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人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达
被引量：
2
1
作者
刘嫒
董志
+3 位作者
肖晓秋
唐红
王乐乐
程玉洁
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期69-71,共3页
目的:构建含有人二型大麻素受体(CB2)基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法:首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1(+)-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP...
目的:构建含有人二型大麻素受体(CB2)基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法:首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1(+)-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP。将获得的pIRES2-EGFP-CB2重组子转染HEK293细胞,应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况,RT-PCR和报告基因检测CB2的表达情况。结果:酶切和测序结果验证真核表达载体pIRES2-EGFP-GB2构建成功。可在荧光显微镜下观察到转染HEK293细胞表达的绿色荧光;RT-PCR和双荧光素酶报告基因法检测证明CB2蛋白在真核细胞中成功表达;CB2受体激动剂JWH-015能显著逆转腺苷酸环化酶激动剂forskolin诱发的荧光素酶活性增加。结论:成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-CB2,为进一步研究CB2基因的生理学和病理生理学功能及调控机制奠定了实验基础。
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关键词
CB2受体
转染
报告基因
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职称材料
绿茶多酚对鱼藤酮致PC12细胞损伤保护作用的研究
2
作者
刘公安
董志
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期89-90,93,共3页
目的:建立鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型,观察绿茶多酚对细胞活性、凋亡指标及多巴胺(DA)含量的影响。方法:以高度分化的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理...
目的:建立鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型,观察绿茶多酚对细胞活性、凋亡指标及多巴胺(DA)含量的影响。方法:以高度分化的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理后,再分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,测定caspase-3活性和多巴胺的含量,并对结果进行统计学分析。结果:绿茶多酚预处理组(5、15、45μmol/L)和司来吉兰(50μmol/L)预处理组的细胞活力均显著高于鱼藤酮对照组(2.5μmol/L)。流式细胞仪检测结果显示,鱼藤酮对照组、绿茶多酚(51、5、45μmol/L)预处理组、司来吉兰(50μmol/L)预处理组、正常对照组的细胞凋亡率依次为(28.7±1.8)%;(15.8±1.2)%(、10.2±1.3)%、(3.2±0.6)%;(7.24±1.0)%和(1.2±0.3)%。与鱼藤酮对照组相比,绿茶多酚处理组也能降低细胞caspase-3活性。绿茶多酚预处理后,可以增加鱼藤酮诱导PC12细胞模型中的DA含量,但仍然低于正常对照组。结论:绿茶多酚能抑制鱼藤酮诱导的PCI2细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与抗凋亡蛋白,维持多巴胺含量有关。
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关键词
绿茶多酚
鱼藤酮
帕金森病
凋亡
PC12细胞
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职称材料
题名
人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达
被引量：
2
1
作者
刘嫒
董志
肖晓秋
唐红
王乐乐
程玉洁
机构
重庆医科大学
药学院
药理学
教研室
重庆医科大学
生命科学研究院
出处
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期69-71,共3页
基金
国家自然科学基金面上项目(81173066)
国家科技重大专项重大新药创制(2010ZX09401-306-1-1)
重庆市自然科学基金重点项目(CSTC2009BA5086)
文摘
目的:构建含有人二型大麻素受体(CB2)基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法:首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1(+)-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP。将获得的pIRES2-EGFP-CB2重组子转染HEK293细胞,应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况,RT-PCR和报告基因检测CB2的表达情况。结果:酶切和测序结果验证真核表达载体pIRES2-EGFP-GB2构建成功。可在荧光显微镜下观察到转染HEK293细胞表达的绿色荧光;RT-PCR和双荧光素酶报告基因法检测证明CB2蛋白在真核细胞中成功表达;CB2受体激动剂JWH-015能显著逆转腺苷酸环化酶激动剂forskolin诱发的荧光素酶活性增加。结论:成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-CB2,为进一步研究CB2基因的生理学和病理生理学功能及调控机制奠定了实验基础。
关键词
CB2受体
转染
报告基因
Keywords
CB2 receptor
transfection
reporter gene
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
R739.4 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
绿茶多酚对鱼藤酮致PC12细胞损伤保护作用的研究
2
作者
刘公安
董志
机构
重庆医科大学药学院药理学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室
出处
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期89-90,93,共3页
文摘
目的:建立鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型,观察绿茶多酚对细胞活性、凋亡指标及多巴胺(DA)含量的影响。方法:以高度分化的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理后,再分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,测定caspase-3活性和多巴胺的含量,并对结果进行统计学分析。结果:绿茶多酚预处理组(5、15、45μmol/L)和司来吉兰(50μmol/L)预处理组的细胞活力均显著高于鱼藤酮对照组(2.5μmol/L)。流式细胞仪检测结果显示,鱼藤酮对照组、绿茶多酚(51、5、45μmol/L)预处理组、司来吉兰(50μmol/L)预处理组、正常对照组的细胞凋亡率依次为(28.7±1.8)%;(15.8±1.2)%(、10.2±1.3)%、(3.2±0.6)%;(7.24±1.0)%和(1.2±0.3)%。与鱼藤酮对照组相比,绿茶多酚处理组也能降低细胞caspase-3活性。绿茶多酚预处理后,可以增加鱼藤酮诱导PC12细胞模型中的DA含量,但仍然低于正常对照组。结论:绿茶多酚能抑制鱼藤酮诱导的PCI2细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与抗凋亡蛋白,维持多巴胺含量有关。
关键词
绿茶多酚
鱼藤酮
帕金森病
凋亡
PC12细胞
Keywords
rotenone
apoptosis
PC12 cells
GTP （ Green tea polyphenol ）
Parkinsons disease （ PD ）
分类号
R965.1 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达
刘嫒
董志
肖晓秋
唐红
王乐乐
程玉洁
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
绿茶多酚对鱼藤酮致PC12细胞损伤保护作用的研究
刘公安
董志
《激光杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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