重庆市淋球菌营养型初步研究

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作者 王毅 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期213-215,共3页

本文用NEDA培养基(淋球菌完全培养基)和缺陷型NEDA培养基对重庆市的36株淋球菌进行营养分型.初步分出9个型别,其中精氨酸型2株,异亮氨酸型3株,尿嘧啶和次黄嘌呤型2株,半胱氨酸和胱氨酸型8株,脯氨酸型4株,甲硫氨基酸型4株,维生素和辅酶型... 本文用NEDA培养基(淋球菌完全培养基)和缺陷型NEDA培养基对重庆市的36株淋球菌进行营养分型.初步分出9个型别,其中精氨酸型2株,异亮氨酸型3株,尿嘧啶和次黄嘌呤型2株,半胱氨酸和胱氨酸型8株,脯氨酸型4株,甲硫氨基酸型4株,维生素和辅酶型5株,多项缺陷型4株。 展开更多

关键词 淋球菌 营养型 NEDA培养基

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幽门螺杆菌临床株粘附素HpaA基因的克隆表达及在诊断中的价值 被引量：13

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作者 吴利先 杨致邦 +1 位作者 林珊珊 刘淼 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期275-278,共4页

目的　构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素 (HpaA)的重组质粒 ,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白 ,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值。 方法　用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩增HpaA基因片段。克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行... 目的　构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素 (HpaA)的重组质粒 ,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白 ,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值。 方法　用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩增HpaA基因片段。克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达 ,表达产物经纯化和Westernblot鉴定后 ,作为Hp抗原 ,ELISA法对 10 0例临床标本进行相应抗体检测 ,并与细菌培养、组织学染色和快速尿素酶试验比较来评价其应用的可行性。结果　经酶切、测序分析插入的基因片段全长 783bp ,与基因文库中的粘附素基因同源性达 98 87%。表达蛋白经SDS -PAGE分析 ,相对分子量 (Mr)约为 300 0 0 ,可溶性表达占全菌的 4 1 6 7%以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 90 %以上的重组蛋白。Westernblot证实了其免疫反应性。通过对临床病例的检测结果显示细菌培养、组织学染色、快速尿素酶试验和HpaA抗体检测的敏感性、特异性和准确性分别为 10 0 0 %和 80 9% ;10 0 0 % ;和 90 5 % ;90 5 %和 85 8% ;93 3%和 85 9% ,相差不多。结论　HpaA能在大肠杆菌中高效表达 ,具有较强的免疫反应性 ,作为检测试剂敏感性和特异性均较好 ,有望成为Hp新的非侵入性的检测方法。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 粘附素 HPAA基因 克隆 表达 诊断

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结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因穿梭表达载体的构建及在BCG中的表达 被引量：7

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作者 陈全 朱道银 +2 位作者 骆旭东 蒋英 江山 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期105-108,共4页

目的　构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10 -ESAT6融合蛋白的重组卡介苗 (recombinantBCG ,rBCG)。方法　以 pQE30 -CFP10 -ESAT6质粒为模板 ,通过PCR扩增 6 33bplhp -esat6基因 ,将该基因定向克隆到穿梭表达载体pJCH0 2中构建重... 目的　构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10 -ESAT6融合蛋白的重组卡介苗 (recombinantBCG ,rBCG)。方法　以 pQE30 -CFP10 -ESAT6质粒为模板 ,通过PCR扩增 6 33bplhp -esat6基因 ,将该基因定向克隆到穿梭表达载体pJCH0 2中构建重组 pJCH0 2 -CFP10 -ESAT6质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG ,将rBCG培养 2 3天 ,于收菌前 3天每天 4 5℃热诱导 4 5min ,对表达产物作SDS -PAGE及免疫印迹分析。结果　重组质粒 pJCH0 2 -CFP10 -ESAT6经酶切及测序证实构建成功 ,并在BCG中经热诱导成功表达出了具有CFP10及ESAT6抗原性的CFP10 -ESAT6融合蛋白。结论　成功构建能表达CFP10 -ESAT6融合蛋白的重组BCG ,为发展新型结核病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 lhp—esat6融合基因 穿梭表达载体 构建 BCG 表达

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结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察 被引量：5

