Amadori糖化白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油——蛋白激酶C级联的影响 被引量：4

1

作者 周波 汪恕萍 +2 位作者 蒋涛 汤为学 曾昭淳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期127-130,共4页

目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (... 目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (2 0mmol/L)培养液中作用于新鲜牛视网膜血管。采用薄层层析和放射自显影法测定DAG含量和PKC活性 ;并检测d -α-生育酚预处理后DAG、PKC改变。结果 :在生理葡萄糖浓度下 ,牛视网膜血管暴露于AGSA2 4h或 72h后细胞内DAG含量、PKC活性均较对照组显著增加 ,当AGSA和高葡萄糖同时作用于牛视网膜血管时 ,DAG -PKC级联显著激活 ,分别为正常葡萄糖组的 3.4 7倍和 4 .5 4倍 ;在正常血清培养液中 ,与 5 .5mmol/L的葡萄糖相比 ,2 0mmol/L高糖在 2 4h时并不刺激DAG含量增加 (P >0 .0 5 ) ,而 72h时则较对照组增加 4 5 % ,PKC活性较对照增加 5 6 % ,而d -α -生育酚可逆转上述生化改变。结论 :Amadori糖化血清白蛋白可在生理葡萄糖浓度下刺激DAG -PKC途径活化 ,从而影响血管一系列生理功能 ,而d -α-生育酚对血管生化改变有保护作用。 展开更多

关键词 糖化血清蛋白 二酯酰甘油 蛋白激酶C 视网膜血管

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胎盘肥胖基因表达水平与胎盘重量和新生儿体重的关系研究 被引量：10

2

作者 刘先俊 漆洪波 +1 位作者 汪炼 刘方欣 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期252-253,共2页

　 Ｌｅｐｔｉｎ 是由肥胖基因（ Ｏｂｅｓｅ Ｇｅｎｅ ， Ｏｂ 基因） 表达的一种内分泌激素，具有多种重要的生理功能。有证据表明，在母血、羊水、胎盘、新生儿血液等处可检测出一定浓度的 Ｌｅｐｔｉｎ ， 表明 Ｌｅｐｔｉｎ 在... 　 Ｌｅｐｔｉｎ 是由肥胖基因（ Ｏｂｅｓｅ Ｇｅｎｅ ， Ｏｂ 基因） 表达的一种内分泌激素，具有多种重要的生理功能。有证据表明，在母血、羊水、胎盘、新生儿血液等处可检测出一定浓度的 Ｌｅｐｔｉｎ ， 表明 Ｌｅｐｔｉｎ 在妇女怀孕过程中具有重要的作用。先前的资料证实， Ｏｂ 基因主要在脂肪组织中表达。近来发现， 胎盘 Ｏｂ 基因 可表达产生 Ｌｅｐｔｉｎ ， 本文用反转录－ Ｐ Ｃ Ｒ（ Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ） 荧光定量分析人胎盘 Ｏｂ 基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达水平，并分析其与胎盘重量、新生儿体重、性别、孕周、产妇体重等的关系。发现，胎盘 Ｏｂ 基因表达水平与新生儿体重有较好的相关性，与胎盘重量也相关， 但与孕周、胎儿性别和产妇体重无明显相关性。 展开更多

关键词 Ob基因表达 胎盘重量 新生儿体重

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人瘦素在毕赤酵母中的表达及其分离纯化 被引量：4

3

作者 刘先俊 刘方欣 +1 位作者 漆洪波 邹全明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2002年第3期250-252,共3页

目的:为了获得人(瘦素或瘦蛋白)而进一步研究其生理作用、作用机制与病理意义。Leptin方法:采用逆转录-聚合酶链反应()方法,从人腹部皮下脂肪组织中分离脂肪细胞总,经逆转录、扩增出肥胖基因的编码序列RT-PCRRNAPCR(基因),再克隆到表达... 目的:为了获得人(瘦素或瘦蛋白)而进一步研究其生理作用、作用机制与病理意义。Leptin方法:采用逆转录-聚合酶链反应()方法,从人腹部皮下脂肪组织中分离脂肪细胞总,经逆转录、扩增出肥胖基因的编码序列RT-PCRRNAPCR(基因),再克隆到表达载体α中,在毕赤酵母菌株中表达。ObcDNApPICZGS115结果:的扩增产物长度为,克PCR462bp隆后的表达产物,经证实,约为分子量为的特异蛋白条带,与人瘦素的理论预计值相符合,经放免法测定,SDS-PAGE17kD表达量达到。通过其多聚组氨酸接头与金属镍螯合的亲和层析法纯化表达蛋白,在上呈现分子量为的36mg/LSDS-PAGE17kD单一蛋白条带。结论:通过基因工程手段已成功表达出人瘦素并分离纯化得到纯度较高的人瘦素。 展开更多

