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不同浓度葡萄糖对成骨细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 冯正平 邓华聪 +2 位作者 杜佳 陈丹燕 姜蓉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期840-842,共3页
目的:观察不同浓度葡萄糖对体外培养的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度的葡萄糖、甘露醇分别刺激体外培养的MC3T3-E1成骨细胞1、3、7、12d,用流式细胞术检测成骨细胞的凋亡。结果:甘露醇组MC3T3-E1成骨细胞凋亡较正常对照组... 目的:观察不同浓度葡萄糖对体外培养的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度的葡萄糖、甘露醇分别刺激体外培养的MC3T3-E1成骨细胞1、3、7、12d,用流式细胞术检测成骨细胞的凋亡。结果:甘露醇组MC3T3-E1成骨细胞凋亡较正常对照组有一定的增加,但无统计学差异(P>0.05);而葡萄糖呈浓度、时间依赖性诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。结论:高糖状态下,MC3T3-E1成骨细胞凋亡显著增加。 展开更多
关键词 葡萄糖 成骨细胞 细胞凋亡
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人参总皂苷对人红白血病细胞株(K562)中STAT5表达的影响 被引量:3
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作者 罗春燕 官涛 +5 位作者 王红宁 杨艳 姜蓉 胡晓舒 华自森 王建伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期96-100,共5页
旨在探讨人参总皂苷对K562细胞STAT5表达的影响。MTT法显示TSPG对K562细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加,且呈正相关关系。流式细胞术表明TSPG能阻止K562细胞从G0/G1期向S、G2/M期移行。激光共聚焦显微镜观察可见,TSPG 200 mg/L作... 旨在探讨人参总皂苷对K562细胞STAT5表达的影响。MTT法显示TSPG对K562细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加,且呈正相关关系。流式细胞术表明TSPG能阻止K562细胞从G0/G1期向S、G2/M期移行。激光共聚焦显微镜观察可见,TSPG 200 mg/L作用K562细胞24 h,胞浆中的STAT5荧光强度增加,而胞核内STAT5荧光强度减弱。Westernblotting结果显示,TSPG作用K562细胞6、24、48 h,胞核中STAT5表达较对照组减少,TSPG作用72 h胞核蛋白中STAT5表达增加;TSPG作用K562细胞6、12、24、48、72 h,胞浆内STAT5表达增加。TSPG能减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一。 展开更多
关键词 人参总皂苷 STAT5 K562细胞 胞质 胞核
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p38MAPK基因RNAi慢病毒载体的构建及在MC3T3-E1细胞的表达 被引量:2
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作者 冯正平 邓华聪 +3 位作者 姜蓉 杜佳 陈丹燕 梁小燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1598-1601,共4页
目的构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定... 目的构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。重组质粒与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,流式细胞仪检测病毒滴度,p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养MC3T3-E1细胞,荧光定量PCR检测MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达,进行p38MAPK干扰有效靶点的筛选。22.2 mol/L葡萄糖刺激培养MC3T3-E1细胞7 d,Westernblot检测MC3T3-E1细胞p38MAPK蛋白的表达,流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡。结果酶切和测序均证实各重组质粒核苷酸序列插入正确,所得质粒分别命名为p38MAPK-shRNA1、p38MAPK-shRNA2、p38MAPK-shRNA3,流式细胞仪测定病毒滴度分别为2.4×108、2.8×108、2.5×108TU/ml。p38MAPK-shRNA转染MC3T3-E1细胞效率达到74%以上,RT-PCR检测结果显示,各p38MAPK-shRNA转染组MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达较正常对照组分别下降了78.8%、84.3%和60.2%(P<0.01),其中以p38MAPK-shRNA2的干扰效率最高。Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组、空载体转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01)。p38MAPK-shRNA慢病毒转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达水平较高糖组明显下调(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加(P<0.01);p38MAPK-shRNA慢病毒转染组以及p38MAPK信号转导阻断剂组较高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论成功构建了靶向p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,其能有效抑制MC3T3-E1细胞p38MAPK基因表达,减少高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡。 展开更多
关键词 P38MAPK 成骨细胞 RNA干扰 慢病毒属
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活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用 被引量:4
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作者 王小菊 冯正平 +2 位作者 邓华聪 姜蓉 杜佳 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2014年第3期258-262,共5页
目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRN... 目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。 展开更多
关键词 活化蛋白1 MC3T3-E1成骨细胞 RNA干扰 细胞凋亡
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他克莫司对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的实验性治疗
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作者 石海波 王顺和 +5 位作者 郑娟 李晗宇 姜蓉 唐艳 陈舜琦 张凌 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期367-371,共5页
目的:研究新型免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用和作用机制,并与已论证的传统治疗方法甲基泼尼松龙对EAE实验治疗做临床对比其疗效。方... 目的:研究新型免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用和作用机制,并与已论证的传统治疗方法甲基泼尼松龙对EAE实验治疗做临床对比其疗效。方法:豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的混合液诱导SD大鼠建立EAE模型,免疫10d后将FK506分别以1mg/kg,0.5mg/kg剂量给予每日腹腔注射EAE大鼠,连续给药10d,观察其发病情况,外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8、NK细胞比率,免疫后30d,观察脑、脊髓组织病理变化,免疫组织化学生长相关蛋白43(Growth associated protein43,Gap-43)显示神经再生的形态学证据。结果:FK506能减轻EAE的临床症状,促进EAE的临床缓解和恢复;减轻中枢神经系统的炎症浸润;减轻髓鞘和轴突损伤,促进轴突再生作用,且停药后未见动物复发。结论:FK506对实验性变态反应性脑脊髓炎有一定的实验性治疗作用。 展开更多
关键词 多发性硬化 实验性变态反应性脑脊髓炎 大鼠 他克莫司
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