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作者 骆旭东 朱道银 +2 位作者 陈全 蒋英 江山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期592-594,共3页

目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.... 目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B MPT64 融合基因 DNA疫苗

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幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究 被引量：5

5

作者 吴利先 杨致邦 +1 位作者 林珊珊 刘淼 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期306-310,共5页

目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30... 目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 粘附素 霍乱毒素B亚单位 融合蛋白 口服疫苗 免疫应答

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双歧杆菌完整肽聚糖对重组乙肝表面抗原细胞免疫应答的影响 被引量：7

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作者 王跃 谢成彬 +1 位作者 刘明方 陈淑惠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期617-619,共3页

目的:探讨双歧杆菌完整肽聚糖(BWPG)对重组乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导细胞免疫应答的影响。方法:以BWPG作为rHBsAg的佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠的生长状态及中枢淋巴器官的发育情况,检测NK细胞和CTL杀伤活性的变化,脾淋巴细胞的增... 目的:探讨双歧杆菌完整肽聚糖(BWPG)对重组乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导细胞免疫应答的影响。方法:以BWPG作为rHBsAg的佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠的生长状态及中枢淋巴器官的发育情况,检测NK细胞和CTL杀伤活性的变化,脾淋巴细胞的增殖和细胞因子的产生。结果:免疫小鼠未出现可见的毒副反应,胸腺和脾脏组织呈增生状态,脾脏NK细胞和CTL的杀伤活性增强,脾淋巴细胞体外增殖活跃,细胞因子产生增多。结论:BWPG能促进中枢淋巴器官增生,增强机体对rHBsAg的细胞免疫应答。 展开更多

关键词 双歧杆菌 完整肽聚糖 HBSAG 细胞免疫应答

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结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达 被引量：4

7

作者 江山 朱道银 +2 位作者 骆旭东 陈全 蒋英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期664-666,共3页

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通... 目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B IL-12 共表达载体

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双歧杆菌脂磷壁酸抗免疫衰老的实验研究 被引量：7

8

作者 王跃 付玉荣 +1 位作者 刘明方 陈淑惠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期200-202,共3页

目的:探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法:在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA。检测各组小鼠体重增长曲线、胸腺形态、胸腺指数、用免疫组化方法检测胸腺c-fos、p16蛋白表达及用ELISA法检测外周血IL-2的含... 目的:探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法:在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,每日注射双歧杆菌LTA。检测各组小鼠体重增长曲线、胸腺形态、胸腺指数、用免疫组化方法检测胸腺c-fos、p16蛋白表达及用ELISA法检测外周血IL-2的含量。结果:与青年对照组小鼠相比,衰老模型组小鼠胸腺组织形态结构异常,体重、胸腺指数、胸腺c-fos蛋白表达与外周血IL-2含量显著下降,胸腺p16蛋白表达显著升高;而双歧杆菌LTA,能显著逆转上述这些变化。结论:双歧杆菌LTA具有抗衰老作用。 展开更多

关键词 双歧杆菌 脂磷壁酸 免疫衰老

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结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达 被引量：4

9

作者 陈全 骆旭东 +2 位作者 蒋英 江山 朱道银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期332-334,340,共4页

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL... 目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 lhp基因 CFPIO

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CagA基因阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系DNA损伤作用 被引量：3

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作者 陈洁平 沈鼎明 +1 位作者 杨致邦 高晋华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期928-930,共3页

目的 研究 ＣａｇＡ阳性幽门螺杆菌（Ｈｐ）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（ＧＥＳ－１）ＤＮＡ的损伤作用。方法 制备 Ｈｐ培养滤液，ＰＣＲ鉴定ＣａｇＡ基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Ｈｐ（ＣａｇＡ＋）培养滤液对ＧＥＳ－Ｉ细胞ＤＮ... 目的 研究 ＣａｇＡ阳性幽门螺杆菌（Ｈｐ）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（ＧＥＳ－１）ＤＮＡ的损伤作用。方法 制备 Ｈｐ培养滤液，ＰＣＲ鉴定ＣａｇＡ基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Ｈｐ（ＣａｇＡ＋）培养滤液对ＧＥＳ－Ｉ细胞ＤＮＡ的损伤作用。结果 Ｈｐ（ＣａｇＡ＋）培养滤液可使ＧＥＳ－Ｉ细胞形成彗星现象。结论 ＨＰ（ＣａｇＡ＋）培养滤液可以导致ＧＥＳ－Ｉ细胞的ＤＮＡ损伤。ＤＮＡ损伤可能是ＣａｇＡ诱导 ＧＥＳ－Ｉ细胞恶性转化的机制之－。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 CAGA基因 胃粘膜上皮细胞 DNA损伤 HP感染 胃癌

