c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响 被引量：3

1

作者 任庆兰 吴永忠 +1 位作者 刘渝 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期421-423,共3页

目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株S... 目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。 展开更多

关键词 卵巢癌细胞株 脂质体 c—erbB2反义寡核苷酸 放射敏感性

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c-af-1反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV_3细胞增殖的抑制作用 被引量：1

2

作者 吴永忠 任庆兰 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期19-22,41,共5页

目的:探讨c-raf-1基因反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:实验分3组:正常对照组、c-raf-1正义治疗组、c-raf-1反义治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行M TT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、... 目的:探讨c-raf-1基因反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:实验分3组:正常对照组、c-raf-1正义治疗组、c-raf-1反义治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行M TT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别。结果:反义治疗组与正义治疗组比较:转染72h OD值分别0.272与1.307(P<0.05);克隆形成率分别为30.6%与75.0%(P<0.05);凋亡率分别为19.7%与9.2%(P<0.05),同时明显地下调P74蛋白质的表达水平(P<0.05)。结论:c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 SKOV 细胞 反义寡核苷酸 卵巢癌 C-RAF-1

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c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸转染对卵巢癌SKOV_3细胞的作用

3

作者 吴永忠 任庆兰 李少林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期784-787,共4页

目的:探讨c-erbB-2与c-raf-1基因ASODN联合转染对人卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:实验分为7组:对照组、c-erbB-2正义治疗组、c-raf-1正义治疗组、c-erbB-2反义治疗组、c-raf-1反义治疗组、全剂量联合治疗组和半剂量联合... 目的:探讨c-erbB-2与c-raf-1基因ASODN联合转染对人卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:实验分为7组:对照组、c-erbB-2正义治疗组、c-raf-1正义治疗组、c-erbB-2反义治疗组、c-raf-1反义治疗组、全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定与免疫组织化学检查,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别。结果:与对照组比较,全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组,转染72h的光密度值分别为0.151(P<0.005)和0.073(P<0.005),增殖抑制率分别达到了88.7%和94.5%,克隆形成率分别为19.4%(P<0.01)和12.8%(P<0.01),凋亡率分别为24.3%(P<0.05)和31.5%(P<0.01),同时明显地下调了c-erbB-2、c-raf-1、PCNA、c-jun、c-fos基因蛋白质的表达水平。结论:c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用优于单反义基因,其对卵巢癌细胞增殖的抑制作用可能通过下调c-erbB-2、c-raf-1、PCNA、c-jun、c-fos基因蛋白的表达水平实现。 展开更多

关键词 SKOV3细胞 反义寡核苷酸 联合转染 卵巢癌

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苦参碱诱导Raji细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响 被引量：4

4

作者 黄曦 陈建斌 +3 位作者 郭启帅 杨泽松 刘占术 黄宗干 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期189-191,共3页

目的:观察苦参碱(Matrine,Mat)对体外人淋巴瘤Raji细胞增殖及细胞凋亡的影响,探讨Mat诱导Raji细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率;免疫细胞化学技术检测Mat对Raji细... 目的:观察苦参碱(Matrine,Mat)对体外人淋巴瘤Raji细胞增殖及细胞凋亡的影响,探讨Mat诱导Raji细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率;免疫细胞化学技术检测Mat对Raji细胞株Bcl-2蛋白表达的影响;RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA表达。结果:不同浓度的Mat对Raji细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Mat能明显诱导Raji细胞凋亡;免疫细胞化学结果显示Bcl-2在实验组中的表达显著低于对照组。RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显。结论:Mat能抑制人淋巴瘤Raji细胞的增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2表达有关。 展开更多

关键词 苦参碱 RAJI细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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^(99)Tc^m-EGFR-McAb及^(99)Tc^m-CD44-McAb单独及联合用于荷人肺腺癌裸鼠的显像研究 被引量：3

5

作者 段东 李少林 +1 位作者 朱玉泉 王树斌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1287-1290,共4页

