目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesi...目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble sequence的表达启动子U6连同shRNA亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建pAdTrack-CMV-U6-HBxshRNA和对照pAdTrack-CMV-U6-Scramble sequence穿梭质粒;酶切及DNA测序鉴定后,经PmeⅠ线性化后转化入感受态AdEasier细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence,PacⅠ酶切后转染AD293细胞获得重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA和Ad-U6-Scramble sequence;扩增病毒,测定滴度;以RT-PCR和real-time PCR鉴定重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA对HBx的干扰效果。结果:酶切鉴定得到阳性pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence重组质粒;转染到AD293细胞并包装成功;RT-PCR以及real-time PCR表明,重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA携带的干扰片段能够明显干扰HBx表达(P=0.01)。结论:成功构建了HBx特异性shRNA重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA,它能抑制HepG2.2.15细胞中的HBx的表达,为研究HBx作为肝癌基因治疗作用的一个靶点以及机制奠定基础。展开更多
文摘目的:通过检测健康体检人群心-踝血管指数(cardio-ankle vascular index,CAVI),分析动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生的危险因素。方法:纳入2012年在重庆医科大学附属第一医院健康体检的重庆市某机关单位875人,测量其CAVI、身高、体质量、血压及空腹状态下的血脂和血糖等项目;根据CAVI结果分为AS组102人和非AS组701人,对不同组别的不同人群行单因素及多因素logistic回归分析。结果:AS组的年龄、男性比例、收缩压、舒张压和空腹血糖等高于非AS组(P<0.05);年龄、性别、体质指数(body mass index,BMI)、收缩压、甘油三酯是AS的独立危险因素,其中年龄对AS的影响作用最大(OR=4.375)。结论:AS的发生与多因素综合作用有关,应加强高危人群的定期体检,通过控制血压、血糖和血脂等危险因素,降低AS的发生率。