肿瘤患者外周血活化血小板测定及其临床意义 被引量：7

1

作者 郭金英 陈彦 +3 位作者 文阳安 姜习新 刘靳波 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期510-512,共3页

目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血... 目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于非肿瘤患者(P<0.05),有血栓形成的肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于无血栓形成的肿瘤患者(P<0.05),有血栓的肿瘤患者的活化血小板经过阿司匹林干预治疗后明显下降(P<0.05)。结论:测定活化血小板可以预测肿瘤患者存在高凝状态风险性的大小。同时,服用小剂量肠溶阿司匹林可以降低外周血活化血小板CD62p和CD63的值。 展开更多

关键词 活化血小板(CD62P和CD63) 阿司匹林 恶性肿瘤 血栓

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应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT_3)化学发光法 被引量：6

2

作者 孔海霞 刘萍 +3 位作者 田云霞 宋启超 王世鑫 翁亚光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期201-205,共5页

目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum ... 目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)。用FITC标记T3-类似物。采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较。将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elec-sys 2010)定量结果进行比较。结果抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性。应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R>0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r=0.962 2,两者的测定值无显著性差异。结论制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测。 展开更多

关键词 异硫氰酸荧光素 非均衡竞争 游离三碘甲腺原氨酸 类似物 多克隆抗体 化学发光分析法

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毒力蛋白CbpA抗肺炎链球菌侵袭性感染的实验研究 被引量：1

3

作者 王箭 曹炬 +2 位作者 陈婷梅 王虹 尹一兵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期483-487,共5页

目的:原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32(a)原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;C... 目的:原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32(a)原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;CbpA蛋白抗原主动和抗体被动免疫BALB/c小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击,监测其生存时间。结果:获得了原核表达的重组抗原蛋白,Western blot鉴定证实为目的蛋白,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白。主动和被动免疫BALB/c小鼠后,TIGR4型肺炎链球菌攻击,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义。结论:CbpA蛋白免疫小鼠后可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,CbpA蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗。 展开更多

关键词 抗原 肺炎链球菌 CbpA

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Mad1对膀胱肿瘤作用的体内实验研究 被引量：1

4

作者 胡宏波 罗春丽 +3 位作者 唐敏 蔡晓钟 赵培 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第9期919-921,958,共4页

目的:在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型,观察转染Mad1表达质粒后对膀胱肿瘤增殖的抑制作用。方法:MNU对SD大鼠进行膀胱灌注诱发膀胱肿瘤,荷瘤动物随机分为3组:Mad1转染组(A组),空载体转染组(B组)和生理盐水转染组(C组)。通过大鼠重量(RBW)... 目的:在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型,观察转染Mad1表达质粒后对膀胱肿瘤增殖的抑制作用。方法:MNU对SD大鼠进行膀胱灌注诱发膀胱肿瘤,荷瘤动物随机分为3组:Mad1转染组(A组),空载体转染组(B组)和生理盐水转染组(C组)。通过大鼠重量(RBW)、膀胱绝对重量(BAW)、膀胱相对重量(BRW)、Mad1和TERT mRNA表达水平等指标,用流式细胞仪等检测手段,比较转染前后Mad1和TERT的表达差异、观察Mad1对膀胱肿瘤增殖的抑制作用以及探讨相应的机理。结果:成功在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型。A组与B、C两组相比RBW无显著性差异(P>0.05),但BAW和BRW分别有非常显著差异性(P<0.01)及显著差异性(P<0.05);Mad1mRNA相对表达量明显增加;TERT mRNA相对表达量明显降低;流式细胞仪显示G0/G1期细胞显著增加(P<0.01),S期细胞显著减少(P<0.01).结论:高表达的Mad1能抑制膀胱肿瘤的增殖。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 动物模型 细胞周期 转染

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藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖抑制作用 被引量：7

5

作者 罗春丽 赵培 +3 位作者 胡宏波 吕纯芳 冀慧莹 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第11期1305-1308,共4页

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌是否具有增殖抑制作用。方法:MTT法检测藏花素对T24细胞增殖的影响;应用形态学手段观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学。荷瘤小鼠模型建立,测定藏花素处理后荷瘤小鼠体内... 目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌是否具有增殖抑制作用。方法:MTT法检测藏花素对T24细胞增殖的影响;应用形态学手段观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学。荷瘤小鼠模型建立,测定藏花素处理后荷瘤小鼠体内抑瘤率。结果:藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;藏花素作用后G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例逐渐减少;对照组裸鼠肿瘤的平均体积明显大于藏花素处理组裸鼠肿瘤的平均体积,其差异具有显著性(P<0.05),裸鼠生长抑制率为27.8%。结论:体内外实验证明,藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖有抑制作用。 展开更多