关键词 人瘦素 毕赤酵母 表达

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ACE基因多态性,血清水平与2型糖尿病,2型糖尿病半高血压的关系 被引量：2

4

作者 曾昭淳 蒋涛 汪恕萍 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第3期231-233,共3页

目的 我们在一组１１６例糖尿病及糖尿病伴高血压的重庆地区汉族人中研究血管紧张素转换酶（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ＩＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ，ＡＣＥ）基因内含子插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性，ＡＣＥ血清水平及其与糖尿... 目的 我们在一组１１６例糖尿病及糖尿病伴高血压的重庆地区汉族人中研究血管紧张素转换酶（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ＩＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ，ＡＣＥ）基因内含子插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性，ＡＣＥ血清水平及其与糖尿病及糖尿病伴高血压的关系。方法用ＰＣＲ扩增ＡＣＥ基因第１６内含子Ｉ／Ｄ片段，用电泳法确定其多态性；用分光光度法测定血清ＡＣＥ的活性。结果 糖尿病伴高血压组Ｄ等位基因的频率分别为０．６３、糖尿病组０．５１、健康对照组０．４８。糖尿病伴高血压组Ｄ等位基因的频率明显高于糖尿病组和健康对照组（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０２５）。糖尿病组和健康对照组的Ｄ等位基因频率无明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＤＤ基因型的血ＡＣＥ水平高下ＤＩ基因型和ＩＩ基因型，在三种基因型之间具有非常明显的差异（Ｐ＝１２１．７３，Ｐ＜０．０１）。糖尿病伴高血压组、糖尿病组和健康对照组之间的血清ＡＣＥ活性，也有非常显著性差异（Ｐ＝３２．５７，Ｐ＜０．０１）。结论 ＡＣＥ活性与ＡＣＥ基因第１６内含子Ｄ等位基因的频率；高的血压和高的血清ＡＣＥ活性有关。ＡＣＥ的Ｄ等位基因可能是导致血清高ＡＣＥ活性和高血压因素之一。 展开更多

关键词 Ⅱ型糖尿病 高血压 基因多态性 ACE基因

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小脑顶核电刺激对AD模型大鼠学习记忆能力及海马bcl-2、Bax表达影响 被引量：1

5

作者 罗晶 王永红 +1 位作者 王小林 王继红 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1423-1426,共4页

目的:研究淀粉样β蛋白(Aβ1-40)对大鼠空间学习记忆能力及海马区Bax和bcl-2的表达的影响及小脑顶核电刺激(Fastigial nucleus stimulation,FNS)的干预作用。方法:将Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马,制作大鼠AD动物模型。分别予电刺激小... 目的:研究淀粉样β蛋白(Aβ1-40)对大鼠空间学习记忆能力及海马区Bax和bcl-2的表达的影响及小脑顶核电刺激(Fastigial nucleus stimulation,FNS)的干预作用。方法:将Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马,制作大鼠AD动物模型。分别予电刺激小脑顶核、齿状核。28d后进行水迷宫试验,观察各组大鼠空间学习记忆功能改变。免疫组化法检测各组海马CA1区bcl-2、Bax蛋白表达。结果:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)组与假手术组(SC)比较,每天隐匿平台逃避潜伏期均明显增长(P<0.05),海马bcl-2阳性细胞光密度明显减少(P<0.05),Bax阳性细胞光密度明显增高(P<0.05);小脑顶核电刺激(FNS)组与AD组比较,空间学习记忆能力明显改善(P<0.05),海马bcl-2阳性细胞光密度明显增高(P<0.05),Bax阳性细胞光密度明显减少(P<0.05),齿状核刺激(DNS)组无此作用。结论:FNS可部分改善Aβ1-40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,可能是通过促进bcl-2表达和降低Bax表达抑制海马神经细胞凋亡。 展开更多

