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MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析被引量：3: 1; 作者杨俊霞袁成福 +5 位作者石华魏丽丽陈济易发平马永平宋方洲《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期294-299,共6页; 目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定... 展开更多; 关键词 MCHR2 真核表达载体稳定转染基因表达信号转导; 在线阅读下载PDF 职称材料

Cyclin E基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定被引量：3: 2; 作者陈济潘巍巍 +4 位作者魏丽丽袁成福易发平卜友泉宋方洲《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期69-74,共6页; 根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色... 展开更多; 关键词 RNA干扰细胞周期蛋白E HELA细胞细胞周期; 在线阅读下载PDF 职称材料

稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立: 3; 作者张琴卜友泉 +3 位作者易发平袁成福秦琴宋方洲《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期258-262,F0002,共6页; 目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)/增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法:采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA... 展开更多; 关键词 MCHR2 真核表达载体稳定转染的SH-SY5Y细胞系基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡被引量：1: 4; 作者韩卿宋方洲 +4 位作者易发平卜友泉王治东李长燕杨晓明《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1460-1465,共6页; 目的:构建人JNK3基因重组腺病毒,检测其对人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响;以表柔比星作为凋亡诱导剂,检测其对细胞凋亡的影响。方法:以pDBLeu-JNK3质粒为模板PCR扩增人JNK3基因全长,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-JNK3,线性化后... 展开更多; 关键词 JNK丝裂原活化蛋白激酶类重组腺病毒表柔比星人成神经细胞瘤细胞凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析被引量：3: 1; 作者杨俊霞袁成福石华魏丽丽陈济易发平马永平宋方洲; 机构重庆医科大学药理学教研室重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室; 出处《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期294-299,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(No30671008) 重庆市科委自然科学基金资助项目(NoCSTC,2007BA5012); 文摘目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,经RT-PCR和Western blot鉴定后,通过测定细胞内cAMP、Ca2+浓度的改变分析MCHR2的信号转导通路。结果成功构建了pcDNA3·1-MCHR2真核表达载体并稳定转入CHO细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因,MCH作用于MCHR2后不影响细胞内cAMP生成,可促使细胞内钙库释放Ca2+,进而使胞内Ca2+浓度出现明显而短暂的升高,提示MCHR2的信号转导通路主要是与Gq蛋白偶联。结论人MCHR2的稳定表达和信号转导通路分析为进一步体外研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础。; 关键词 MCHR2 真核表达载体稳定转染基因表达信号转导; Keywords MCHR2 eukaryotic expression vector stable transfection gene expression signal transduction pathway; 分类号 R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R348.2 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Cyclin E基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定被引量：3: 2; 作者陈济潘巍巍魏丽丽袁成福易发平卜友泉宋方洲; 机构重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室; 出处《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期69-74,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(No:30371479); 文摘根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797^+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.; 关键词 RNA干扰细胞周期蛋白E HELA细胞细胞周期; Keywords RNA interference cyclin E HeLa cell cell cycle; 分类号 R737.33 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立: 3; 作者张琴卜友泉易发平袁成福秦琴宋方洲; 机构重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期258-262,F0002,共6页; 基金国家自然科学基金资助课题(30671008) 重庆市自然科学基金重点项目资助课题(CSTC2007BA5012) 国家外专局项目资助课题(20075000019); 文摘目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)/增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法:采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用LipofectamineTM转染到SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果:扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2;RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论:成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。; 关键词 MCHR2 真核表达载体稳定转染的SH-SY5Y细胞系基因表达; Keywords MCHR2 eukaryotic expression vector stably transfected SH-SY5Y cell line gene expression; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡被引量：1: 4; 作者韩卿宋方洲易发平卜友泉王治东李长燕杨晓明; 机构重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室军事医学科学院放射医学研究所; 出处《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1460-1465,共6页; 基金国家自然科学基金(30671008) 重庆市自然科学基金重点项目(CSTC2007BA5012) 国家外专局项目(20075000019)~~; 文摘目的:构建人JNK3基因重组腺病毒,检测其对人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响;以表柔比星作为凋亡诱导剂,检测其对细胞凋亡的影响。方法:以pDBLeu-JNK3质粒为模板PCR扩增人JNK3基因全长,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-JNK3,线性化后与骨架载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组,在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,经PCR方法鉴定后,用包装后的病毒上清感染人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞,Western印迹方法检测JNK3蛋白的表达;MTT实验检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测表柔比星诱导的细胞凋亡情况。结果:核酸测序和PCR鉴定表明成功构建Ad-JNK3,终点稀释试验测定扩增的腺病毒滴度为6.5×1010pfu/ml;Ad-JNK3在SH-SY5Y细胞中表达JNK3蛋白;MTT检测结果表明Ad-JNK3可抑制SH-SY5Y细胞生长,抑制率为28.08%;流式细胞术结果表明Ad-JNK3可明显促进表柔比星诱导的细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带。结论:重组腺病毒Ad-JNK3能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,促进表柔比星诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,为研究JNK3的作用机制及将其用于人成神经细胞瘤的基因治疗提供了条件。; 关键词 JNK丝裂原活化蛋白激酶类重组腺病毒表柔比星人成神经细胞瘤细胞凋亡; Keywords JNK mitogen-activated protein kinases recombinant adenovirus epirubicin human neuroblastoma apoptosis; 分类号 R739.4 [医药卫生—肿瘤] R73-36 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析	杨俊霞袁成福石华魏丽丽陈济易发平马永平宋方洲	《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	Cyclin E基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定	陈济潘巍巍魏丽丽袁成福易发平卜友泉宋方洲	《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立	张琴卜友泉易发平袁成福秦琴宋方洲	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡	韩卿宋方洲易发平卜友泉王治东李长燕杨晓明	《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料