关键词 藏花素 膀胱移行细胞癌 T24细胞 增殖抑制

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普萘洛尔对映异构体诱导HUVEC细胞的蛋白质表达谱差异 被引量：7

6

作者 毛小琴 邱峰 +2 位作者 邱宗荫 陈世知 贾雄飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期165-171,共7页

手性药物只能通过严格的手性识别才能选择性地与特定生物大分子相互作用,在药动学、药效学等方面上表现出手性特征.以非选择性β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(PRO)的对映异构体R(+)/S(-)-PRO为模型药物,分别作用于人脐静脉内皮细胞(HUV... 手性药物只能通过严格的手性识别才能选择性地与特定生物大分子相互作用,在药动学、药效学等方面上表现出手性特征.以非选择性β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(PRO)的对映异构体R(+)/S(-)-PRO为模型药物,分别作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),提取全细胞蛋白质,经双向电泳、MALDI-TOF-MS、SWISSPROT数据库分析鉴定差异表达蛋白质;共筛选出22个差异表达蛋白质点,鉴定了HSP86、HSP84、GRP75、KLC18、KBTB2、TGM2、GBLP、GCNT2、RAB36、KLH34等10种蛋白质.研究表明,PRO对映异构体可引起广泛的基因表达改变,涉及信号分子、代谢酶、骨架蛋白、伴侣蛋白等,且具有显著的手性特征,这可能与PRO显著的手性生物学特征有紧密联系,但仍需开展进一步深入研究,以明确产生PRO手性生物学特征的多种途径和机制.蛋白质组学技术为深入了解药物的手性生物学特征及其作用机制提供了新的思路和策略,对手性药物开发和临床合理用药有着重要的意义. 展开更多

关键词 普萘洛尔 对映异构体 蛋白质组学 立体选择性 人脐静脉内皮细胞

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VEGF对白血病树突状细胞抗原提呈能力的影响 被引量：5

7

作者 张伶 李维 +1 位作者 涂植光 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1587-1590,共4页

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)对白血病源树突状细胞(dendrit-ic cell,DC)抗原提呈能力的影响及其分子机制。方法K562细胞经5μmol/LVEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)处理24h,ELISA和免疫组化检测V... 目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)对白血病源树突状细胞(dendrit-ic cell,DC)抗原提呈能力的影响及其分子机制。方法K562细胞经5μmol/LVEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)处理24h,ELISA和免疫组化检测VEGF蛋白水平。以正常K562细胞诱生的白血病DC作为对照组,利用流式细胞术和混合淋巴细胞反应,观察AS-ODN处理的白血病DC的免疫表型及其刺激T细胞增殖的能力。采用荧光素酶检测系统和RT-PCR分析培养12h时白血病DC内NF-κB转录活性和Flt-1mRNA水平。结果AS-ODN处理使K562细胞VEGF蛋白分泌量较K562细胞组显著下降(P<0.05)。与K562-DC比较,AS-ODN处理的免疫表型(CD40、CD86、CD83、HLA-DR)表达明显上调。在不同DC/T值(1:10～1:40)时,MLR实验中AS-K562-DC组刺激指数(SI)明显高于对照组(P<0.05)。此外,培养12h时AS-K562-DCNF-κB转录活性较K562-DC明显增高(P<0.05),而Flt-1mRNA水平未见明显改变。结论反义寡核苷酸可抑制白血病细胞VEGF表达,下调VEGF能够增强白血病DC免疫表型的表达,提高DC抗原提呈能力。 展开更多

关键词 白血病 血管内皮生长因子 反义寡核苷酸 树突状细胞 核因子ΚB

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人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备 被引量：3

8

作者 陈婷梅 俸家富 +2 位作者 曹炬 文阳安 涂植光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期938-940,共3页

目的构建人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备CysC抗血清。方法从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32(a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3... 目的构建人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备CysC抗血清。方法从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32(a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA、Western blot进行检测。结果测序证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符;SDS-PAGE、Western blot结果证实获得相对分子质量为35×103的Cys C融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶8000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论获得了Cys C重组蛋白及特异性多克隆抗体。 展开更多

关键词 胱抑素C 原核表达系统 蛋白纯化 抗血清

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家蝇幼虫抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌活性 被引量：3

9

作者 陈曼 文阳安 +2 位作者 刘银河 周义文 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1430-1433,共4页