关键词 淀粉样Β蛋白 小脑顶核电刺激 凋亡

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重组人瘦素的分离纯化 被引量：1

6

作者 刘先俊 刘方欣 漆洪波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期451-453,476,共4页

目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ... 目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ,随后通过疏水层析纯化后 ,产物纯度达到 96 .2 %。经SDS -PAGE证实为单一蛋白条带。结论 :通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。 展开更多

关键词 重组人瘦素 分离 纯化 疏水层析 强阴离子交换柱

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毕赤酵母高密度发酵生产重组人内皮细胞抑制素 被引量：1

7

作者 刘先俊 周慧云 黎波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期46-49,共4页

目的在microDCU-400发酵罐中探讨表达人血管内皮细胞抑制素(Endostatin)的毕赤酵母(GS115)工程菌株的高密度发酵条件。方法在发酵过程中,控制溶氧30%以上、温度30℃、pH5.3(生长阶段)或5.0(诱导表达阶段),在无机盐培养基中生长约18～22h... 目的在microDCU-400发酵罐中探讨表达人血管内皮细胞抑制素(Endostatin)的毕赤酵母(GS115)工程菌株的高密度发酵条件。方法在发酵过程中,控制溶氧30%以上、温度30℃、pH5.3(生长阶段)或5.0(诱导表达阶段),在无机盐培养基中生长约18～22h后,补加50%甘油继续生长约3～5h,OD600达到450以上,开始进行甘油-甲醇混合物逐渐过渡至甲醇、甲醇浓度由低至高、8h后达到最大诱导浓度(0.08ml/min/L)的诱导方式,维持诱导约60h。离心收集上清液。利用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶标检测试剂盒检测表达产物。结果在诱导表达阶段,OD600最高达到580以上(细胞湿重达到375g/L),表达产量为27.2mg/L,高于摇瓶表达水平(16.3mg/L)。结论在15L发酵罐中成功表达了人血管内皮细胞抑制素,为进一步大批量生产作了准备。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞抑制素 毕赤酵母 高密度发酵

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糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C同工酶表达模式

8

作者 周波 汪恕萍 +1 位作者 蒋涛 曾昭淳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期267-269,306,共4页

目的 :探讨糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C(PKC)活性变化及其同工酶表达特性。方法 :采用渗透休克法获取正常及链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜血管。原位PKC催化活性分析法测定两组大鼠视网膜血管PKC活性 ,α、β、γ、δ、ε、ζ-PK... 目的 :探讨糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C(PKC)活性变化及其同工酶表达特性。方法 :采用渗透休克法获取正常及链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜血管。原位PKC催化活性分析法测定两组大鼠视网膜血管PKC活性 ,α、β、γ、δ、ε、ζ-PKC同工酶表达水平则采用Westernblot法。结果 :病程 2月时糖尿病大鼠视网膜血管PKC活性为 346± 18.1PmolesPimin-1·mgprotein-1(单位下同 )较正常对照组 131± 10 .5显著为高 (P <0 .0 5 )。α、β、δ、ζ -PKC分布于正常和糖尿病大鼠血管细胞浆、膜部 ,而γ、ε则无信号 ,α、β、ζ同工酶在糖尿病大鼠视网膜血管膜部较正常对照大鼠显著为高 (P <0 .0 5 ) ,尤以α、β为著 ,光密度 (OD)值分别为对照的 2 82 %± 32 %、340 %± 2 6 %、187%± 14 %。而糖尿病大鼠视网膜血管浆部α、β、ζ -PKC同工酶表达则较对照组显著为低 (P <0 .0 5 ) ,其OD值分别为对照的 71%± 11%、6 3%± 8%、84 %± 6 %。但δ -PKC浆部则较对照组显著增高 ,其OD值为正常对照之 2 0 8%± 13% ,但膜部δ -PKC与正常对照相比较无显著性差异。结论 :糖尿病视网膜病变 (DR)靶组织———视网膜血管中PKC显著激活 ,呈α、β、ζ同工酶从胞浆至胞膜 ,而δ -PKC则从胞膜至胞浆移位激活特征。 展开更多

关键词 蛋白激酶C 同工酶 血管 视网膜 糖尿病

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非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的临床意义

