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HIF1α特异性人源喉癌噬菌体单链抗体的制备及其对放疗增敏的实验研究
1
作者
周寒静
刘静姝
+2 位作者
隆姝孜
唐翠萍
张涛
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第16期1625-1630,共6页
目的利用噬菌体肽库技术,构建HIF1α人源喉癌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),研究其对放疗敏感性的影响。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RTPCR和重叠延伸PCR扩增得到可变区基因scFv,将其重组到载体pCANTAB5E...
目的利用噬菌体肽库技术,构建HIF1α人源喉癌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),研究其对放疗敏感性的影响。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RTPCR和重叠延伸PCR扩增得到可变区基因scFv,将其重组到载体pCANTAB5E中,转化至TG1大肠杆菌,以制备初级抗体库。以HEP2细胞及HIF1α纯化抗原对抗体库进行淘选。SDS-PAGE电泳检测scFv的可溶性表达,Western blot检测其对HIF1α蛋白表达的影响,ELISA和细胞免疫化学鉴定其特异性,CCK-8检测scFv联合X线照射后HEP2细胞的存活率,克隆形成实验分析scFv处理后HEP2细胞放疗存活曲线。结果成功制备HIF1α人源喉癌单链抗体scFv,SDS-PAGE电泳证实其可溶性表达且相对分子质量约为34×10~3,Western blot表明其能下调HIF1α蛋白的表达。ELISA检测到该抗体对HIF1α抗原的识别率高达79%,细胞免疫化学显示该抗体与HEP2细胞特异性结合。CCK-8检测结果显示scFv联合X线照射后,较单纯X线照射组明显降低了HEP2细胞的存活率(P<0.05),克隆形成实验结果显示scFv对放射的增敏比为1.89。结论成功构建了HIF1α人源喉癌单链抗体,且其能增加HEP2细胞对放疗的敏感性。
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关键词
噬菌体单链抗体scFv
喉癌
HIF1Α
放疗增敏
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题名
HIF1α特异性人源喉癌噬菌体单链抗体的制备及其对放疗增敏的实验研究
1
作者
周寒静
刘静姝
隆姝孜
唐翠萍
张涛
机构
重庆医科大学
附属
第一
医院
肿瘤
科
重庆医科大学
附属
第一
医院
分子
肿瘤
及表观遗传学
重庆
市重点实验室
重庆医科大学附属第一医院放射医学与肿瘤研究室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第16期1625-1630,共6页
基金
重庆市卫生和计生委中医药科技项目(ZY20150245)
肿瘤科国家临床重点专科建设项目[国卫办医函(2013)544号]~~
文摘
目的利用噬菌体肽库技术,构建HIF1α人源喉癌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),研究其对放疗敏感性的影响。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RTPCR和重叠延伸PCR扩增得到可变区基因scFv,将其重组到载体pCANTAB5E中,转化至TG1大肠杆菌,以制备初级抗体库。以HEP2细胞及HIF1α纯化抗原对抗体库进行淘选。SDS-PAGE电泳检测scFv的可溶性表达,Western blot检测其对HIF1α蛋白表达的影响,ELISA和细胞免疫化学鉴定其特异性,CCK-8检测scFv联合X线照射后HEP2细胞的存活率,克隆形成实验分析scFv处理后HEP2细胞放疗存活曲线。结果成功制备HIF1α人源喉癌单链抗体scFv,SDS-PAGE电泳证实其可溶性表达且相对分子质量约为34×10~3,Western blot表明其能下调HIF1α蛋白的表达。ELISA检测到该抗体对HIF1α抗原的识别率高达79%,细胞免疫化学显示该抗体与HEP2细胞特异性结合。CCK-8检测结果显示scFv联合X线照射后,较单纯X线照射组明显降低了HEP2细胞的存活率(P<0.05),克隆形成实验结果显示scFv对放射的增敏比为1.89。结论成功构建了HIF1α人源喉癌单链抗体,且其能增加HEP2细胞对放疗的敏感性。
关键词
噬菌体单链抗体scFv
喉癌
HIF1Α
放疗增敏
Keywords
phage-displayed single-chain variable fragment antibody
laryngeal carcinoma
hypoxia-inducible factor 1 alpha
radiotherapy sensitization
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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1
HIF1α特异性人源喉癌噬菌体单链抗体的制备及其对放疗增敏的实验研究
周寒静
刘静姝
隆姝孜
唐翠萍
张涛
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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