗能促进PU患者创面的愈合,缩短平均住院日,且方便、舒适,无不良反应,适合各级医院临床应用。 展开更多
关键词 气压治疗 压疮 创面愈合
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