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镀银医用聚丙烯网片的制备及其抗菌性检测 被引量：11

11

作者 王刚 赵渝 刘明方 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期592-595,599,共5页

目的:制备镀银的医用聚丙烯网片(Polypropylene mesh,PP),并检测其抗菌性。方法:采用银作为抗菌剂,通过酒石酸钾钠作为还原剂的化学液相还原法,制成镀银PP。并分别用纸片扩散法和浸泡法对镀银组(n=10)和对照组(n=10)网片的抗菌性进行定... 目的:制备镀银的医用聚丙烯网片(Polypropylene mesh,PP),并检测其抗菌性。方法:采用银作为抗菌剂,通过酒石酸钾钠作为还原剂的化学液相还原法,制成镀银PP。并分别用纸片扩散法和浸泡法对镀银组(n=10)和对照组(n=10)网片的抗菌性进行定性和定量的对比检测。结果:纸片扩散法(定性):在1d、3d、7d对照组(8mm×8mm×0.65mm)抑菌圈均不明显,网眼内还可见有金葡菌菌落附着生长。镀银组(8mm×8mm×0.65mm)抑菌圈则较为明显。两组比较有显著性差异(P<0.05)。不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05)。浸泡法(定量):60min和120min时,对照组和镀银组比较有显著性差异(P<0.05)。240min时对照组和镀银组比较无显著性差异(P>0.05)。不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:镀银PP具有较为肯定的抗菌性,抗菌性随时间推移无明显变化。 展开更多

关键词 银 抗菌性 聚丙烯

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抗幽门螺杆菌粘附素HpaA卵黄抗体的制备 被引量：6

12

作者 张绍兰 杨致邦 毛小琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期265-267,共3页

目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pyloriadhesin A,rHpaA)抗原免疫22周龄罗曼鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体;经硫酸铵法初... 目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pyloriadhesin A,rHpaA)抗原免疫22周龄罗曼鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体;经硫酸铵法初步纯化浓缩后;以间接ELISA鉴定抗体效价及免疫学活性;采用Bradford法测定蛋白含量;并用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度。结果母鸡初次免疫第10d即有抗体产生,初次免疫后75d左右抗体效价超过1∶10000;最高可达为1∶12800。卵黄抗体经硫酸铵法纯化后,用SDS-PAGE分析,出现两条蛋白带,纯度达95%以上。其含量为10.56mg/ml蛋黄。结论本研究首次研制并鉴定抗黏附素卵黄抗体,开拓了我国预防幽门螺杆菌感染的新领域,分析了抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础。有望获得高效价、高产量的抗黏附素的IgY抗体(IgY-HpaA),为制备口服制剂开辟了广阔前景。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌黏附素 卵黄抗体(IgY) 罗曼鸡

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GLS和IL-12偶联重组耻垢分枝杆菌免疫效果的观察 被引量：2

13

作者 杨春 李娜 +3 位作者 伊正君 何永林 李俊明 朱道银 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-115,122,共5页

