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特异性靶向巨噬细胞表达PR39的重组腺病毒抗胞内菌感染能力检测
被引量：
1
1
作者
余雪梅
文阳安
+4 位作者
李朴
孔飞飞
陈光辉
邱欣欣
涂植光
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期993-996,共4页
目的检测巨噬细胞靶向表达PR39的重组腺病毒Ad-SP/PR39在抗胞内菌方面的作用。方法重组腺病毒Ad-SP/PR39经CsCl密度梯度离心纯化,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GPF的表达并检测重组腺病毒的滴度。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7、...
目的检测巨噬细胞靶向表达PR39的重组腺病毒Ad-SP/PR39在抗胞内菌方面的作用。方法重组腺病毒Ad-SP/PR39经CsCl密度梯度离心纯化,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GPF的表达并检测重组腺病毒的滴度。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7、人结肠癌细胞株Lovo、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株ZR-75-30和非洲绿猴肾细胞株COS-7后,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。将含Ad-SP/PR39的RAW264.7细胞裂解液作用于减毒结核分枝杆菌(BCG),检测其体外杀灭结核杆菌BCG的能力。另取RAW264.7细胞,吞噬BCG后,加入Ad-SP/PR39感染该细胞并检测细胞内活菌量,以观察其细胞内杀菌作用。结果经纯化后的重组腺病毒滴度可达5×1011efu/ml,能够有效感染小鼠巨噬细胞RAW264.7等多种细胞株。RT-PCR及免疫细胞化学技术检测各株细胞转录水平表达情况显示小鼠巨噬细胞RAW264.7能高效表达抗菌肽PR39,而其他细胞株几乎没有表达。与感染对照腺病毒Ad-C的RAW264.7细胞相比,转染Ad-SP/PR39的细胞显示出了更强的抗菌活性[BCG活菌数分别为(8.5±1.4)×106、(6.9±1.8)×106cfu/ml,P<0.05)],且能有效吞噬并杀灭胞内菌。结论本课题组构建的重组腺病毒能够靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因,发挥抗胞内菌作用,为抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用开辟了新思路。
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关键词
基因表达
腺病毒科
巨噬细胞
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职称材料
尿胰蛋白酶原-2电流型免疫生物传感器的研究
2
作者
郑军
马霄
刘成桂
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期382-385,共4页
目的:研制一种检测尿胰蛋白酶原-2(Urinary Trypsinogen-2,TSG-Ⅱ)的新型电流型免疫生物传感器。方法:将Nafion吸附到玻碳电极表面,并通过静电吸附和共价键合作用将硫堇和纳米金进行层层自组装,然后通过形成的纳米金单层吸附TSG-Ⅱ抗体...
目的:研制一种检测尿胰蛋白酶原-2(Urinary Trypsinogen-2,TSG-Ⅱ)的新型电流型免疫生物传感器。方法:将Nafion吸附到玻碳电极表面,并通过静电吸附和共价键合作用将硫堇和纳米金进行层层自组装,然后通过形成的纳米金单层吸附TSG-Ⅱ抗体,最后用辣根过氧化物酶封闭电极上的非特异吸附位点。结果:该免疫生物传感器对TSG-Ⅱ的响应特性良好,其线性检测范围为6.0～100μg/L;检出限为3.5μg/L。结论:该电流型免疫生物传感器具有灵敏度高、特异性好等优点,为建立一种检测TSG-Ⅱ新方法奠定了基础。
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关键词
尿胰蛋白酶原-2
免疫生物传感器
纳米金
硫堇
壳聚糖
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职称材料
题名
特异性靶向巨噬细胞表达PR39的重组腺病毒抗胞内菌感染能力检测
被引量：
1
1
作者
余雪梅
文阳安
李朴
孔飞飞
陈光辉
邱欣欣
涂植光
机构
重庆医科大学
医
学
检验
系
、临床
检验
诊断
学
教育部
重点
实验室
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期993-996,共4页
基金
国家自然科学基金(30600790)
文摘
目的检测巨噬细胞靶向表达PR39的重组腺病毒Ad-SP/PR39在抗胞内菌方面的作用。方法重组腺病毒Ad-SP/PR39经CsCl密度梯度离心纯化,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GPF的表达并检测重组腺病毒的滴度。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7、人结肠癌细胞株Lovo、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株ZR-75-30和非洲绿猴肾细胞株COS-7后,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。将含Ad-SP/PR39的RAW264.7细胞裂解液作用于减毒结核分枝杆菌(BCG),检测其体外杀灭结核杆菌BCG的能力。另取RAW264.7细胞,吞噬BCG后,加入Ad-SP/PR39感染该细胞并检测细胞内活菌量,以观察其细胞内杀菌作用。结果经纯化后的重组腺病毒滴度可达5×1011efu/ml,能够有效感染小鼠巨噬细胞RAW264.7等多种细胞株。RT-PCR及免疫细胞化学技术检测各株细胞转录水平表达情况显示小鼠巨噬细胞RAW264.7能高效表达抗菌肽PR39,而其他细胞株几乎没有表达。与感染对照腺病毒Ad-C的RAW264.7细胞相比,转染Ad-SP/PR39的细胞显示出了更强的抗菌活性[BCG活菌数分别为(8.5±1.4)×106、(6.9±1.8)×106cfu/ml,P<0.05)],且能有效吞噬并杀灭胞内菌。结论本课题组构建的重组腺病毒能够靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因,发挥抗胞内菌作用,为抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用开辟了新思路。
关键词
基因表达
腺病毒科
巨噬细胞
Keywords
agene expression
adenoviridae
macrophages
分类号
R373.33 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
尿胰蛋白酶原-2电流型免疫生物传感器的研究
2
作者
郑军
马霄
刘成桂
机构
重庆医科大学检验系、临床检验诊断学教育部重点实验室
四川省医
学
科
学
院附属医院
检验
科
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期382-385,共4页
基金
重庆市科技攻关项目(编号:CSTC2009AC5145)
文摘
目的:研制一种检测尿胰蛋白酶原-2(Urinary Trypsinogen-2,TSG-Ⅱ)的新型电流型免疫生物传感器。方法:将Nafion吸附到玻碳电极表面,并通过静电吸附和共价键合作用将硫堇和纳米金进行层层自组装,然后通过形成的纳米金单层吸附TSG-Ⅱ抗体,最后用辣根过氧化物酶封闭电极上的非特异吸附位点。结果:该免疫生物传感器对TSG-Ⅱ的响应特性良好,其线性检测范围为6.0～100μg/L;检出限为3.5μg/L。结论:该电流型免疫生物传感器具有灵敏度高、特异性好等优点,为建立一种检测TSG-Ⅱ新方法奠定了基础。
关键词
尿胰蛋白酶原-2
免疫生物传感器
纳米金
硫堇
壳聚糖
Keywords
TSG-Ⅱ
Immunosensor
Colloidal gold
Thionine
Chitosan
分类号
TP212 [自动化与计算机技术—检测技术与自动化装置]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
特异性靶向巨噬细胞表达PR39的重组腺病毒抗胞内菌感染能力检测
余雪梅
文阳安
李朴
孔飞飞
陈光辉
邱欣欣
涂植光
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
尿胰蛋白酶原-2电流型免疫生物传感器的研究
郑军
马霄
刘成桂
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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职称材料
已选择
0
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