目的:观察抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌作用。方法:超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外实验分析抗菌肽的抑菌特性。取ICR小鼠30只,切除背部1cm×1cm全层皮肤,涂抹阴沟肠杆菌菌液作为感染模型,随机分为3组... 目的:观察抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌作用。方法:超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外实验分析抗菌肽的抑菌特性。取ICR小鼠30只,切除背部1cm×1cm全层皮肤,涂抹阴沟肠杆菌菌液作为感染模型,随机分为3组。伤后2h和每天各组分别用等渗生理盐水、100g/L的磺胺米隆或0.1g/L抗菌肽滤纸湿敷,伤前和伤后3d抽血观察白细胞变化;伤后3d痂下肌肉组织细菌定量和计算存活率。结果:抗菌肽纯化蛋白对阴沟肠杆菌的抑菌活性较强;术后3组白细胞记数均减少,对照组显著低于其他两组(P<0.05);痂下肌肉组织细菌定量抗菌肽组(99±32)×102CFU/g和磺胺米隆组(87±31)×102CFU/g,均显著低于对照组(504±338)×103CFU/g(P<0.01);对照组伤后3d存活率明显少于其他两组(P<0.05)。结论:超声处理能诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,其对阴沟肠杆菌感染的ICR小鼠创面有较强抗感染作用。 展开更多

关键词 家蝇 抗菌肽 超声诱导 伤口感染 阴沟肠杆菌

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肺炎链球菌毒力因子ClpP蛋白酶的体外表达及纯化 被引量：6

10

作者 袁军 陈曜 +1 位作者 曹炬 尹一兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1753-1755,共3页

目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍... 目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性,真空冷冻干燥保存。结果测序结果证实克隆的基因与GenBank中的序列相符,Western blot证实获得了ClpP融合蛋白。结论获得了高表达的重组抗原蛋白,经镍柱纯化后纯度可达90%以上。 展开更多

关键词 毒力因子 肺炎链球菌 ClpP蛋白

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家蝇幼虫抗菌肽的超声诱导及分离纯化和活性研究 被引量：5

11

作者 陈曼 文阳安 +1 位作者 周义文 涂植光 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期107-109,127,共4页

目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM... 目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM-Sepharose离子交换层析,冷冻干燥浓缩等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质。用Tricine-SDS-PAGE鉴定抗菌肽的纯度和性质,抑菌试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果:300W,50Hz超声处理60s能够诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子量大约为5.8kD。纯化蛋白对阴沟肠杆菌,绿脓杆菌等G-杆菌的抑菌活性较强,而对金黄色葡萄球菌效果不显著。结论:诱导和纯化了一种家蝇幼虫抗菌肽,为此类活性物质的分离纯化提供了有效的方式。 展开更多

关键词 家蝇 抗菌肽 分离纯化 超声诱导

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血管性痴呆大鼠行为学及海马CA1区CREB改变的研究 被引量：7

12

作者 韦永琼 曾照芳 +1 位作者 陈力学 申崇标 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期78-80,共3页

目的:观察缺血性痴呆(VD)大鼠神经行为学及海马CREB的改变,并探讨两者间的关系。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎(2 vessels obstruction,2-VO)法建立血管性痴呆模型,8周后采用Morriss水迷宫实验测试大鼠记忆行为,海马HE染色检测神经... 目的:观察缺血性痴呆(VD)大鼠神经行为学及海马CREB的改变,并探讨两者间的关系。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎(2 vessels obstruction,2-VO)法建立血管性痴呆模型,8周后采用Morriss水迷宫实验测试大鼠记忆行为,海马HE染色检测神经元损伤,PCR及免疫组化检测海马CAl区CREB表达的变化。结果:模型组与正常组相比,大鼠认知功和神经元损伤程度明显,海马区CREB表达也明显降低(P<0.01)。结论:2-VO法成功制作了缺血性痴呆大鼠模型。模型大鼠脑内海马区CREB水平明显下降,其空间学习记忆障碍可能与海马区CREB表达下降有关。 展开更多

关键词 血管性痴呆 CREB 海马CAL区 水迷宫

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着丝粒特异性蛋白CENP-Ⅰ的原核表达、纯化及抗体制备 被引量：3

13

作者 蔡燕 翁亚光 +3 位作者 施琼 徐远久 刘子杰 王应雄 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期143-148,共6页

用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获得编码CENP-Ⅰ蛋白第1-293位氨基酸的CENP-ⅠcDNA序列,采用基因体外重组法将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)内;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析纯化获得高纯... 用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获得编码CENP-Ⅰ蛋白第1-293位氨基酸的CENP-ⅠcDNA序列,采用基因体外重组法将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)内;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白质;用纯化的蛋白质免疫家兔制备抗血清,琼脂糖免疫双扩法和Western blot鉴定得到高效价的特异性抗CENP-Ⅰ抗体. 展开更多

