目的探讨鸟嘌呤核苷酸交换因子C3G/Rap1酶和鸟嘌呤核苷酸交换因子Dock180/Rac1酶信号通路在卵巢癌浸润中的可能作用。方法 Western blot检测Dock180沉默的卵巢癌细胞SKOV3中C3G的表达,验证上皮性卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达相关性;...目的探讨鸟嘌呤核苷酸交换因子C3G/Rap1酶和鸟嘌呤核苷酸交换因子Dock180/Rac1酶信号通路在卵巢癌浸润中的可能作用。方法 Western blot检测Dock180沉默的卵巢癌细胞SKOV3中C3G的表达,验证上皮性卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达相关性;免疫组化比较卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达趋势;免疫荧光观察SKOV3中Dock180与C3G及它们各自的下游蛋白Rac1/Rap1的定位。结果 Dock180基因沉默的细胞中C3G表达明显增强(P<0.05);Dock180与C3G在卵巢癌组织中的表达呈现相反趋势(P<0.05);C3G/Dock180均主要分布于细胞质,下游效应蛋白Rap1/Rac1在细胞膜和细胞质都有表达,但Rap1以细胞质为主,而Rac1可以伸展至细胞膜及细胞膜皱褶。结论卵巢癌细胞和组织中C3G与Dock180表达呈相反趋势,下游蛋白Rap1与Rac1在细胞内的定位分布差异,可能与C3G/Rap1和Dock180/Rac1信号通路在卵巢肿瘤浸润中的不同作用有关。展开更多
目的探讨β-环连蛋白抑制基因1(dapper antagonist of catenin-1,DACT1)对Ⅰ型上皮性卵巢癌迁移侵袭能力的影响及可能机制。方法免疫组织化学检测Ⅰ型人卵巢癌临床组织中DACT1的表达;采用人黏液性卵巢癌细胞株3AO构建外源性转染DACT1的...目的探讨β-环连蛋白抑制基因1(dapper antagonist of catenin-1,DACT1)对Ⅰ型上皮性卵巢癌迁移侵袭能力的影响及可能机制。方法免疫组织化学检测Ⅰ型人卵巢癌临床组织中DACT1的表达;采用人黏液性卵巢癌细胞株3AO构建外源性转染DACT1的稳转株,通过划痕实验、Transwell迁移及基质胶侵袭实验检测细胞运动能力;免疫荧光观察DACT1对细胞骨架重塑的影响。结果Ⅰ型卵巢癌组织中DACT1表达低于正常卵巢组织(P<0.01)。外源性转染DACT1后3AO细胞株迁移侵袭能力降低(P<0.01),且腹腔内成瘤能力有所下降,细胞骨架中特化膜结构减少。结论 DACT1对Ⅰ型卵巢癌浸润转移具有抑制效应,其在Ⅰ型卵巢癌组织中的低表达可能与其疾病发生相关。展开更多
目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extr...目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的变化;利用沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silencing information regulator 2 related enzymeⅠ,SIRT1)小干扰RNA(siRNA-SIRT1)/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC及KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT15组,检测各组髓核细胞凋亡及ECM的表达。结果退变椎间盘髓核中KS的mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常髓核(P<0.05);相比于H_(2)O_(2)组,KS组及H_(2)O_(2)+KS组髓核细胞凋亡率明显降低(P<0.05),凋亡基因Caspase3、Caspase9和Bax mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),抗凋亡基因Bcl2表达量明显增加(P<0.05);GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan表达显著提高(P<0.05)。当siRNASIRT1敲降髓核细胞SIRT1表达后,相比于Control、KS+H_(2)O_(2)和KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC组,KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT1组凋亡率显著增加,GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白表达也显著降低(P<0.05)。结论KS可通过诱导SIRT1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的人髓核细胞凋亡和ECM降解。展开更多
文摘目的探讨鸟嘌呤核苷酸交换因子C3G/Rap1酶和鸟嘌呤核苷酸交换因子Dock180/Rac1酶信号通路在卵巢癌浸润中的可能作用。方法 Western blot检测Dock180沉默的卵巢癌细胞SKOV3中C3G的表达,验证上皮性卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达相关性;免疫组化比较卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达趋势;免疫荧光观察SKOV3中Dock180与C3G及它们各自的下游蛋白Rac1/Rap1的定位。结果 Dock180基因沉默的细胞中C3G表达明显增强(P<0.05);Dock180与C3G在卵巢癌组织中的表达呈现相反趋势(P<0.05);C3G/Dock180均主要分布于细胞质,下游效应蛋白Rap1/Rac1在细胞膜和细胞质都有表达,但Rap1以细胞质为主,而Rac1可以伸展至细胞膜及细胞膜皱褶。结论卵巢癌细胞和组织中C3G与Dock180表达呈相反趋势,下游蛋白Rap1与Rac1在细胞内的定位分布差异,可能与C3G/Rap1和Dock180/Rac1信号通路在卵巢肿瘤浸润中的不同作用有关。
文摘目的探讨β-环连蛋白抑制基因1(dapper antagonist of catenin-1,DACT1)对Ⅰ型上皮性卵巢癌迁移侵袭能力的影响及可能机制。方法免疫组织化学检测Ⅰ型人卵巢癌临床组织中DACT1的表达;采用人黏液性卵巢癌细胞株3AO构建外源性转染DACT1的稳转株,通过划痕实验、Transwell迁移及基质胶侵袭实验检测细胞运动能力;免疫荧光观察DACT1对细胞骨架重塑的影响。结果Ⅰ型卵巢癌组织中DACT1表达低于正常卵巢组织(P<0.01)。外源性转染DACT1后3AO细胞株迁移侵袭能力降低(P<0.01),且腹腔内成瘤能力有所下降,细胞骨架中特化膜结构减少。结论 DACT1对Ⅰ型卵巢癌浸润转移具有抑制效应,其在Ⅰ型卵巢癌组织中的低表达可能与其疾病发生相关。
文摘目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的变化;利用沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silencing information regulator 2 related enzymeⅠ,SIRT1)小干扰RNA(siRNA-SIRT1)/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC及KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT15组,检测各组髓核细胞凋亡及ECM的表达。结果退变椎间盘髓核中KS的mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常髓核(P<0.05);相比于H_(2)O_(2)组,KS组及H_(2)O_(2)+KS组髓核细胞凋亡率明显降低(P<0.05),凋亡基因Caspase3、Caspase9和Bax mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),抗凋亡基因Bcl2表达量明显增加(P<0.05);GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan表达显著提高(P<0.05)。当siRNASIRT1敲降髓核细胞SIRT1表达后,相比于Control、KS+H_(2)O_(2)和KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC组,KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT1组凋亡率显著增加,GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白表达也显著降低(P<0.05)。结论KS可通过诱导SIRT1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的人髓核细胞凋亡和ECM降解。
