幽门螺杆菌空泡毒素分子生物学研究进展

1

作者 陈全 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第4期467-470,共4页

关键词 出门螺杆菌 空泡毒素 分子生物学 VACA基因 基因多态性

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幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段的克隆与表达 被引量：12

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作者 刘淼 杨致邦 +1 位作者 林珊珊 吴利先 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第6期720-723,共4页

目的 :通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法 :利用PCR从幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段V ,克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达 ,用免疫印迹法 (Westernblotting)检测其抗原性。结... 目的 :通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法 :利用PCR从幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段V ,克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达 ,用免疫印迹法 (Westernblotting)检测其抗原性。结果 :序列分析所得片段完整 ,与标准株AF36 170 0比较有 1.5 %的bp及一个氨基酸发生变异。与文献报道的中国菌株相比有高度的同源性。SDS -PAGE显示表达产物相对分子量为 2 70 0 0 ,表达量为 30 %以上 ,Westernblotting显示该蛋白可被HP全菌抗血清所识别。结论 :基因重组Hp细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性 ,可用于制备Hp感染的诊断试剂与疫苗。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 空泡毒素 基因克隆 表达

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糖原测定法诊断女性生殖道沙眼衣原体感染 被引量：19

3

作者 杨春 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1998年第4期382-384,共3页

用糖原测定法诊断生殖道沙眼衣原体(Ct)感染。用蒽酮法检测女性生殖道上皮细胞内糖原的含量,并与诊断沙眼衣原体感染的聚合酶链反应(PCR)法作比较。320例宫颈标本的检测结果与 PCR 比较,糖原测定法诊断 Ct感染的敏感性为84.8%,特异性为9... 用糖原测定法诊断生殖道沙眼衣原体(Ct)感染。用蒽酮法检测女性生殖道上皮细胞内糖原的含量,并与诊断沙眼衣原体感染的聚合酶链反应(PCR)法作比较。320例宫颈标本的检测结果与 PCR 比较,糖原测定法诊断 Ct感染的敏感性为84.8%,特异性为96.5%.糖原测定法是一种简便、快速的诊断 Ct 感染的方法,适宜基层医疗单位采用。 展开更多

关键词 糖原 聚合酶链反应 沙眼衣原体 女性 生殖系统

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重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫在小鼠体内的分布与表达 被引量：2

4

作者 杨春 何永林 +3 位作者 伊正君 李俊明 李娜 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期470-473,共4页

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫在小鼠体内的分布与表达。方法:将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因质粒(pUV15)的重组耻垢分枝杆菌滴鼻BALB/c小鼠后2周,处死小鼠,观察肺、脾... 目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫在小鼠体内的分布与表达。方法:将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因质粒(pUV15)的重组耻垢分枝杆菌滴鼻BALB/c小鼠后2周,处死小鼠,观察肺、脾组织中荧光蛋白和耻垢分枝杆菌的分布;将携带GLS和IL-12质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,第1次免疫后4周,处死小鼠,用免疫组化检测肺、脾组织中GLS表达,用ELISA检测血清IL-12和肺泡灌洗液特异性SIgA的水平。结果:在BALB/c小鼠肺、脾组织中均检测到绿色荧光蛋白和耻垢分枝杆菌的分布,以及GLS的表达,并有血清IL-12水平升高和粘膜特异性SIgA的产生。结论:携带GFP的重组耻垢分枝杆菌可在肺和脾组织分布;携带GLS和IL-12的重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫小鼠后,可引起呼吸道粘膜特异性抗菌免疫,以及GLS和IL-12的体内表达,为新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 GLS IL-12 耻垢分枝杆菌 鼻粘膜免疫

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重组人白血病抑制因子对HL-60细胞的作用及机制研究 被引量：5