关键词 着丝粒特异性蛋白质 CENP-Ⅰ 染色体不稳定性

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藏花素促膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的研究 被引量：2

14

作者 赵培 罗春丽 +2 位作者 胡宏波 吕纯芳 冀慧莹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1824-1827,共4页

目的研究藏花素诱导膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的作用及分子机制。方法通过MTT比色法分析藏花素对T24细胞增殖的影响;应用光镜观察细胞形态学的改变;Annexin V-FITC/PI荧光双标流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响,RT-PC... 目的研究藏花素诱导膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的作用及分子机制。方法通过MTT比色法分析藏花素对T24细胞增殖的影响;应用光镜观察细胞形态学的改变;Annexin V-FITC/PI荧光双标流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响,RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达变化。结果藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;随藏花素作用时间的延长,G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例逐渐减少,早期凋亡细胞逐渐增多,同时可以上调Bax和下调Bcl-2的基因表达水平。结论藏花素可明显抑制T24细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能与Bcl-2和Bax等凋亡调控基因有关。 展开更多

关键词 藏花素 膀胱移行细胞癌T24细胞 细胞凋亡 BCL-2 BAX

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绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮对HL-60细胞增殖的影响 被引量：2

15

作者 王箭 阳强 +3 位作者 朱旦 王虹 安琳 翁亚光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期500-502,共3页

目的:探讨并比较绞股蓝皂甙(Gypenosides,GP)与银杏内脂黄酮影响急性髓性白血病(HL-60)细胞增殖的作用。方法:分别以不同浓度绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮,不同作用时间处理HL-60细胞株,用MTT法观察绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮对(HL-60)细胞... 目的:探讨并比较绞股蓝皂甙(Gypenosides,GP)与银杏内脂黄酮影响急性髓性白血病(HL-60)细胞增殖的作用。方法:分别以不同浓度绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮,不同作用时间处理HL-60细胞株,用MTT法观察绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮对(HL-60)细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞增殖周期情况。结果:绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮在0.025～0.8mg/ml终浓度范围内,对HL-60细胞增殖的抑制作用显著,并随药物浓度及作用时间的增加而增强(P<0.05)。两药均可显著减少G_2/M+期细胞,增加G_0/G_1期细胞,并诱导凋亡细胞峰出现。结论:绞股蓝皂甙与银杏内脂黄酮均能显著的影响HL-60细胞增殖,两种药物抑制HL-60细胞增殖的机制与干扰细胞增殖、分裂,诱导凋亡有关。 展开更多

关键词 绞股蓝皂甙 银杏内脂黄酮 凋亡 细胞周期 HL-60细胞株

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藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞VEGF-C表达水平的影响 被引量：2

16

作者 吕纯芳 罗春丽 +1 位作者 冀慧莹 赵培 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期649-651,656,共4页

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor,VEGF-C)表达水平的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度及不同时间藏花素对T24细胞抑制率,选出最佳药物浓度和最佳作用时间。用RT-... 目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor,VEGF-C)表达水平的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度及不同时间藏花素对T24细胞抑制率,选出最佳药物浓度和最佳作用时间。用RT-PCR和基因芯片分别检测最佳作用时间和最佳药物浓度作用前后T24细胞VEGF-C的表达。结果:MTT显示藏花素抑制T24细胞生长具有时间和剂量依从性,3mmol/L藏花素作用48h对T24细胞的抑制率最高。RT-PCR显示藏花素组VEGF-C表达明显减少,基因芯片扫描结果中藏花素组VEGF-C表达也显著下调。结论:藏花素抑制T24细胞增殖,可能与下调VEGF-C的表达,从而减少肿瘤血管的生成有关。 展开更多

关键词 藏花素 膀胱移行细胞癌 表皮生长因子C

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辛伐他汀抑制K562细胞MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA的表达 被引量：1

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作者 杨永长 传良敏 +4 位作者 黄文芳 刘华 曾娅莉 胥国强 刘文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期241-244,共4页

目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能... 目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能抑制K562细胞增殖,增殖抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增大(P<0.05)。与对照组比较,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48h和72h后能明显增加细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05),表明辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡。10、20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞72h后,MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-mycmRNA表达水平明显降低。结论辛伐他汀可能通过调节Ras-MAPK途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。 展开更多

关键词 辛伐他汀 K562细胞 MAPK1 CYCLIN D1 E2F1 C-MYC

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巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体的构建及靶向性研究 被引量：1