9

作者 杜铭 李静 +2 位作者 曾昭淳 李良彬 张雪梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期368-370,共3页

目的　探讨人类非小细胞肺癌组织中p16基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。 方法　应用控制模板DNA量的银染PCR-SSCP技术检测40例非小细胞肺癌手术切除标本中p16基因第2外显子。结果　40例中有13例发生纯合缺失，3例发生突变，缺... 目的　探讨人类非小细胞肺癌组织中p16基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。 方法　应用控制模板DNA量的银染PCR-SSCP技术检测40例非小细胞肺癌手术切除标本中p16基因第2外显子。结果　40例中有13例发生纯合缺失，3例发生突变，缺失及突变率为40%。其缺失及突变率与肺癌的临床病理分期有密切关系（Ｐ<0.05）。 结论　 p16基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要作用。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 基因缺失 基因突变 P^16基因

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未知基因KH开放阅读框架真核表达载体的构建及其对K562细胞增殖的影响

10

作者 何於娟 张彦 +3 位作者 刘小珊 马凌娣 欧一衡 蒋纪恺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第5期559-562,共4页

目的 :构建未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingframe,ORF)的真核表达体系 ,初步探讨未知基因KH的功能。方法 :采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)亚克隆于表达载体 pCl-neoMammalianExpres sionVector,重组为pCI-... 目的 :构建未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingframe,ORF)的真核表达体系 ,初步探讨未知基因KH的功能。方法 :采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)亚克隆于表达载体 pCl-neoMammalianExpres sionVector,重组为pCI-neo -KH -ORF真核表达体系 ,脂质体转染K5 6 2细胞 ,RT -PCR检测目的基因KH的表达。采用体外培养技术 ,通过 pCI -neo -KH -ORF质粒转染K5 6 2细胞前后的生长曲线和乳酸脱氢酶活性测定观察KH -ORF对K5 6 2细胞增殖速度的影响。结果 :KH -ORF在K5 6 2细胞中获得表达 ,对细胞增殖速度有明显影响。结论 :KH -ORF表达产物可能是一个与K5 6 2细胞增殖有关的功能蛋白质 。 展开更多

关键词 KH基因 开放阅读框架 真核表达 K562细胞 增殖

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与海洛因依赖有关的特异性mRNA研究

11

作者 蒙华庆 王广新 +2 位作者 刘先俊 周歧新 邓伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第5期625-627,共3页

目的 :寻找与海洛因依赖有关的特异性基因。方法 :用递增法建立海洛因依赖小鼠模型。纳洛酮催瘾后 ,分别提取实验组及对照组小鼠脑内的总RNA、mRNA ,然后进行抑制性消减杂交 ,杂交产物扩增 ,凝胶电泳分析。结果 :实验组小鼠脑内mRNA含... 目的 :寻找与海洛因依赖有关的特异性基因。方法 :用递增法建立海洛因依赖小鼠模型。纳洛酮催瘾后 ,分别提取实验组及对照组小鼠脑内的总RNA、mRNA ,然后进行抑制性消减杂交 ,杂交产物扩增 ,凝胶电泳分析。结果 :实验组小鼠脑内mRNA含量高于对照组 ,并于实验组小鼠脑内分离出差异表达的cDNA片段。结论 :海洛因依赖小鼠脑内可能存在特异性基因表达。 展开更多

关键词 海洛因依赖 MRNA 抑制性消减杂交

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K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

12

作者 何於娟 欧一衡 +4 位作者 张彦 刘小珊 马凌娣 涂植光 蒋纪恺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期124-126,共3页

目的 :构建K5 6 2细胞未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingflame ,ORF)的原核表达体系。 方法 :采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)的表达载体pCI-neo-KH -ORF ,热休克法转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导... 目的 :构建K5 6 2细胞未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingflame ,ORF)的原核表达体系。 方法 :采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)的表达载体pCI-neo-KH -ORF ,热休克法转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导后 ,SDS -PAGE鉴定目的蛋白的表达。结果 :经IPTG诱导 0 .5h后KH -ORF在BL2 1(DE3)plysS中获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,分子产量约 2 4kD。结论 :成功构建了KH -ORF的原核表达体系 ,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 K562细胞 KH基因 开放阅读框架 原核表达

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