目的:研究携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)偶联重组耻垢分枝杆菌(ATCC607)经鼻黏膜免疫小鼠后,小鼠体内的免疫状况。方法:BALB/c小鼠36只,随机分为生理盐水、pZM03、ATCC607、卡介苗(BCG)、重组ATCC607(即携带pZ... 目的:研究携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)偶联重组耻垢分枝杆菌(ATCC607)经鼻黏膜免疫小鼠后,小鼠体内的免疫状况。方法:BALB/c小鼠36只,随机分为生理盐水、pZM03、ATCC607、卡介苗(BCG)、重组ATCC607(即携带pZM03的ATCC607)、灭活重组ATCC607组;采用滴鼻法免疫小鼠,BCG组0、14天各1次,其它组0、4、14天各1次,第0天免疫后4周处死小鼠,用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-12、IgG2a、lL-4的分泌水平和淋巴细胞PPD诱导的IFN-γ分泌水平以及肺泡灌洗液特异性SIgA的水平,用MTS法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况。结果:重组ATCC607血清中IFN-γ、IL-12水平与BCG组无明显差异但明显高于其他组(P<0.05),IgG2a水平重组ATCC607组高于BCG组和其他组(P<0.05),各组间IL-4水平差异无统计学意义。重组ATCC607、BCG、灭活重组ATCC607及ATCC607组用PPD均可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖,各组间差异无显著意义,但与生理盐水和pZM03组间差异有显著意义(P<0.05)。重组ATCC607组PPD诱导淋巴细胞IFN-γ明显高于其它组(P<0.05),与BCG组比较无显著差异。重组ATCC607等含菌组经鼻黏膜免疫可产生黏膜特异性SIgA。结论:重组ATCC607经鼻黏膜免疫小鼠后,机体特异性免疫特别是细胞免疫和黏膜免疫增强,为重组ATCC607治疗结核病的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 耻垢分枝杆菌 GLS IL-12 细胞免疫 鼻黏膜免疫

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幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性研究 被引量：4

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作者 宋阳 胡琳琳 +6 位作者 黄薇薇 余抒 廖亚玲 顾江 任莉 邹全明 郭刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期805-808,共4页

目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同... 目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同时检测HP定植率,并提取细菌基因组DNA,采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)对黏膜局部菌群进行指纹图谱分析,并对特异性条带进行测序鉴定分析。结果预处理感染组感染率(93.3%)与直接感染组感染率(26.7%)有明显差异(P<0.05);各实验组PCR-DGGE指纹图谱分析显示条带数量,空白对照组(21.6±2.5)、阴性对照组(3.3±1.1)、直接感染组(14.6±2.4)和预处理感染组(7.2±2.2),经统计学分析,各组间均有明显差异(P<0.05),提示蒙古沙鼠各组间菌群多样性存在显著的差异性。结论 Hp感染与胃黏膜菌群结构的变化密切相关。 展开更多

关键词 胃内菌群 幽门螺杆菌感染 聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术

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探讨接种时间和剂量对小鼠肺炎支原体肺炎模型建立的影响 被引量：4

15

作者 杨春 周莉 何永林 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第4期524-527,531,共5页

目的用不同时间和剂量建立BALB/c小鼠的肺炎支原体肺部感染模型,探索小鼠急性肺炎支原体感染的过程。方法BALB/c小鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,Ⅰ组在0、1、2d滴鼻接种肺炎支原体菌液3次,Ⅱ组在0d滴鼻接种小剂量肺炎支原体菌液1次后于8、9d再... 目的用不同时间和剂量建立BALB/c小鼠的肺炎支原体肺部感染模型,探索小鼠急性肺炎支原体感染的过程。方法BALB/c小鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,Ⅰ组在0、1、2d滴鼻接种肺炎支原体菌液3次,Ⅱ组在0d滴鼻接种小剂量肺炎支原体菌液1次后于8、9d再接种和Ⅰ组相同的肺炎支原体菌液2次,均设立不同剂量、批次的生理盐水对照组。全部实验动物在3～18d内分批处死。所有小鼠均取肺组织做病理切片。以组织病理学评分来确定小鼠的肺部炎症反应程度。取肺组织匀浆及肺泡灌洗液(BALF)进行肺炎支原体培养做病原学检测。结果接种后实验动物全部存活无死亡。实验组动物均出现不同程度的肺炎支原体肺炎样病理改变,组织病理学评分为1.5～14.3分,分别于第5、6天和第11天达到最高,平均分为4.9分;Ⅰ组实验组动物多呈轻、中度改变,Ⅱ组实验组动物多呈中、重度改变。所有实验组动物肺组织匀浆及BALF的肺炎支原体培养在接种后1月内先后出现阳性结果。对照组动物未出现明显肺部炎症改变,组织病理学评分为0～1分,肺炎支原体培养为阴性。结论成功建立BALB/c小鼠的肺部肺炎支原体感染模型;组织病理学评分方法可用以评价肺部炎症反应的严重程度;不同接种时间和剂量所致的病变程度不同。 展开更多