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作者 文阳安 郭金英 +5 位作者 余晓林 岑东 刘靳波 陈彦 张健 涂植光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期441-443,共3页

目的:构建巨噬细胞特异性启动子调控的靶向巨噬细胞的真核表达载体。方法:PCR方法合成巨噬细胞特异性启动子,并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1中,替代CMV启动子。利用脂质体转染法,将其与红色荧光蛋白真核表... 目的:构建巨噬细胞特异性启动子调控的靶向巨噬细胞的真核表达载体。方法:PCR方法合成巨噬细胞特异性启动子,并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1中,替代CMV启动子。利用脂质体转染法,将其与红色荧光蛋白真核表达载体(pERFP-N1)共转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察GFP和RFP在不同细胞中的表达水平来鉴定启动子的靶向性。结果:成功构建了巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体,并且能在巨噬细胞中高效特异性地表达报告基因。结论:构建的靶向巨噬细胞的真核表达载体能提高目的基因的表达特异性,为提高基因治疗胞内菌感染的靶向性及降低毒副作用奠定了实验基础。 展开更多

关键词 巨噬细胞 细胞特异性 启动子 真核表达载体 胞内菌感染 基因治疗

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hnRNP K shRNA对K562细胞效应的初步研究 被引量：1

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作者 黄莲芬 冯文莉 +1 位作者 罗宏伟 孙成铭 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期1071-1075,1147,共6页

目的:探索RNA结合蛋白K(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K)shRNA逆转录病毒对K562细胞的效应。方法:HindⅢ/EcorⅠ双酶切和测序鉴定pSUPER retro hnRNP K shRNA逆转录病毒载体,用包装得到的逆转录病毒感染K562细胞,G... 目的:探索RNA结合蛋白K(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K)shRNA逆转录病毒对K562细胞的效应。方法:HindⅢ/EcorⅠ双酶切和测序鉴定pSUPER retro hnRNP K shRNA逆转录病毒载体,用包装得到的逆转录病毒感染K562细胞,G418稳定筛选后,分别用流式细胞仪,MTT实验,瑞氏染色,RT-PCR分析细胞周期和细胞凋亡,细胞增殖,细胞形态学,hnRNP K和真核细胞翻译起始因子4E(Eukaryotic translation initiation factor-4E,eIF4E)mRNA表达变化。结果:克隆载体序列正确。与空载对照组K562细胞相比,hnRNP K干扰组G2/M期细胞比例明显增多(P<0.05),而细胞凋亡则没有显著变化(P>0.05),细胞增殖能力降低,双核和多核细胞明显增多(P<0.05),hnRNP K和eIF4E mRNA表达较空载对照组分别降低了55.22%和55.27%。结论:hnRNP K基因沉默能使K562细胞周期阻滞于G2/M期,对细胞凋亡没有显著影响,降低细胞增殖能力,下调eIF4E mRNA表达,使双核和多核细胞增多,提示该基因可能与细胞分裂有关。 展开更多

关键词 RNA结合蛋白K SHRNA 逆转录病毒载体 真核细胞翻译起始因子4E

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CAPE对神经胶质瘤生长抑制作用研究 被引量：1

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作者 郭川 唐文渊 +3 位作者 钟东 晏怡 姚声涛 刘子杰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期725-727,共3页

目的:探讨咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethyl ester,CAPE)在人神经胶质瘤中的治疗作用。方法:建立裸鼠胶质瘤模型,观察CAPE在体内对肿瘤的影响。运用实时荧光定量PCR、Westernblotting检测CAPE对胶质瘤细胞株U251异常Wnt/β-catenin... 目的:探讨咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethyl ester,CAPE)在人神经胶质瘤中的治疗作用。方法:建立裸鼠胶质瘤模型,观察CAPE在体内对肿瘤的影响。运用实时荧光定量PCR、Westernblotting检测CAPE对胶质瘤细胞株U251异常Wnt/β-catenin通路及靶基因c-myc的影响。结果:通过对荷瘤鼠模型的观察,发现口服CAPE可以抑制神经胶质瘤的生长。CAPE可以抑制β-catenin基因mRNA及蛋白的表达,下游靶基因c-myc的mRNA及蛋白表达也相应降低。结论:CAPE可以抑制神经胶质瘤异常Wnt/β-catenin通路中β-catenin基因及c-myc基因的表达,对神经胶质瘤的生长有抑制作用。 展开更多

关键词 Β-CATENIN 咖啡酸苯乙酯 神经胶质瘤

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