5

作者 杜冰 朱道银 唐恩洁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期270-272,共3页

目的 :观察rh -LIF对HL - 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法 :不同剂量的rh -LIF作用HL -6 0细胞 3- 6天 ,观察细胞生长 ,流式细胞术分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3,P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA... 目的 :观察rh -LIF对HL - 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法 :不同剂量的rh -LIF作用HL -6 0细胞 3- 6天 ,观察细胞生长 ,流式细胞术分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3,P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA表达水平的改变。结果 :rh -LIF可诱导HL - 6 0细胞向单核 /巨噬细胞分化 ,抑制HL - 6 0细胞的增殖 ,使细胞停滞于G1期 :P5 3,P2 1蛋白和P5 3mRNA表达明显增强。结论 :rh -LIF对HL - 6 0细胞具增殖抑制和诱导分化作用 ,其作用机制可能与G1期阻滞及P5 3,P2 1表达增高有关。 展开更多

关键词 重组人白血病抑制因子 诱导分化 生长抑制

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结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建和表达 被引量：2

6

作者 陈全 朱道银 +2 位作者 骆旭东 蒋英 江山 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期284-287,333,共5页

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTb) 1hp -esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达。方法 :用GeneSOEing法 ,将1hp基因和esat6基因体外重组 ,构建融合基因 ,克隆入pQE30质粒中进行表达。 结果 :构建的融合基因经测序证实完全正确 ,重组体... 目的 :构建结核分枝杆菌 (MTb) 1hp -esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达。方法 :用GeneSOEing法 ,将1hp基因和esat6基因体外重组 ,构建融合基因 ,克隆入pQE30质粒中进行表达。 结果 :构建的融合基因经测序证实完全正确 ,重组体转化表达菌DH5α后 ,经过IPTG诱导 ,表达出 2 6kDa左右的CFP10 -ESAT6融合蛋白。SDS -PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h表达量最高 ,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中 ,表达量占全菌蛋白质的 4 0 % ,Westernblotting证实其有良好的抗原性。表达蛋白经过Ni-NTA柱纯化后 ,获得了纯度为 98%的重组蛋白。结论 :成功构建MTblhp -esat6融合基因 ,成功构建原核表达载体pQE30 -CFP10 -ESAT6 ,并获得重组CFP10 -ESAT6融合蛋白 ,为MTb重组抗原的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 1hp—esat6融合基因 重组CFP10一ESAT6 原核表达

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龟分枝杆菌药物敏感性与耐药性探讨 被引量：2

7

作者 杨致邦 陈清凤 +1 位作者 李华平 陈全 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第3期247-249,共3页

目的：探讨龟分枝杆菌对抗生素的敏感性和耐药机理。方法：从我市工厂医院院内感染标本中分离龟分枝杆菌１２株。用琼脂扩散法测定抗生素的敏感性，用滤纸片法进行联合药敏试验，并提取、鉴定质粒，用氟哌酸消除质粒。结果：４２种抗生... 目的：探讨龟分枝杆菌对抗生素的敏感性和耐药机理。方法：从我市工厂医院院内感染标本中分离龟分枝杆菌１２株。用琼脂扩散法测定抗生素的敏感性，用滤纸片法进行联合药敏试验，并提取、鉴定质粒，用氟哌酸消除质粒。结果：４２种抗生素中，３株龟分枝杆菌龟亚种对大多数氟喹诺酮类、氨基糖甙类的抗生素敏感。对抗结核药利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇敏感。９株脓肿亚种对大多数氨基糖甙类的抗生素敏感，对氟喹诺酮类的环丙沙星敏感，对多数抗结核药耐药。在药物间均为无关作用。从６株脓肿亚种中提取出一个９．１ｋｂ质粒，消除质粒后耐药性不变。结论：龟分枝杆菌是一种对多种抗生素耐药的细菌，药物敏感性差异较大。 展开更多

关键词 龟分枝杆菌 抗生素 质粒 药敏试验 耐药性

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结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达 被引量：1

8

作者 陈全 骆旭东 +2 位作者 蒋英 江山 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,共4页

目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经... 目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa左右重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42％,用Western blotting证实其有良好的抗原性。经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92％的重组蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 基因原核表达载体 克隆 重组ESAT6蛋白