目的评价99Tcm-EGFR-McAb及99Tcm-CD44-McAb单独及联合应用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像效果。方法建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;采用直接法99Tcm标记抗EGFR和CD44的单克隆抗体,运用柱层析法对标记抗体分离、纯化,并对标记、纯化后的... 目的评价99Tcm-EGFR-McAb及99Tcm-CD44-McAb单独及联合应用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像效果。方法建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;采用直接法99Tcm标记抗EGFR和CD44的单克隆抗体,运用柱层析法对标记抗体分离、纯化,并对标记、纯化后的抗体特性进行鉴定;利用99Tcm-EGFR-McAb及99Tcm-CD44-McAb单独及联合进行荷人肺腺癌裸鼠显像及体内分布研究。结果99Tcm对EGFR-McAb和CD44-McAb的标记率分别为(91.5±3.8)%、(92.3±4.1)%,标记抗体比活度分别为(2.8±0.3)MBq/μl、(2.9±0.5)MBq/μl,放射化学纯度分别为(96.5±2.8)%、(96.2±3.1)%。放射免疫显像结果显示,肿瘤组织对2种标记抗体均有较高的摄取,2种标记抗体联合使用肿瘤部位的放射性浓聚明显高于2种标记抗体单独使用,通过ROI技术测得T/NT值分别为(5.58±0.46)、(2.72±0.22)、(2.30±0.18)。标记抗体的体内分布规律与显像结果一致。结论99Tcm-EGFR-McAb、99Tcm-CD44-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像能得到较理想的靶/非靶比值,2种标记抗体的联合应用,可在一定程度上提高靶/非靶比值,优于一种标记抗体的单独使用。 展开更多

关键词 肿瘤 表皮生长因子受体 CD44 抗体 单克隆 锝 放射性核素显像

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不同转移潜能乳腺癌细胞亚系的建立与生物学特性的分析 被引量：4

6

作者 张涛 汤为学 +1 位作者 蔡辉 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1726-1729,共4页

目的探讨利用细胞穿透人工基质膜能力的差异筛选不同转移潜能乳腺癌细胞的可行性,并分析二者生物学特性差异。方法人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s经过连续人工基质膜侵袭试验后获得高、低转移潜能细胞株,并应用细胞生长曲线测定、侵袭力、... 目的探讨利用细胞穿透人工基质膜能力的差异筛选不同转移潜能乳腺癌细胞的可行性,并分析二者生物学特性差异。方法人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s经过连续人工基质膜侵袭试验后获得高、低转移潜能细胞株,并应用细胞生长曲线测定、侵袭力、黏附率实验,促血管形成实验分析所筛选出的不同转移潜能乳腺癌细胞的生物学性质的差异。结果获得2株转移潜能不同的乳腺癌细胞株,它们具有差异明显的体外生长速度、侵袭力、黏附力和促血管形成能力。结论利用细胞穿透人工基底膜能力的差异能够筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞。 展开更多

关键词 乳腺癌 肿瘤转移 细胞株 生物学特性

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酒精中毒家兔血浆内皮素-1水平变化 被引量：5

7

作者 谢娟 郭坤亮 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期21-23,共3页

目的 :探讨酒精中毒家兔血浆内皮素 - 1(ET - 1,pg/ml)水平的变化。方法 :选用家兔 2 4只 ,随机分为 2组。实验组采用灌胃法给予家兔含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给等量生理盐水 ,分别于 1、2、3、4、5、6个月取血... 目的 :探讨酒精中毒家兔血浆内皮素 - 1(ET - 1,pg/ml)水平的变化。方法 :选用家兔 2 4只 ,随机分为 2组。实验组采用灌胃法给予家兔含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给等量生理盐水 ,分别于 1、2、3、4、5、6个月取血检测血浆ET - 1、丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)的变化。结果 :灌胃 1、2、3月时ET - 1和MDA含量变化无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,4～ 6月时ET - 1和MDA逐渐增加 (4个月P <0 .0 5 ,5、6月P <0 .0 1) ,ET - 1与MDA含量呈正相关性 (r =0 .6 4 ,P<0 .0 1)。 1、2月时SOD变化无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,3～ 6月时SOD活性逐渐降低 (3、4月时P <0 .0 5 ,5、6月P <0 .0 1) ,ET - 1与SOD呈负相关性 (r =- 0 .2 4 ,P <0 .0 5 )。结论 :长期过量饮酒引起的氧自由基作用增强 ,血管内皮素 - 1增加 ,导致血管内皮损伤 ,可能在酒精中毒的发病机制过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 酒精中毒 内皮素—1 丙二醛 超氧化物歧化酶

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阿苯达唑抑制P-糖蛋白表达对耐顺铂卵巢癌细胞耐药性的影响 被引量：4

