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过表达SIRT4对骨肉瘤细胞恶性生物学行为及能量代谢的影响
1
作者
岳小涵
康权
+1 位作者
石雨鹭
罗庆
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期949-958,共10页
目的:探讨过表达SIRT4对人骨肉瘤细胞恶性生物学行为及对成骨分化的调控作用,以及过表达SIRT4对线粒体能量代谢的影响。方法:构建稳定过表达SIRT4的U2OS、MG63骨肉瘤细胞株,通过qRT-PCR和Western blot检测SIRT4的mRNA和蛋白表达水平;CC...
目的:探讨过表达SIRT4对人骨肉瘤细胞恶性生物学行为及对成骨分化的调控作用,以及过表达SIRT4对线粒体能量代谢的影响。方法:构建稳定过表达SIRT4的U2OS、MG63骨肉瘤细胞株,通过qRT-PCR和Western blot检测SIRT4的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8、克隆形成实验、EDU555染色法及检测细胞增殖;裸鼠胫骨成瘤实验检验成瘤能力;流式细胞术检测细胞周期;DAPI染色及Annexin V-APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红S染色分别检测细胞的早期和晚期成骨分化;葡萄糖检测试剂盒测定培养基及细胞内葡萄糖含量;乳酸检测试剂盒测定培养基及细胞内乳酸含量;三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)检测试剂盒检测细胞总ATP含量;四甲基罗丹明酯染色(tetramethylrhodamine ethylester perchlorate,TMRE)测定试剂检测线粒体膜电位。结果:过表达SIRT4组细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,裸鼠胫骨成瘤的瘤体体积减小,凋亡细胞增多;过表达SIRT4组细胞的G_(0)/G_(1)期占比明显增多,S期占比明显减少;过表达SIRT4组细胞ALP染色、茜素红S染色钙盐结节明显增多;过表达SIRT4组培养基中的葡萄糖较对照组消耗减少,细胞中的葡萄糖含量较对照组减少;过表达SIRT4组细胞中的乳酸含量较对照组减少,培养基中的乳酸较对照组产生减少;过表达SIRT4组细胞的总ATP较对照组更低;过表达SIRT4组的线粒体膜电位较对照组更低。结论:在U2O和MG63细胞中,过表达SIRT4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力,促进骨肉瘤细胞凋亡以及早晚期成骨分化,调节骨肉瘤细胞能量代谢。
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关键词
骨肉瘤
SIRT4
恶性生物学行为
成骨分化
能量代谢
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题名
过表达SIRT4对骨肉瘤细胞恶性生物学行为及能量代谢的影响
1
作者
岳小涵
康权
石雨鹭
罗庆
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所、国家儿童健康与疾病临床医学研究中心、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、重庆市干细胞治疗工程技术研究中心
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期949-958,共10页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81172545)
重庆市自然科学基金资助项目(编号:cstc2020jcyj-msxmX0113)。
文摘
目的:探讨过表达SIRT4对人骨肉瘤细胞恶性生物学行为及对成骨分化的调控作用,以及过表达SIRT4对线粒体能量代谢的影响。方法:构建稳定过表达SIRT4的U2OS、MG63骨肉瘤细胞株,通过qRT-PCR和Western blot检测SIRT4的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8、克隆形成实验、EDU555染色法及检测细胞增殖;裸鼠胫骨成瘤实验检验成瘤能力;流式细胞术检测细胞周期;DAPI染色及Annexin V-APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红S染色分别检测细胞的早期和晚期成骨分化;葡萄糖检测试剂盒测定培养基及细胞内葡萄糖含量;乳酸检测试剂盒测定培养基及细胞内乳酸含量;三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)检测试剂盒检测细胞总ATP含量;四甲基罗丹明酯染色(tetramethylrhodamine ethylester perchlorate,TMRE)测定试剂检测线粒体膜电位。结果:过表达SIRT4组细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,裸鼠胫骨成瘤的瘤体体积减小,凋亡细胞增多;过表达SIRT4组细胞的G_(0)/G_(1)期占比明显增多,S期占比明显减少;过表达SIRT4组细胞ALP染色、茜素红S染色钙盐结节明显增多;过表达SIRT4组培养基中的葡萄糖较对照组消耗减少,细胞中的葡萄糖含量较对照组减少;过表达SIRT4组细胞中的乳酸含量较对照组减少,培养基中的乳酸较对照组产生减少;过表达SIRT4组细胞的总ATP较对照组更低;过表达SIRT4组的线粒体膜电位较对照组更低。结论:在U2O和MG63细胞中,过表达SIRT4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力,促进骨肉瘤细胞凋亡以及早晚期成骨分化,调节骨肉瘤细胞能量代谢。
关键词
骨肉瘤
SIRT4
恶性生物学行为
成骨分化
能量代谢
Keywords
osteosarcoma
sirtuin 4
malignant biological behavior
osteogenic differentiation
energy metabolism
分类号
R114 [医药卫生—卫生毒理学]
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作者
出处
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1
过表达SIRT4对骨肉瘤细胞恶性生物学行为及能量代谢的影响
岳小涵
康权
石雨鹭
罗庆
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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