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从剖宫者产羊水和宫颈标本中检出沙眼衣原体的研究 被引量：2

9

作者 杨春 邝富国 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第2期142-143,161,共3页

目的 :本文通过检查配对母胎标本中的沙眼衣原体 (Ct) ,拟探讨Ct垂直传播的机制。方法 :应用细胞培养 ,聚合酶链反应 (PCR)检查配对母胎标本 (宫颈、羊水、新生儿睑结膜 )中的沙眼衣原体 (Ct)。结果 :10 2例剖宫产配对母胎标本中 ,宫颈... 目的 :本文通过检查配对母胎标本中的沙眼衣原体 (Ct) ,拟探讨Ct垂直传播的机制。方法 :应用细胞培养 ,聚合酶链反应 (PCR)检查配对母胎标本 (宫颈、羊水、新生儿睑结膜 )中的沙眼衣原体 (Ct)。结果 :10 2例剖宫产配对母胎标本中 ,宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阳性有 2 4例。宫颈阴性、羊水、新生儿睑结膜阳性共 6例。宫颈阳性、羊水、新生儿睑结膜阴性共4例。宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阴性有 6 8例。孕妇的Ct感染率 2 7.5 % (2 8/ 10 2 ) ,胎儿的Ct感染率为 2 9.4% (30 / 10 2 )。结论 :Ct宫颈感染与羊水细胞感染有非常显著的相关性 (P <0 .0 0 5 )。孕妇的Ct感染可导致胎儿感染 。 展开更多

关键词 沙眼衣原体 PCR 羊水 剖腹产 宫内感染

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抗单链DNA单克隆抗体的制备及应用 被引量：1

10

作者 赵明才 朱道银 唐恩洁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2002年第2期145-147,共3页

目的:制备特异性的抗单链单克隆抗体,为建立一种特异、敏感、简便的细胞凋亡检测方法奠定基础。DNA方法:根据烷化剂盐酸氮芥能特异性地修饰小牛胸腺链上的鸟嘌呤而暴露互补链上的胞嘧啶这一特性,将修饰后的DNA(G)(C)小牛胸腺连于甲基化... 目的:制备特异性的抗单链单克隆抗体,为建立一种特异、敏感、简便的细胞凋亡检测方法奠定基础。DNA方法:根据烷化剂盐酸氮芥能特异性地修饰小牛胸腺链上的鸟嘌呤而暴露互补链上的胞嘧啶这一特性,将修饰后的DNA(G)(C)小牛胸腺连于甲基化的牛血清白蛋白上制备成完全抗原,免疫小鼠获得特异性的抗单链单克隆抗体,并对DNABALB/cDNA单抗的类别和特异性进行鉴定;用叠氮钠和抗肿瘤药物诱导了细胞的坏死和凋亡,利用所制备的抗单链单克VP-16HL60DNA隆抗体对其进行检测,并与形态学方法、凝胶电泳法和法进行了比较。TUNEL结果:所制备的抗单链单克隆抗体能与羊DNA抗小鼠发生特异性反应,且能与凋亡细胞特异性结合,而不结合坏死细胞。IgM结论:所制备的单抗为型,利用其能特异IgM地结合单链的特性,可用于检测细胞凋亡,简便、有效地区别细胞凋亡和坏死。 展开更多

关键词 单克隆抗体 凋亡 单链DNA 氮芥

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幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病 被引量：1

11

作者 田一玲 杨致邦 余歌军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第2期253-255,共3页