8

作者 何迎盈 刘娜娜 +1 位作者 罗治彬 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1762-1765,共4页

目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)通过抑制人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达对细胞耐药性的影响。方法在体外,用溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对SKOV-3/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率... 目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)通过抑制人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达对细胞耐药性的影响。方法在体外,用溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对SKOV-3/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率为0%、25%、50%、75%所对应的ABZ浓度,并按抑制率将实验分为对照组,25%抑制浓度(IC25)组、半数抑制浓度(IC50)组和75%抑制浓度(IC75)组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并按作用时间再将每组分为12、24、36 h亚组。分别用流式细胞仪检测各组细胞表面P-gp的表达。将不同浓度的顺铂(cisplatin,DDP)、表阿霉素(epirubicin,EPI)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)按照分组,联合和序贯ABZ处理细胞后,采用MTT比色法检测SKOV-3/DDP细胞体外增殖情况。结果 ABZ作用SKOV3/DDP细胞后使P-gp表达下降,呈浓度和时间依赖性。联合和序贯ABZ均能降低DDP、EPI和5-Fu对SKOV-3/DDP细胞的作用浓度,有浓度和时间依赖性,且联合作用优于序贯作用。结论在体外ABZ通过抑制SKOV-3/DDP细胞P-gp表达提高细胞对DDP、EPI、5-Fu的敏感性,并能逆转细胞的耐药性。 展开更多

关键词 阿苯达唑 P-糖蛋白 耐药性

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MMP-2、MMP-9在高、低转移潜能乳腺癌细胞中的表达变化 被引量：3

9

作者 张涛 陈晓品 +2 位作者 汤为学 彭志平 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期600-603,共4页

目的筛选高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotainese,MMP-2)、MMP-9在高、低转移潜能乳腺癌细胞的表达差异及其意义。方法利用人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s细胞在Transwell小室上连续穿透人工基质膜... 目的筛选高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotainese,MMP-2)、MMP-9在高、低转移潜能乳腺癌细胞的表达差异及其意义。方法利用人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s细胞在Transwell小室上连续穿透人工基质膜获得高、低转移潜能乳腺癌细胞株。用细胞侵袭实验、免疫组化、Western blot方法,测定2株细胞的侵袭能力和MMP-2和MMP-9的表达情况。结果细胞侵袭实验结果显示,侵袭实验20 h时,高转移潜能乳腺癌细胞的侵袭能力[(61.40±7.08)个/视野]强于低转移潜能乳腺癌细胞[(25.34±4.87)个/视野,P<0.05]。免疫组化和图像分析结果显示,MMP-2和MMP-9在高转移潜能乳腺癌细胞中的表达水平[分别为(0.24±0.04)、(0.23±0.05)]高于低转移潜能乳腺癌细胞[分别为(0.16±0.02)、(0.13±0.03),P<0.05]。将免疫组化结果和细胞侵袭实验结果进行Pearson相关分析,结果表明MMP-2、MMP-9的表达水平与穿透Transwell小室的数量呈正相关(r=0.957、r=0.964,P<0.05)。Western blot检测结果也显示,高转移潜能乳腺癌细胞的MMP-2和MMP-9的表达[分别为(0.59±0.14)、(0.67±0.17)]明显高于低转移潜能乳腺癌细胞[分别为(0.31±0.07)、(0.35±0.06),P<0.05]。结论利用细胞穿透人工基底膜能力的差异能够筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞;MMP-2、MMP-9的蛋白表达与乳腺肿瘤的侵袭能力关系密切。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 肿瘤转移 基质金属蛋白酶

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人瘦素在毕赤酵母中的表达及其分离纯化 被引量：4

10

作者 刘先俊 刘方欣 +1 位作者 漆洪波 邹全明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2002年第3期250-252,共3页

