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藏药桃儿七可促进慢性粒细胞白血病K562细胞的凋亡被引量：7: 1; 作者周芳竹王欣 +4 位作者代安亚黄峥兰李会黄宁姝冯文莉《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期226-231,共6页; 目的探讨藏药桃儿七对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响及相关机制。方法用不同浓度的桃儿七对K562细胞株进行不同时间梯度的处理,应用CCK8试验筛选桃儿七的最佳作用浓度及时间;流式细胞术检测细胞凋亡;瑞氏染色观察细胞形态学改变,D... 展开更多; 关键词藏药桃儿七慢性粒细胞白血病 BCR/ABL STAT5信号通路凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定被引量：2: 2; 作者朱小影陶崑 +5 位作者李身锋张利军李亚娟王东钟梁冯文莉(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1306-1311,共6页; 目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒... 展开更多; 关键词慢性粒细胞白血病重组免疫毒素克隆原核表达凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响被引量：1: 3; 作者王腾黄峥兰 +3 位作者高淼李会周芳竹冯文莉《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1477-1483,共7页; 目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后... 展开更多; 关键词 Bcr/Ab1 FABD 细胞定位来普霉素伊马替尼; 在线阅读下载PDF 职称材料

FABD结构域缺失削弱293T细胞BCR/ABL癌蛋白抗凋亡能力: 4; 作者周芳竹黄峥兰 +2 位作者骆贞红王腾冯文莉《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期1548-1553,共6页; 目的通过转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-BCR/ABL-ΔFABD于293T细胞中,探讨FABD结构域对Bcr/Abl癌蛋白抗凋亡能力的影响及相关机制。方法 293T细胞分别转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒,并设置Blan... 展开更多; 关键词 FABD结构域 BCR/ABL AKT、ERK信号通路凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名藏药桃儿七可促进慢性粒细胞白血病K562细胞的凋亡被引量：7: 1; 作者周芳竹王欣代安亚黄峥兰李会黄宁姝冯文莉; 机构重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室重庆医科大学附属第一医院血液科; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期226-231,共6页; 基金重庆市卫生和计生委中医药科技项目(ZY201402109); 文摘目的探讨藏药桃儿七对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响及相关机制。方法用不同浓度的桃儿七对K562细胞株进行不同时间梯度的处理,应用CCK8试验筛选桃儿七的最佳作用浓度及时间;流式细胞术检测细胞凋亡;瑞氏染色观察细胞形态学改变,DAPI染色观察细胞核形态变化;Western blotting分别检测凋亡相关蛋白PARP、caspase-3、Cleaved-caspase3的活化情况以及BCR/ABL、p-BCR/ABL、STAT5、p-STAT5蛋白表达变化。结果分别以1、2、3μg/m L浓度的桃儿七处理细胞12、24、36、48、72、96 h,K562细胞增殖呈浓度时间依赖性抑制,并筛选出2μg/m L,48 h为最佳处理方式。流式细胞术检测结果显示凋亡细胞数量呈时间依赖性增加,并在48 h凋亡最为显著;凋亡相关蛋白PARP、caspase-3以及Cleaved-caspase-3均呈时间依赖性活化。以2μg/m L桃儿七处理细胞48 h后,K562细胞形态发生不规则改变,出现核碎裂、溶解等凋亡特征;BCR/ABL、pBCR/ABL、STAT5、p-STAT5表达显著降低。结论藏药桃儿七能够促进慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡,其机制可能通过抑制BCR/ABL-STAT5信号通路并激活线粒体凋亡途径来实现。; 关键词藏药桃儿七慢性粒细胞白血病 BCR/ABL STAT5信号通路凋亡; Keywords Sinopodophyllum hexundrum chronic myeloid leukemia BCR/ABL STAT5 signal pathways cell apoptosis; 分类号 R29 [医药卫生—民族医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定被引量：2: 2; 作者朱小影陶崑李身锋张利军李亚娟王东钟梁冯文莉(指导); 机构重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1306-1311,共6页; 基金国家自然科学基金(No.30871102) 重庆医科大学优秀博士论文基金(2009年)资助项目; 文摘目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。