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抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定 被引量:8
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作者 张君 张娟 +4 位作者 唐霓 张秉强 陈维贤 黄爱龙 郑建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期374-376,共3页
目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。... 目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。 展开更多
关键词 O139群霍乱弧菌 单克隆抗体 生物学特性
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特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析 被引量:1
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作者 张娟 张君 +6 位作者 余晓林 吴倩 蒋飞龙 黄长武 李兴禄 黄爱龙 郑建 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第15期1444-1447,共4页
目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BAL... 目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖(LPS)的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗O1群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、O139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2a,1株IgG2b;腹水效价均达10-6;亲和常数达108以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。 展开更多
关键词 霍乱 O1群稻叶型霍乱弧菌 单克隆抗体 表位
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O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定
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作者 张娟 吴倩 +4 位作者 彭辉 何岸 陈维贤 黄爱龙 郑建 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期8-14,共7页
目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao... 目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库3轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果:3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论:筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。 展开更多
关键词 O1群小川型霍乱弧菌 单克隆抗体 噬菌体随机肽库 模拟肽
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细胞凋亡抑制因子6(Api6)在高脂肺损伤中的作用研究 被引量:2
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作者 龚雪 沈炼桔 +3 位作者 刘丹 叶秀峰 唐任宽 练雪梅 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期40-45,共6页
目的:了解单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响及细胞凋亡抑制因子6(Api6)的表达情况.方法:将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,分别饲以普通饮食和高脂饮食,14周后获得上述2组小鼠的肺部组织切片,进行油红O染色、HE染色和免疫组化实... 目的:了解单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响及细胞凋亡抑制因子6(Api6)的表达情况.方法:将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,分别饲以普通饮食和高脂饮食,14周后获得上述2组小鼠的肺部组织切片,进行油红O染色、HE染色和免疫组化实验,观察单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响;提取小鼠肺组织RNA,检测Api6在病变小鼠肺组织中的表达.结果:与普通饮食组小鼠肺组织相比,油红O染色可见高脂饮食组小鼠肺组织有明显的脂质沉积;HE染色和增殖期细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色可见高脂饮食组肺组织肺泡间隔增宽,肺组织炎性细胞浸润,同时增殖期细胞明显增多;Api6在高脂饮食组小鼠肺组织中的表达明显升高.结论:高脂饮食可直接导致小鼠肺组织脂质蓄积和炎性损伤,Api6可能在其发病机制中发挥一定的作用. 展开更多
关键词 细胞凋亡抑制因子6(Api6) 高脂饮食 脂代谢异常
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