目的:为了获得人(瘦素或瘦蛋白)而进一步研究其生理作用、作用机制与病理意义。Leptin方法:采用逆转录-聚合酶链反应()方法,从人腹部皮下脂肪组织中分离脂肪细胞总,经逆转录、扩增出肥胖基因的编码序列RT-PCRRNAPCR(基因),再克隆到表达... 目的:为了获得人(瘦素或瘦蛋白)而进一步研究其生理作用、作用机制与病理意义。Leptin方法:采用逆转录-聚合酶链反应()方法,从人腹部皮下脂肪组织中分离脂肪细胞总,经逆转录、扩增出肥胖基因的编码序列RT-PCRRNAPCR(基因),再克隆到表达载体α中,在毕赤酵母菌株中表达。ObcDNApPICZGS115结果:的扩增产物长度为,克PCR462bp隆后的表达产物,经证实,约为分子量为的特异蛋白条带,与人瘦素的理论预计值相符合,经放免法测定,SDS-PAGE17kD表达量达到。通过其多聚组氨酸接头与金属镍螯合的亲和层析法纯化表达蛋白,在上呈现分子量为的36mg/LSDS-PAGE17kD单一蛋白条带。结论:通过基因工程手段已成功表达出人瘦素并分离纯化得到纯度较高的人瘦素。 展开更多

关键词 人瘦素 毕赤酵母 表达

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阿苯达唑对耐药卵巢癌细胞糖酵解的影响 被引量：2

11

作者 何迎盈 刘娜娜 +1 位作者 罗治彬 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期1426-1429,共4页

目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)对人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞糖酵解的影响。方法通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,求得抑制率分别为0%、25%、50%、75%时所对应的ABZ的浓度,... 目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)对人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞糖酵解的影响。方法通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,求得抑制率分别为0%、25%、50%、75%时所对应的ABZ的浓度,实验分为对照组、IC25组、IC50组和IC75组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并且按照ABZ作用时间再将每组分为12、24、36 h亚组。按照分组,在设定的时间点,分别用比色法测定己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性,用酶标仪法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性,用RT-PCR法测定Akt mRNA和Myc mRNA的表达。结果经过不同浓度的ABZ处理SKOV-3/DDP细胞发现,ABZ能抑制SKOV-3/DDP细胞体外生长(P<0.05),呈剂量依赖性,抑制率为0%所对应的ABZ浓度为0μmol/L,抑制率25%的浓度(IC25)为(1.43±0.21)μmol/L,抑制率50%的浓度(IC50)为(8.64±0.74)μmol/L,抑制率75%的浓度(IC75)为(52.48±3.99)μmol/L。与对照组相比,经过ABZ处理的SKOV-3/DDP细胞的HK、PK、LDH活性明显降低(P<0.05),且Akt基因和Myc基因的表达下调(P<0.05)。结论 ABZ能够抑制SKOV-3/DDP细胞糖酵解酶活性,并能下调糖酵解相关基因的表达。 展开更多

关键词 耐药卵巢癌细胞 阿苯达唑 糖酵解

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^(99m)Tc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像研究 被引量：2

12

作者 段东 朱玉泉 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期695-699,共5页

目的:评价99mTc标记的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(Monoclone antibody,McAb)用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像(Radioimmunoimaging,RII)效果,并进行相关比较分析。方法:①建立荷人肺腺癌裸鼠... 目的:评价99mTc标记的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(Monoclone antibody,McAb)用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像(Radioimmunoimaging,RII)效果,并进行相关比较分析。方法:①建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;②采用99mTc直接标记法标记抗EGFR的单克隆抗体,并对标记抗体的特性进行鉴定;③利用99mTc-EGFR-McAb进行荷人肺腺癌裸鼠模型的RII及体内分布研究。结果:99mTc对EGFR-McAb的标记率为91.5%±3.8%,标记抗体比活度为(2.8±0.2)MBq/μg,放射化学纯度为96.5%±3.2%。放射免疫显像结果显示,99mTc-EGFR-McAb对肿瘤组织有较高的亲和性,通过感兴趣区(Regional interest,ROI)技术测得T/NT比值为2.74±0.5,明显高于对照组(P<0.05)。标记抗体的体内分布结果与显像结果基本一致。结论:99mTc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像能得到较理想的靶/非靶比值,EGFR是肺腺癌放射免疫显像研究值得推荐的目标抗原。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 放射免疫显像 单克隆抗体 肺肿瘤

