目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正...目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正常对照组(n=10),Flu隐睾组于妊娠12~21 d给予Flu 25 mg/(kg·d)皮下注射,正常对照组不予任何处理,取各组出生后第60天(postnatal day 60,PND60)的雄性SD大鼠睾丸组织(Flu隐睾组只取隐睾睾丸),HE染色观察睾丸组织形态学的差异,透射电镜观察睾丸支持细胞间的紧密连接结构,TUNEL凋亡染色检测生精细胞凋亡情况,取附睾尾进行精子计数及形态观测,免疫组织化学和Western blot检测睾丸组织中生殖细胞增殖分化指标视黄酸刺激因子8(stimulated by retinoic acid gene 8,Stra8)、联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,SCP3)的表达,采用Q-PCR检测Stra8基因水平。结果:收集正常对照组正常睾丸30只与Flu隐睾组隐睾睾丸22只,HE染色显示隐睾睾丸管腔明显缩窄、生精细胞发育迟缓且排列紊乱、管腔中央无精子形成;TUNEL凋亡检测证实隐睾组有大量生精细胞发生凋亡,精子计数结果为隐睾组(1.99±0.13)×108个/m L,远低于正常对照组[(5.53±0.17)×108个/m L,P=0.000];透射电镜(transmission electron microscope,TEM)可观察到SD大鼠隐睾支持细胞间的紧密连接结构疏松;免疫组织化学显示Stra8在隐睾组织中表达较正常对照组少,SCP 3在正常对照组睾丸生精小管的各级生精细胞胞核中均有表达,而在隐睾组睾丸中表达很弱;Western blot结果显示,Flu隐睾组Stra8蛋白表达量(0.34±0.05)明显低于正常对照组(0.96±0.09),P=0.002;Flu隐睾组SCP3蛋白表达量(0.39±0.03)也明显低于正常对照组(0.97±0.07),P=0.001。Q-PCR结果显示,Flu组SD大鼠睾丸组织内Stra8 m RNA的表达(0.765±0.015)较正常对照组(1.00±0.01)低,P=0.01。结论:Flu诱导的SD大鼠隐睾模型中,睾丸呈明显病理形态学改变,支持细胞间紧密连接结构破坏,Stra8及SCP3表达明显下调,生精细胞凋亡增多,精子数量及质量下降,这可能是导致生精细胞发育障碍的重要原因。展开更多
基金国家临床重点专科建设项目资金资助（国卫办医函【2013】544号）,2013年重庆高校创新团队建设计划资助项目（Suppoaed by Program for Innovation Team Buildingal Institutions of Higher Education in Chongqing,2013）.
文摘目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正常对照组(n=10),Flu隐睾组于妊娠12~21 d给予Flu 25 mg/(kg·d)皮下注射,正常对照组不予任何处理,取各组出生后第60天(postnatal day 60,PND60)的雄性SD大鼠睾丸组织(Flu隐睾组只取隐睾睾丸),HE染色观察睾丸组织形态学的差异,透射电镜观察睾丸支持细胞间的紧密连接结构,TUNEL凋亡染色检测生精细胞凋亡情况,取附睾尾进行精子计数及形态观测,免疫组织化学和Western blot检测睾丸组织中生殖细胞增殖分化指标视黄酸刺激因子8(stimulated by retinoic acid gene 8,Stra8)、联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,SCP3)的表达,采用Q-PCR检测Stra8基因水平。结果:收集正常对照组正常睾丸30只与Flu隐睾组隐睾睾丸22只,HE染色显示隐睾睾丸管腔明显缩窄、生精细胞发育迟缓且排列紊乱、管腔中央无精子形成;TUNEL凋亡检测证实隐睾组有大量生精细胞发生凋亡,精子计数结果为隐睾组(1.99±0.13)×108个/m L,远低于正常对照组[(5.53±0.17)×108个/m L,P=0.000];透射电镜(transmission electron microscope,TEM)可观察到SD大鼠隐睾支持细胞间的紧密连接结构疏松;免疫组织化学显示Stra8在隐睾组织中表达较正常对照组少,SCP 3在正常对照组睾丸生精小管的各级生精细胞胞核中均有表达,而在隐睾组睾丸中表达很弱;Western blot结果显示,Flu隐睾组Stra8蛋白表达量(0.34±0.05)明显低于正常对照组(0.96±0.09),P=0.002;Flu隐睾组SCP3蛋白表达量(0.39±0.03)也明显低于正常对照组(0.97±0.07),P=0.001。Q-PCR结果显示,Flu组SD大鼠睾丸组织内Stra8 m RNA的表达(0.765±0.015)较正常对照组(1.00±0.01)低,P=0.01。结论:Flu诱导的SD大鼠隐睾模型中,睾丸呈明显病理形态学改变,支持细胞间紧密连接结构破坏,Stra8及SCP3表达明显下调,生精细胞凋亡增多,精子数量及质量下降,这可能是导致生精细胞发育障碍的重要原因。