目的:探讨幽门螺杆菌(H .pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系。方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H .pylori,PCR测定VacA基因型。结果:10 8株H .pylori菌株,VacAs1a阳性为85株( 79% ) ,VacAs1b阳性2 2株( 2 0 ... 目的:探讨幽门螺杆菌(H .pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系。方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H .pylori,PCR测定VacA基因型。结果:10 8株H .pylori菌株,VacAs1a阳性为85株( 79% ) ,VacAs1b阳性2 2株( 2 0 % ) ,VacAm1阳性2 9株( 2 7% ) ,VacAm2阳性77株( 71% ) ,VacAs1a/m2阳性6 6株( 6 1.1% ) ,未发现s2型菌株。其中,慢性胃炎患者VacAs1a阳性率为6 5 .4 % ( 34/ 5 2 ) ,消化性溃疡患者VacAs1a阳性率为90 % ( 36 / 4 0 ) ,胃癌患者VacAs1a阳性率为94 % ( 15 / 16 )。结论:H .pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素基因 聚合酶链反应 胃肠疾病

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用结核分枝杆菌HSP70启动子构建分枝杆菌穿梭表达质粒的研究

12

作者 陈全 朱道银 +2 位作者 骆旭东 蒋英 江山 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第6期697-700,共4页

目的 :用结核分枝杆菌HSP70 (Heatshockprotein70 ,HSP70 )启动子改建分枝杆菌穿梭质粒 pJEM11为分枝杆菌穿梭表达质粒。方法 :利用聚合酶链反应 (Polymerasechainreaction ,PCR)扩增H37Rv基因组 4 196 0 7～ 4 19835位的HSP70启动子及... 目的 :用结核分枝杆菌HSP70 (Heatshockprotein70 ,HSP70 )启动子改建分枝杆菌穿梭质粒 pJEM11为分枝杆菌穿梭表达质粒。方法 :利用聚合酶链反应 (Polymerasechainreaction ,PCR)扩增H37Rv基因组 4 196 0 7～ 4 19835位的HSP70启动子及调控序列 ,末端引入一个多克隆位点 (Multipleclonesites ,MCS) ,再定向克隆入 pJEM 11的ApaI位点与XbaI位点之间 ,构建pJCH0 2载体 ,并对载体进行酶切鉴定及序列测定。将lhp -esat6融合基因克隆入 pJCH0 2载体 ,评价其在BCG中的表达情况。结果 :HSP70启动子、调控序列及引入的多克隆位点完全正确 ,lhp -esat6基因在BCG中成功表达。 结论 :成功改建穿梭质粒 pJEM11为穿梭表达质粒 pJCH0 2。本研究为构建BCG多价疫苗奠定了基础. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 启动子 基因表达

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肠道病毒D68型感染前后转录组分析及差异表达基因的验证 被引量：4

13

作者 唐霞 司俊卓 +5 位作者 卢楠 何永林 徐蕾 包嘉佳 唐佳玲 杨春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期275-282,共8页

目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人... 目的探讨肠道病毒D68型(enterovirus D68, EV-D68)感染前后宿主细胞转录组的表达变化,寻找与EV-D68感染的相关基因及信号通路,为初步探索EV-D68的感染机制奠定基础。方法将病毒以感染复数(multiplicity of infection,MOI)0.01接种于人横纹肌瘤(rhabdomyosarcoma, RD)细胞,24 h后提取感染组和对照组细胞总RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),对其进行GO和KEGG富集分析,并用RT-qPCR验证8个主要差异表达的基因(EGR1、c-fos、ZNF625、ARRDC3、c-jun、ASNS、CHAC1、ADM2)。结果从测序结果中共筛选出差异表达两倍以上的基因140个,其中上调基因71个,下调基因69个。GO功能富集分析结果主要涉及离子的调控与应答;KEGG富集分析结果主要与甲状旁腺激素的合成分泌和作用、GnRH信号通路、Toll样受体信号通路、IL-17信号通路和MAPK信号通路等有关。RT-qPCR验证结果表明选取的8个基因上调或下调的差异表达倍数趋势与测序结果基本一致,c-fos和c-jun的表达量随病毒MOI及感染时长的增加而增加。结论通过对差异表达基因的功能和信号通路富集分析及验证,EV-D68加重哮喘的机制可能与c-fos上调有关;而MAPK信号通路可能在EV-D68感染期间发挥促炎作用和抗病毒作用。 展开更多

关键词 EV-D68 转录组测序 差异表达基因

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