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人源肺腺癌单链抗体基因文库的构建 被引量：2

13

作者 庞华 罗弋 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第11期1284-1287,共4页

目的:制备人源抗肺腺癌单链抗体(Single-chain variable fragment,scFv)基因文库。方法:利用肺腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过"剪切重叠延伸PCR"(Splicingo... 目的:制备人源抗肺腺癌单链抗体(Single-chain variable fragment,scFv)基因文库。方法:利用肺腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过"剪切重叠延伸PCR"(Splicingover-lapping extend PCR,SOE-PCR)而形成scFv基因片断。将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。结果:肺腺癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为370bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为750bp。PCR连接产物的转化效率为2.2×107CFU/μg,scFv的阳性插入率为83.3%(20/24)。结论:成功地构建了人源抗肺腺癌scFv基因片断,为进一步筛选人源抗肺腺癌scFv库提供了试验基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 肺腺癌 构建

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环氧化酶抑制剂对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用研究 被引量：2

14

作者 刘方欣 张玉诺 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期564-566,580,共4页

目的:研究环氧化酶抑制剂阿司匹林和选择性环氧化酶2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:用阿司匹林和尼美舒利分别作用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法观察其生长抑制作用;免疫组化... 目的:研究环氧化酶抑制剂阿司匹林和选择性环氧化酶2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:用阿司匹林和尼美舒利分别作用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法观察其生长抑制作用;免疫组化法检测阿司匹林和尼美舒利作用后MDA-MB-231细胞中COX-2和c-erbB-2的表达情况。结果:阿司匹林和尼美舒利能够抑制MDA-MB-231细胞的生长,并呈时间-剂量依赖型。COX-2在MDA-MB-231细胞中表达呈阳性,免疫组化发现细胞内c-erbB-2表达下降。结论:环氧化酶抑制剂能够有效的抑制肿瘤细胞的生长,其机制可能与下调c-erbB-2基因的表达有关。 展开更多

关键词 环氧化酶抑制剂 选择性环氧化酶2抑制剂 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231

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PET/CT融合图像诊断甲状腺癌——与CT、SPECT或PET的比较研究 被引量：1

15

作者 文明 李少林 +4 位作者 罗天友 彭云 蒋明东 彭志平 陈刚 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2005年第10期1595-1598,共4页

目的通过与CT、SPECT或PET的对比研究,探讨PET/CT诊断甲状腺癌的价值。方法收集经随访、手术或活检、病理证实的甲状腺癌12例,CT检查12例,SPECT检查5例,PET检查7例,PET/CT检查12例,分别观察、记录病灶数目、位置、大小、核素分布、钙化... 目的通过与CT、SPECT或PET的对比研究,探讨PET/CT诊断甲状腺癌的价值。方法收集经随访、手术或活检、病理证实的甲状腺癌12例,CT检查12例,SPECT检查5例,PET检查7例,PET/CT检查12例,分别观察、记录病灶数目、位置、大小、核素分布、钙化等。结果12例共有病灶19个,CT显示病灶13个,SPECT静态显像发现病灶6个,灌注显像全部病灶血流灌注增加,PET发现放射性浓聚影9个,PET/CT见到异常高代谢区19个。结论CT图像能清晰显示病变形态、密度;核医学图像可提供病灶代谢信息;PET/CT图像可同时观察病灶解剖与功能信息,提高了定位、定性诊断能力。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 体层摄影术 X线计算机 体层摄影术 发射型计算机 单光子发射计算机断层 图像融合

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^(99)Tc^m-ASON-EGF的制备及其药代动力学研究 被引量：1

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作者 黄家君 董孟杰 +1 位作者 谢娟 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2309-2312,共4页

目的研究99Tcm-ASON-EGF药物的制备及其在健康兔体内的药代动力学特征。方法制备99Tcm-ASON-EGF,用放射性计数法测定兔血药浓度变化;采用3p97软件处理数据,根据AIC值、R2值、1/c与F检验,判断药物客观符合的房室模型;随后,求出其分布半... 目的研究99Tcm-ASON-EGF药物的制备及其在健康兔体内的药代动力学特征。方法制备99Tcm-ASON-EGF,用放射性计数法测定兔血药浓度变化;采用3p97软件处理数据,根据AIC值、R2值、1/c与F检验,判断药物客观符合的房室模型;随后,求出其分布半衰期、消除半衰期、中央室分布容积、总表观分布容积、总清除率;最后用三氯醋酸法测定其血浆蛋白结合率。结果99Tcm-ASON-EGF的最佳房室模型是二室模型,其分布半衰期是5.28min;消除半衰期是89.23min;中央室分布容积是67.8ml;总表观分布容积是915.6ml;总清除率是7.1ml/min。与人血浆孵育1.5h后,血浆蛋白结合率为10.69%。结论99Tcm-ASON-EGF在健康兔体内的转运过程符合二室模型,具有良好的药代动力学特征。 展开更多