关键词 肺炎支原体 病理改变 时间和剂量 动物模型

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小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用 被引量：2

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作者 杜冰 朱道银 唐恩洁 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期145-147,共3页

阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋... 阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋亡的影响 ,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P5 3蛋白和p5 3mRNA、bcl- 2mRNA表达水平的改变 ,以探讨bcl- 2和p5 3基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL - 6 0细胞凋亡的关系。结果表明 :小剂量Ara -C能诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,其分子机制可能与P5 3蛋白、p5 3mRNA表达增加和bcl- 展开更多

关键词 阿糖胞苷 凋亡 HL-60细胞 BCL-2 p53

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4种抗菌药物对淋球菌体外抗菌活性的研究 被引量：4

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作者 秦亚恬 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第2期114-117,共4页

本文采用琼脂倍比稀释法检测38株淋球菌对4种抗菌药物的敏感性,并作β-内酰胺酶测定.结果表明,21.1%的菌株对青霉素耐药;7.9%的菌株为PPNG;7.9%的菌株对壮观霉素耐药;而100%的菌株对氟嗪酸、氟哌酸敏感,且MIC_(50)、MIC_(90)值均低.结... 本文采用琼脂倍比稀释法检测38株淋球菌对4种抗菌药物的敏感性,并作β-内酰胺酶测定.结果表明,21.1%的菌株对青霉素耐药;7.9%的菌株为PPNG;7.9%的菌株对壮观霉素耐药;而100%的菌株对氟嗪酸、氟哌酸敏感,且MIC_(50)、MIC_(90)值均低.结果显示,应注意淋球菌对青霉素、壮观霉素的耐药性,推荐用氟嗪酸。 展开更多

关键词 抗菌药 淋球菌 抑菌浓度

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哺乳动物shRNA表达载体的构建及鉴定 被引量：2

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作者 杨健 唐恩洁 朱道银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期786-788,共3页

目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置... 目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置荧光显微镜下初步观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经限制性内切酶、PCR及测序证实,成功地构建哺乳动物shRNA表达载体。以其转染HepG2细胞后可以表达绿色荧光蛋白。结论:构建了带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体,为以后运用该载体进行RNAi相关研究奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 SHRNA RNA 哺乳动物

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肺炎支原体P30蛋白结构基因的克隆和表达研究 被引量：3

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作者 周莉 杨春 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第12期1068-1070,共3页

目的构建完整的肺炎支原体粘附分子P30蛋白结构基因原核表达质粒并进行表达。方法用引物修饰法将P30基因中唯一的“UGA”码突变为“UGG”,PCR扩增出P30蛋白编码基因后定向克隆入PET32a(+)质粒,构建PET32a(+)/P30重组体,再转化到大肠杆菌... 目的构建完整的肺炎支原体粘附分子P30蛋白结构基因原核表达质粒并进行表达。方法用引物修饰法将P30基因中唯一的“UGA”码突变为“UGG”,PCR扩增出P30蛋白编码基因后定向克隆入PET32a(+)质粒,构建PET32a(+)/P30重组体,再转化到大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达外源基因。结果成功扩增出不含“UGA”码的P30基因;经双向测序结果与GenBank注录的P30基因序列一致;SDS-PAGE显示P30基因在BL21中得到完整表达。结论获得含有完整P30基因的重组克隆株并在大肠杆菌中表达了完整的重组蛋白,为进一步探讨P30基因及其编码产物功能打下了基础。 展开更多

关键词 肺炎支原体 P30蛋白 PCR 克隆 表达

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革兰氏染色与淋球菌培养诊断女性淋病的比较研究 被引量：1

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作者 朱道银 秦亚恬 +2 位作者 李伟 王毅 周永华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第2期120-123,共4页

本文用淋球菌培养比较研究对革兰氏染色法在女性淋病诊断中的应用作重新评价.妇科门诊500名病人615价标本的检查结果表明,革兰氏染色法敏感性为94.9%,特异性为95.2%,阳性预报率为74%,阴性预报率为99.2%.

关键词 淋病 革兰氏染色 淋球菌培养 诊断

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