; 关键词慢性粒细胞白血病重组免疫毒素克隆原核表达凋亡; Keywords Chronic myelogenous leukemia Recombinant immunotoxin Cloning Prokaryotic expression Apoptosis; 分类号 R733.72 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响被引量：1: 3; 作者王腾黄峥兰高淼李会周芳竹冯文莉; 机构重庆医科大学检验医学院、临床血液学教研室、临床检验诊断学教育部重点实验室; 出处《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1477-1483,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(编号:81572060) 重庆市基础与前沿研究计划资助项目(编号:cstc2014jcyj A10081); 文摘目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后克隆至穿梭质粒p Ad Track-CMV,经Ad Easy构建系统获得腺病毒Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和Ad-Bcr/Abl,并在HEK293细胞中进行包装。将细胞分为3组,Ad-GFP组、Ad-Bcr/Abl组以及Ad-Bcr/Abl-ΔFABD组,分别加入对应的腺病毒。Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的表达水平,间接免疫荧光法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的定位。流式细胞术、MTT法分别检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡、增殖的影响。结果:双酶切以及测序验证穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切验证重组腺病毒质粒重组成功;绿色荧光显示重组腺病毒包装成功;Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD可在293T细胞中表达;间接免疫荧光发现Bcr-Abl蛋白在细胞内的分布依赖于F-actin;FABD缺失后虽然不能使Bcr/Abl入核,但使其在细胞内的分布方式由均匀变为点状或块状聚集;FABD缺失后,Bcr/Abl在细胞内呈块状聚集的方式与IM处理后的结果相似。流式细胞术和MTT结果显示,与Bcr/Abl相比,Bcr/Abl-ΔFABD组293T细胞的凋亡比例增加(P<0.05),增殖能力降低(P<0.05)。结论:成功构建Ad-Bcr/Abl和Ad-Bcr/Abl-ΔFABD重组腺病毒,FABD缺失后使Bcr/Abl蛋白在细胞质中的分布方式发生改变,并能抑制Bcr/Abl的抗凋亡能力和促增殖能力。; 关键词 Bcr/Ab1 FABD 细胞定位来普霉素伊马替尼; Keywords Bcr/Abl FAB D cytoplasm localization LMB Ima-tinib; 分类号 R532.203 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名FABD结构域缺失削弱293T细胞BCR/ABL癌蛋白抗凋亡能力: 4; 作者周芳竹黄峥兰骆贞红王腾冯文莉; 机构重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期1548-1553,共6页; 基金国家自然科学基金面上项目(81572060) 重庆市研究生创新项目(CYS16136); 文摘目的通过转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-BCR/ABL-ΔFABD于293T细胞中,探讨FABD结构域对Bcr/Abl癌蛋白抗凋亡能力的影响及相关机制。方法 293T细胞分别转染野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒,并设置Blank组和Adtrack组作为对照,分别培养24、48、72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测转染荧光强度并筛选最佳转染条件,Western blot验证蛋白表达。采用WST-1(水溶性四唑盐)实验及FCM检测FABD结构域对BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;Western blot分别检测p-bcr/abl、p-AKT、p-ERK表达及凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP蛋白活化情况。结果 FCM检测结果显示质粒转染效率呈时间依赖性增加,并选择48 h为最佳转染时间。Western blot结果证实已经成功构建野生型p Ad-Bcr/Abl及缺失突变型p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD质粒。WST-1实验及FCM检测结果显示,FABD结构域缺失可显著抑制细胞增殖并促进凋亡,在处理48 h后细胞凋亡数达到29.0%(P<0.05);在FABD结构域缺失后,p-AKT、p-ERK表达显著下调;凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP均在48 h明显活化。结论 FABD结构域缺失可显著削弱BCR/ABL癌蛋白促增殖抗凋亡能力,其可能与下调AKT、ERK信号通路并激活线粒体凋亡途径有关。; 关键词 FABD结构域 BCR/ABL AKT、ERK信号通路凋亡; Keywords F-actin binding domain BCR/ABL AKT/ERK signal pathways apoptosis; 分类号 R394.3 [医药卫生—医学遗传学] R73-354 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	藏药桃儿七可促进慢性粒细胞白血病K562细胞的凋亡	周芳竹王欣代安亚黄峥兰李会黄宁姝冯文莉	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定	朱小影陶崑李身锋张利军李亚娟王东钟梁冯文莉(指导)	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响	王腾黄峥兰高淼李会周芳竹冯文莉	《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心	2017	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	FABD结构域缺失削弱293T细胞BCR/ABL癌蛋白抗凋亡能力	周芳竹黄峥兰骆贞红王腾冯文莉	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料