关键词 药物代谢动力学 锝放射性同位素 表皮生长因子 反义寡核苷酸

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重组人瘦素的分离纯化 被引量：1

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作者 刘先俊 刘方欣 漆洪波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期451-453,476,共4页

目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ... 目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ,随后通过疏水层析纯化后 ,产物纯度达到 96 .2 %。经SDS -PAGE证实为单一蛋白条带。结论 :通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。 展开更多

关键词 重组人瘦素 分离 纯化 疏水层析 强阴离子交换柱

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人源乳腺癌单链抗体基因的构建

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作者 唐树彬 段红 +2 位作者 蒲军 李少林 彭志平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期787-789,共3页

目的:构建人源抗乳腺癌单链抗体(scfv)基因片断。方法:首先利用乳腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,然后通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过“重叠-延伸-拼接PCR”(SOE-PCR)而形成单链抗体(scfv)基因片断... 目的:构建人源抗乳腺癌单链抗体(scfv)基因片断。方法:首先利用乳腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,然后通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过“重叠-延伸-拼接PCR”(SOE-PCR)而形成单链抗体(scfv)基因片断。结果:构建了750bp的人源抗乳腺癌单链抗体(scfv)基因片断。结论:成功地构建了人源抗乳腺癌单链抗体基因片断,为进一步构建人源抗乳腺癌单链抗体库提供了试验基础。 展开更多

关键词 乳腺癌 单链抗体 构建

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三羟基异黄酮联合放疗对人肺腺癌细胞增殖凋亡的影响

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作者 周芊 李少林 +3 位作者 杨镇洲 王东 李梦侠 曾林立 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期2008-2011,共4页

目的观察三羟基异黄酮(Genistein)联合放疗对人肺腺癌细胞A549增殖凋亡及其Ape1/Ref1蛋白的影响。方法 1组单用0、10、30、60、90μmol/L的Genistein处理A549细胞48 h,另1组用同样浓度的Genistein预处理24 h后予以直线加速器放疗8 Gy,... 目的观察三羟基异黄酮(Genistein)联合放疗对人肺腺癌细胞A549增殖凋亡及其Ape1/Ref1蛋白的影响。方法 1组单用0、10、30、60、90μmol/L的Genistein处理A549细胞48 h,另1组用同样浓度的Genistein预处理24 h后予以直线加速器放疗8 Gy,继续培养24 h后用噻唑蓝比色法(MTT)检测各组活细胞数,确定最适Genistein联合放疗的浓度。用流式细胞仪检测对照组、单纯放疗组(IR 8 Gy)、单纯Genistein组(GEN 30μmol/L)、Genistein+IR组(GEN30μmol/L+IR 8 Gy)的细胞凋亡;采用Western blot法检测各组细胞中Ape1/Ref1蛋白表达。结果 30、60、90μmol/L的Genistein联合放疗比单用相应浓度的Genistein处理细胞增殖抑制率高(P<0.05),但低浓度10μmol/L联合放疗与单纯放疗比较差异不明显[(26.67±1.26)%vs(24.70±0.72)%,P=0.102]。IR组、Genistein+IR组早期凋亡率较对照组明显增高[(30.88±7.63)%、(42.98±1.46)%vs(6.80±0.98)%,P<0.05],加药组较对照组无明显统计学差异[(12.96±4.99)%vs(6.80±0.98)%,P=0.143)];与对照组、单纯放疗组、单纯加药组比,Genistein+IR组中Ape1/Ref1的表达明显下调。结论三羟基异黄酮可增加放疗对A549细胞的增殖抑制作用,可能与减少Ape1/Ref1蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 三羟基异黄酮 人肺腺癌A549细胞 Ape1/Ref1蛋白表达

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抑制c-raf-1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

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作者 任庆兰 吴永忠 +1 位作者 陈晓品 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第9期946-950,共5页

目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化。用集落形成试... 目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化。用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达。结果:c-raf-1反义寡核苷酸能有效抑制c-raf-1癌基因的表达,经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白的表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P<0.01)。结论:c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性。其辐射增敏作用可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了辐射抵抗信号转导途径。 展开更多

关键词 人宫颈癌细胞株HeLa C-RAF-1 反义技术 放射敏感性

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